负载化疗药物的外泌体对肝癌的靶向治疗研究

目的:在小鼠肝癌皮下瘤模型中探究肝癌靶向肽介导负载甲氨蝶呤(MTX)的肝癌细胞来源外泌体(tumor-derived exosome-TEX)的抗肿瘤效果及不良反应。方法:利用超速离心法收集负载MTX的小鼠肝癌细胞来源的外泌体(TEXMTX);利用外泌体特异锚定短肽CP05将肝癌靶向肽SP94修饰在TEXMTX表面,活体成像检测靶向肽修饰的TEXMTX能否高效靶向肝癌组织;通过尾静脉注射荷瘤鼠,评估该靶向肽修饰的TEXMTX的抑瘤效果,同时检测治疗后各组小鼠血生化指标及组织形态学染色,评估该药物生物安全性。结果:负载MTX并不影响外泌体的基本结构和形态特征;SP94可将TEXMTX高效靶向运输到肿瘤部位;在皮下抑瘤实验中,与PBS组相比,SP94-CP05-TEXMTX能够显著抑制小鼠肝癌皮下瘤的生长(t=5.811,P<0.01),与MTX组和TEXMTX组相比,SP94-CP05-TEXMTX组肿瘤体积也显著减小(t=2.573、3.152,均P<0.05);血生化指标和病理指标显示,与PBS组相比,MTX组和TEXMTX组小鼠血清谷草转氨酶水平显著升高(t=7.084、5.260,均P<0.05)。与MTX组和TEXMTX组相比,SP94-CP05-TEXMTX组小鼠谷草转氨酶水平显著下降(t=6.241、4.955,均P<0.05);SP94-CP05-TEXMTX组与MTX组相比,小鼠血清肌酸激酶水平也显著下降(t=5.073,P<0.05)。结论:肝癌靶向肽修饰的TEXMTX可将MTX靶向运输到肝细胞癌组织,有效抑制肿瘤生长,提高化疗药物的生物安全性。

缺氧诱导因子2α对含CUB结构域蛋白1的调控及在肝癌转移中的作用

目的探讨缺氧诱导因子2α（HIF-2α）对CUB结构域蛋白1（CDCP1）的调控及其在肝癌转移中的作用。方法采用小干扰RNA（siRNA）和慢病毒转染的方法敲减和稳定过表达HIF-2α的肝癌细胞系MHCC97H，采用Western blot和实时荧光定量PCR检测CDCP1mRNA和蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测HIF-2α对细胞侵袭能力的影响，采用免疫组化染色方法检测肝癌组织标本中CDCP1的表达。结果HIF-2α和CDCP1均能在乏氧条件下被诱导，且CDCP1在乏氧条件下的活化依赖于HIF-2α的表达。在肝癌细胞中，CDCP1在转录和翻译水平均受到HIF-2α的调控，过表达HIF-2α后，CDCP1mRNA的表达水平为5．92±0．28，高于阴性对照组（1．00±0．12），差异有统计学意义（P〈0．05）：敲减HIF-2α 48h和72h后，MHCC97H细胞中CDCP1mRNA的表达水平分别为0．25±0．04和0．18±0．02，均低于对照组（分别为1．00±0．18和1．00±0．19），差异均有统计学意义（均P〈0．05）。CDCP1的表达与患者的无瘤生存有关（P〈0．05）。结论CDCP1的表达与肝癌的进展有关，CDCP1的表达受HIF-2α的调控。通过靶向抑制HIF-2α和（或）CDCP1的表达可能对肝癌转移起到一定的抑制作用。