Nested PCR检测狂犬病病毒方法的建立及病毒在小鼠体内的移行动态

应用建立的 Nested PCR特异地检出狂犬病病毒株 CVS、 HEP-Flury、ERA、RC-HL、 1 0 88、Komatsugawa的 RNA,但对类狂犬病病毒 Lagos bat、Duvenhage、Mokola及水泡性口膜炎病毒、轮状病毒、犬瘟热病毒均为阴性。该法敏感性很高 ,能检出 3TCID5 0 或 0 .8pg的狂犬病病毒 RNA。用该法测定了小鼠脑内感染 CVS株后的病毒增殖和移行动态 ,对感染小鼠的主要内脏器官进行了病毒 RNA检测 ,结果发现小鼠脑内感染 CVS 5d以后在其心、肝、脾、肺等内脏器官均检出了病毒 RNA。

应用杆状病毒载体表达狂犬病病毒糖蛋白

本试验利用杆状病毒载体成功地表达狂犬病病毒糖 (G) 蛋白。从转染重组了日本动物用狂犬病病毒疫苗株RC HL株G蛋白基因的转移载体和野生型杆状病毒DNA 的Sf 9 细胞中, 分离出2 个重组杆状病毒克隆。应用印渍法和荧光抗体法(IFA) 从重组杆状病毒感染的Sf 9 细胞检出了狂犬病毒G 蛋白。Sf9 细胞表达的G 蛋白与狂犬病毒RC HL株感染NA 细胞的G蛋白的分子量一致。35 个抗RC HL株G蛋白的单克隆抗体均与重组杆状病毒感染的Sf 9 细胞反应, 表明表达的G蛋白的抗原性没有发生变异。表达的G蛋白主要分布在Sf 9 细胞的膜表面, 形成类似环状的荧光,这种荧光与RC HL株感染的NA 细胞的荧光相同。