响应面法优化石榴皮中原花青素提取工艺

以原花青素提取液的吸光度(A550 nm)为指标,在单因素试验的基础上运用响应面试验考察乙醇溶液体积分数、料液比、提取时间和提取温度对石榴(Punica granatun)皮中原花青素提取率的影响。结果表明,石榴皮中原花青素的最佳提取工艺为乙醇溶液体积分数73%、料液比1∶28(m∶V,g/mL)、提取时间73min、提取温度80℃,采用高效液相色谱法测得此条件下所得石榴皮中原花青素的提取率为126.68 mg/g。

荔枝皮中原花青素提取工艺优化及其黄烷-3-醇HPLC分析

优化荔枝皮中原花青素超声波辅助提取工艺,并对其黄烷-3-醇类成份进行分析定量。用Box-Behnken Design设计考察荔枝皮粉碎度、料液比、超声时间和超声波功率4个因素对荔枝皮中原花青素提取的影响程度。在最佳工艺参数条件下,超声破碎荔枝皮1次,采用铁盐催化比色法和HPLC法分析得出荔枝皮黄烷-3-醇类成份及含量。荔枝皮中原花青素超声波辅助提取最佳工艺参数为荔枝皮粉碎度71.91目、料液比1:29.97(m:V)、超声时间21.75min和超声波功率390.48W。在最佳提取工艺参数下超声提取荔枝皮中原花青素1次,其吸光度值为2.157Abs,与原花青素吸光度预测值2.189 86Abs接近。通过铁盐催化比色法HPLC法分析并得出荔枝皮黄烷-3-醇类成份及含量:原花青素、没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素和表儿茶素没食子酸酯分别为89.32,1.11,87.09,3.37,31.15,7.02mg/g。

自噬基因结肠癌预后模型建立及验证

目的通过筛选结肠癌预后自噬相关基因,构建一种基于差异表达自噬基因的结肠癌预后模型,探讨其特征及临床意义。方法在癌症基因组数据库(TCGA)中,检索结肠癌的转录组数据,利用wilcox检验进行差异分析,筛选出结肠癌差异表达的自噬基因,对其进行KEGG pathway和GO功能富集分析。结合临床信息,使用COX分析筛选出结肠癌预后相关差异表达的自噬基因,构建预后风险预测模型并进行单因素及多因素回归分析验证。结果共收集524例样本,其中42例正常样本,482例结肠癌肿瘤样本;发现结肠癌差异表达自噬基因35个,其中16个基因上调,19个基因下调;GO与KEGG富集分析结果显示:差异表达的自噬基因主要分布在自噬、凋亡、氧化应激、细胞色素c释放以及肿瘤耐药方面。结合患者临床信息,本研究对差异表达自噬基因进行COX分析,共筛选出5个差异表达自噬基因WIPI2、RAB7A、ULK3、PELP1和DAPK1参与构建风险计算模型。生存曲线和风险曲线显示:本模型与患者生存率存在显著相关性,且预后模型、参与模型构建的基因与癌症分期、病人年龄均存在统计学意义。通过Real-time PCR实验检测对本模型风险值贡献最大的RAB7A基因及WIPI2基因在人正常结肠细胞(NCM460)与人结肠癌细胞(HCT116、RKO)中的表达水平,结果显示在人结肠癌细胞中RAB7A及WIPI2基因表达水平高于人正常结肠细胞(P<0.05)。结论通过COX回归分析成功地构建出基于差异表达自噬基因的结肠癌预后模型,该模型筛选的结肠癌预后自噬相关基因可作为结肠癌预后独立危险因子。

自噬和凋亡在甲型流感病毒和肺炎球菌协同感染小鼠模型中作用的初探

目的 建立甲型流感病毒（Influenza A virus,IAV）和肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）协同感染小鼠模型,在该模型中初步探索自噬和凋亡的发生情况.方法 将IAV和SP以不同顺序感染Balb/c小鼠,观察其体重变化和死亡率,检测其肺部IAV和SP滴度、病理改变情况,建立IAV ～ SP协同感染动物模型.使用免疫组化法检测自噬特征蛋白LC3及凋亡特征蛋白Caspase-3的表达情况.结果 IAV～SP组第二次感染后24 h时小鼠肺部IAV和SP滴度最高,死亡率也明显高于其他各组,48 h病理改变也最为严重.免疫组化结果显示IAV感染早期（24 h～48 h）LC3蛋白表达出现峰值,Caspase-3缓慢上升;晚期（72 h～96 h）Caspase-3蛋白表达出现峰值,而LC3蛋白表达逐渐下降.结论 本研究成功建立了1AV～ SP协同感染动物模型,模型鼠中自噬先于凋亡发生,为进一步研究自噬和凋亡在IAV～ SP协同感染中的作用奠定了基础.