高产洛伐他汀红曲霉复合诱变育种

为了提高洛伐他汀的产量,对红曲霉进行了紫外线与硫酸二乙酯复合诱变处理,并利用粗糙脉孢菌对洛伐他汀的敏感性进行初筛,再通过HPLC法测定其发酵液中洛伐他汀的产量进行复筛。最终得到一株稳定高产的目的菌株,命名为Monascus sp.UV-D-9。其洛伐他汀产量达到(0.289±0.02)mg/m L,相对于出发菌株提高了82.9%。Monascus sp.UV-D-9是一株优良的洛伐他汀生产菌株,有一定的应用价值。

高职生物化学课程教学改革的探索与实践

从教学内容整合、教学方法改进以及实验教学环节优化等方面阐述了高职生物化学教学改革尝试。实践表明,改革有效地提高了教学效果。

采用响应曲面法优化红曲色素液态发酵条件

为了提高红曲色素的产量,采用响应曲面分析法对红曲霉液态发酵条件进行了优化。通过单因素实验确定了各显著因素及水平,分别为:温度30℃,转速180 r/min,接种量6%。在此基础上运用Box-Behnken设计,进行3因素3水平实验,采用Minitab15.0软件对实验结果进行多元回归拟合,得到二次多项回归方程:红曲色素色价Y=122.9+3.98X1+4.55 X3-4.37 X12-5.57 X32+3.65 X1X2-10.9 X1X3。并获得了最优条件:温度为30℃,转速为181 r/min,接种量为6.8%,红曲色素色价的预测结果为123.8 U/mL。实验验证实际色价为(123.4±0.5)U/mL(n=3)。比未优化前产量提高了37.8%。

北五味子多糖提取条件及其抗氧化性能

运用响应曲面法优北化五味子多糖超声辅助乙醇提取条件,并对其抗氧化性能进行了研究。结果表明:乙醇浓度,料液比,提取温度对北五味子多糖提取率有显著影响,采用Box-Behnken响应面技术得到最佳提取条件为:乙醇体积分数(X1)=54.7%、料液比(X2)=1∶25、提取温度(X3)=58℃;其他条件为:超声功率200W,提取时间40 min,提取次数2次。在此条件下,北五味子多糖相对提取率为87.12%(n=3),优于传统的水提法和醇提法。北五味子多糖具有较强的抗氧化性能。

高产洛伐他汀红曲霉(Monascus sp.UV-D-9)的发酵条件优化

为了进一步提高洛伐他汀产量,对实验组前期获得的洛伐他汀高突变株Monascus sp.UV-D-9的发酵条件进行了响应曲面优化。获得最佳发酵条件为:发酵温度30.4℃,装液量134 m L,转速187 r·min-1,其他条件为发酵时间10 d,接种量8%。在此条件下,洛伐他汀的产量为(0.32±0.014)mg·m L-1(n=3),比原始条件的产量提高了10.1%。

紫外线诱变选育酸性α-淀粉酶高产菌株

研究了紫外线处理对枯草芽孢杆菌BF7658产酸性α-淀粉酶的影响。结果表明:采用30W紫外线照射90s获得较好的突变效果;利用变色圈法初筛结合摇瓶发酵复筛,筛选得到1株理想的突变株UV-12,其酶活为3418.8U/mL,比出发菌株提高了59.7%;对UV-12进行紫外线二次诱变,酶活提高不显著,表现出一定的"抗性"。

产洛伐他汀的红曲霉诱变育种研究

目的:提高红曲霉发酵生产洛伐他汀产量。方法:对红曲霉进行紫外线诱变处理,采用抑菌圈法初筛和HPLC法复筛。结果:筛选得到两株高产突变株,分别命名为UV-7、UV-12,洛伐他汀产量为0.246 mg/m L、0.249 mg/m L,较出发菌株分别提高了55.6%、57.6%;另外,红曲霉产红色素能力以及菌落特征可能与产洛伐他汀能力有一定内在联系。结论:紫外线诱变是提高红曲霉产洛伐他汀产量的一种有效方法。

洛伐他汀高产菌株的选育

为了提高红曲霉发酵生产洛伐他汀的能力,分别采用紫外线、亚硝酸、硫酸二乙酯对出发菌株(Monascus sp.)进行诱变处理。结果表明:3种诱变剂对Monascus sp.的诱变效果有较大差异,其中紫外线诱变效果最好,硫酸二乙酯次之,亚硝酸最差。通过筛选,得到2株高产突变株,分别命名为:Monascus sp.UV-5、Monascus sp.DE-8,其产量分别为0.239 mg/m L、0.223 mg/m L,比原始菌株分别提高了42.3%、32.7%。遗传稳定试验结果显示,Monascus sp.UV-5、Monascus sp.DE-8遗传性能较稳定,可应用于生产。

番石榴中毒死蜱残留分布规律

采用乙腈萃取和GC-FPD检测的方法,研究了毒死蜱在番石榴果皮、全果及果肉中的残留分布规律。结果表明:果皮中毒死蜱残留量最多,全果中次之,果肉中最少,喷药13d后,果皮、全果及果肉中的残留量分别为0.075、0.052、0.038mg/kg。随着喷药时间的延长,果皮和全果中农药的残留量降低,果肉中毒死蜱的残留趋势为先升高后逐渐降低。

紫外线诱变选育酸性α-淀粉酶高产菌株

为了提高菌株产酶能力,研究了紫外线处理对枯草芽孢杆菌BF 7658产酸性α-淀粉酶的影响。结果表明:采用30 W紫外线照射90 s获得较好的突变效果,利用变色圈法初筛结合摇瓶发酵复筛,筛选得到一株理想的突变株UV-12,其酶活为3418.8 U/mL,比出发菌株提高了59.7%。对UV-12进行紫外线二次诱变,酶活提高不显著,表现出一定"抗性"。

