hsa_circ_0005389在新生儿急性呼吸窘迫综合征细胞炎症模型中的作用研究

目的:基于人环状RNA(circular RNA,circRNA)高通量测序和生物信息学分析结果,研究hsa_circ_0005389与新生儿急性呼吸窘迫综合征(neonatal acuterespiratorydistresssyndrome,NARDS)的关系,以期为NARDS的诊断和治疗提供新的方向。方法:建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤细胞模型。通过RT⁃qPCR及Western blot检测炎性标志物及相关通路指标在阴性对照组和敲低hsa_circ_0005389表达的干预组中的表达变化情况,同时用CCK⁃8与流式细胞仪检测正常A549细胞与建立急性肺损伤模型的A549细胞敲低或者过表达hsa_circ_0005389后的增殖与凋亡情况。结果:RT⁃qPCR及Western blot结果显示,A549细胞暴露于10μg/cm^(2)LPS 48 h时,各炎性标志物及相关通路指标高表达(P<0.05)。与阴性对照组相比,敲低hsa_circ_0005389表达后,A549细胞中可溶性肿瘤坏死因子受体1(soluble tumornecrosisfactorreceptor 1,sTNFR1)mRNA相对表达量和肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosisfactorα,TNF⁃α)蛋白表达量显著降低(P<0.05);在急性肺损伤模型中,敲低hsa_circ_0005389表达后,各炎性标志物及相关通路指标mRNA相对表达量均下降(P<0.001)。CCK⁃8与流式细胞仪检测结果显示,与阴性对照组相比,敲低hsa_circ_0005389表达的A549细胞增殖加快,凋亡率降低(P<0.05),而过表达hsa_circ_0005389后A549细胞增殖减慢,凋亡率增加(P<0.05)。结论:急性肺损伤细胞模型中,hsa_circ_0005389促进肺损伤炎性标志物的表达,并且影响肺上皮细胞的增殖和凋亡,提示hsa_circ_0005389参与NARDS的炎症过程,可能是NARDS潜在的干预靶标。

基于高通量测序分析早期新生儿肠道和咽部微生物菌群

目的 初步探讨早期新生儿肠道和咽部微生物群的分布特点及相关性。方法 选取上海市浦东新区妇幼保健院2021年9月—2022年1月出生的混合喂养的足月健康新生儿为研究对象。采用16S rRNA基因测序技术分析新生儿出生当天及出生后5~7 d的粪便和咽拭子样本,分析比较早期新生儿肠道和咽部微生物群的组成及功能差异。结果 多样性分析表明,早期新生儿咽部微生物群的多样性高于肠道,但差异无统计学意义(P>0.05)。门水平上,出生当天肠道变形菌门相对丰度高于咽部(P<0.05);出生后5~7 d肠道放线菌门和变形菌门相对丰度高于咽部、厚壁菌门相对丰度低于咽部(P<0.05)。属水平上,出生当天肠道和咽部的优势菌属组成差异无统计学意义(P>0.05);出生后5~7 d肠道和咽部的链球菌属、葡萄球菌属、罗氏菌属、双歧杆菌属及埃希菌-志贺菌属等共生菌差异有统计学意义(P<0.05)。直系同源序列聚类数据库分析显示,咽部菌群更多地集中在染色质结构和动力学及细胞骨架上,而肠道菌群在RNA加工修饰、能量生成和转换、氨基酸转运代谢、碳水化合物转运代谢、辅酶转运和代谢等方面表现丰富(P<0.05)。京都基因和基因组百科全书分析显示,与咽部菌群相比,肠道菌群对细胞运动、细胞进程和信号转导、内分泌系统、排泄系统、免疫系统、代谢性疾病、神经系统和转录功能参数的预测程度更高(P<0.05)。结论 新生儿出生时肠道和咽部的微生物群组成及多样性无显著差异,随着出生时间的推移,两个生态位的微生物群组成开始出现分化,并逐渐显现出各自不同的功能。

不同喂养方式对早期新生儿口咽微生态菌群的影响

目的:初步探讨足月健康早期新生儿口咽微生态中菌群分布的特点及不同喂养方式对早期新生儿口咽微生态菌群定植的影响。方法:选取2021年9月-2022年2月于上海市浦东新区妇幼保健院产科出生的20例足月健康新生儿为研究对象,纯母乳喂养8例、混合喂养12例。采集新生儿出生当天及生后第5~7天的咽拭子样本,利用Illumina Miseq^(TM)/Hiseq^(TM)平台对细菌16S rRNA的V3~V4可变区进行DNA测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果:①40个咽拭子样本中共发现门36个,纲84个,目144个,科292个,属736个。②足月健康新生儿从出生到生后5~7天,新生儿口咽部菌群的相对丰富度及多样性逐渐降低,个体间差异显著缩小;纯母乳喂养的早期新生儿口咽菌群α多样性低于混合喂养新生儿。③在门水平上,不同喂养组的主要门均为变形菌门、厚壁菌门、放线菌门和拟杆菌门,4个优势菌门的相对丰度组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。与第1天相比,第5~7天纯母乳喂养组中厚壁菌门(P=0.008)、放线菌门(P=0.844)、拟杆菌门(P=0.250)的相对丰度上升,变形菌门的相对丰度下降(P=0.055);而混合喂养组中厚壁菌门(P<0.001)、放线菌门(P=0.733)的相对丰度上升,变形菌门(P<0.001)、拟杆菌门(P=0.027)的相对丰度下降。④在属水平上,出生当天以慢生根瘤菌属、葡萄球菌属、不动杆菌属、伯克氏菌属、链球菌属为主要属,随着出生时间的推移,生后5~7天链球菌属、葡萄球菌属、拟杆菌属、罗氏菌属、双歧杆菌属上升为主要属;不同喂养组均以链球菌属和葡萄球菌属为优势属,纯母乳喂养组中拟杆菌属、罗氏菌属、双歧杆菌属等厌氧菌的丰度高于混合喂养组。结论:新生儿生后早期口咽微生态菌群的多样性逐渐降低,稳定性逐渐增加;且不同喂养方式对早期新生儿口咽部菌群定植与分布存在一定的影响,纯母乳喂养有助于新生儿口咽部厌氧菌的早期定植。