赤藓糖醇高产菌选育及发酵条件研究

为了提高赤藓糖醇的产量,对自选耐高渗酵母菌T-3-2进行紫外线与亚硝酸复合诱变处理,并采用响应曲面法优化了其发酵条件。复合诱变得到1株稳定高产突变株UN-11,其赤藓糖醇的产量达到78.3mg/mL,比T-3-2提高了38.8%;通过响应面分析建立了关键影响赤藓糖醇产量的二次多项式数学模型,得到最佳生产工艺条件为:发酵温度31℃、转速170r/min、接种量9.8%。模型预测结果产物浓度达到84.93mg/mL,验证实验结果产物浓度为85.25mg/mL。该模型对赤藓糖醇工业化生产有一定的指导意义。

响应曲面法优化番茄红色素的提取条件

以番茄干粉为原料,采用Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验结合Box-Behnken设计对番茄红色素的提取工艺进行响应曲面优化。研究结果表明:番茄红色素的最大吸收峰为472nm,提取温度、提取时间、Ca2+浓度对番茄红色素的提取影响显著,最陡爬坡试验表明响应中心为:提取温度50℃、提取时间110min、Ca2+12mmol/L,最后用Box-Behnken响应面技术建立了关键影响提取率的二次多项式数学模型:Y=0.902+0.09X1-0.039X2+0.046X3-0.139X12-0.104X22-0.070X32+0.056X1X2+0.068X2X3,得到最佳提取工艺为:提取温度为53℃;提取时间为111min;Ca2+的浓度为13mmol/L。模型预测结果提取率达到92.30%,验证试验结果提取率达到92.07%。

Bacillus subtilis UN_(13)产α-淀粉酶酶学性质研究

对Bacillus subtilis UN13所产生的α-淀粉酶酶学性质进行初步研究。结果表明：该酶是一种中温酸性α-淀粉酶；其最适温度为50℃，在40-60℃范围内稳定性较好；最适pH为5．5，在pH值为5．0～7．5范围内较稳定；Ca^2＋和Mn^2＋对该酶有激活作用，Cu^2＋，Zn^2＋，K^＋和EDTA则抑制该酶的活性；动力学研究表明该酶的Km值为1．7039mg／mL，Vmax值为3．1615mg／min·mL。

芽孢杆菌配伍发酵菜籽粕产中性蛋白酶条件研究

为了提高中性蛋白酶的产量,采用响应曲面法研究了微生物配伍发酵菜籽粕产中性蛋白酶的条件。确定了微生物配伍菌种为Bacillus subtilis UV-7+UN-11(1∶1);在单因素实验基础上,以中性蛋白酶活力为指标,进行BoxBehnken设计,获得最佳发酵条件为:发酵温度35.7℃,转速193r/min,接种量为7.58%,该条件下中性蛋白酶活力的理论值为2709.9U/m L,在最佳条件下进行3次验证,中性蛋白酶活力为(2714.5±2.4)U/m L,与理论预测值基本一致,比未优化前的2602.7U/m L提高了4.3%。

高职微生物学实验教学的改革与实践

从微生物实验的优化设置、教学方法的改进以及实验评价体系的改革等方面阐述了在实验教学中进行的改革尝试。实践证明,这样的改革可有效地提高实验教学质量,使之更符合高职人才培养的目标。

混菌固态发酵菜籽粕生产饲用复合酶培养基优化

为了提高混菌发酵菜籽粕产饲用复合酶的产量,采用单因素法对其发酵培养基的条件进行研究。确定最佳发酵培养基条件为:以脱毒菜籽粕为原料,添加0.1%CaCl2、1.5%NH4Cl、2%K2HPO4、0.2%MgSO4、0.5%MnSO4以及1%Tween-80。在该条件下饲用复合酶活达到5994U/g,相对原始产量提高了26.9%。

气相色谱-质谱法同时测定保鲜膜包装食品中15种邻苯二甲酸酯

以常见的保鲜膜包装食品为考察对象,研究了不同时间保鲜膜中邻苯二甲酸酯类化合物(PAEs)在食品中的迁移情况;建立了15种邻苯二甲酸酯(PAEs)的气相色谱-电子轰击离子源质谱(GC-EI/MS)测定方法。结果表明:该方法具有良好的线性关系,相关系数不低于0.9991,加标回收率为85%～105%,相对标准偏差在5.1%～9.5%,15种邻苯二甲酸酯(PAEs)的检出限为0.010～0.045μg.kg-1。该方法具有简单、快速、灵敏度高和定性定量准确等优点,满足实际样品的分析要求。

紫外线与亚硝酸复合诱变选育中性蛋白酶高产菌株

研究紫外线与亚硝酸复合处理对枯草芽孢杆菌As1.398产中性蛋白酶的影响。确定复合诱变条件:先用30W紫外线照射60s,筛选出诱变效果好的菌株再用0.15mol/L的亚硝酸处理20min。筛选得到一株稳定、高产突变株UN-11,其酶活为2665.2U/mL,比出发菌株提高了75.3%,传代10次相对酶活均在98%以上。

正交法优化番茄红色素的提取条件

采用单因素及正交试验方法对番茄干粉中番茄红色素的提取条件进行研究。研究结果表明:番茄红色素的最大吸收峰为472nm,单因素试验确定了对番茄红色素的提取影响显著的因素,分别为提取温度、液料比和pH值。在此基础上进行正交试验,得到最佳提取条件为提取温度50℃、液料比12:1和pH值6。在此条件下超声处理30min,提取2次,提取率达到(92.2±0.3)%(n=3)。