齿龈内阿米巴致病作用的动物实验

目的 研究齿龈内阿米巴 (Entamoeba gingivalis,E.g.)的致病作用及其与牙周病的关系。 方法 大鼠经免疫抑制剂处理 1wk,并于切牙颈部结扎钢丝后 ,随机分为 3组 ,分别于龈缘涂抹 E.g.、共生菌 (symbioticbacteria,s.b.)及生理盐水 ,观察各组大鼠牙周组织发病情况 ,并查脓液中有无活的病原体。 结果 E.g.组大鼠牙周组织发病率高于 s.b.组和对照组 (P<0 .0 5 ) ,s.b.组大鼠发病率亦高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,脓液镜检或经培养均查见相应的病原体。 结论 齿龈内阿米巴是一种条件致病病原体 ,当宿主免疫力下降时 。

应用改良导流杂交法检测103例妇女HPV基因型

目的:探讨改良导流杂交法在宫颈病变患者的人类乳头状瘤病毒(HPV)基因型检测中的应用价值。方法:应用改良导流杂交法检测103例宫颈癌筛查患者(宫颈癌组29例,炎症组33例和正常组41例)的宫颈细胞21种HPV基因型,并对其中的宫颈癌组同时采用杂交捕获二代系统(HC-II)行13种高危基因型HPV检测。比较两种方法检测不同HPV基因型的阳性率差异。计算用改良导流杂交法检测的各组患者不同HPV基因型的阳性率。结果:在103例研究对象中,改良导流杂交法HPV基因型检测的阳性率达46.6%,宫颈癌组、炎症组及正常组的阳性率分别为96.6%、39.4%和17.1%,各组间差别有显著性差异(P<0.005);宫颈癌患者前10位的基因型是HPV-16(16.5%)、HPV-58(7.8%)、HPV-52(7.8%)、HPV-18(5.8%)、HPV-31(5.8%)、HPV-6(4.9%)、CP8304(4.9%)、HPV-39(3.9%)、HPV-68(3.9%)和HPV-11(3.9%),而且存在HPV双重以上的感染。与HC-II检测结果的符合率达96.6%(28/29)。结论:改良导流杂交法与HC-II检测结果无差异性,可用于检测宫颈病变患者的HPV基因型。本组宫颈癌患者最常见的5种HPV基因型可能是HPV-16、HPV-58、HPV-52、HPV-18和HPV-31,且存在更多的HPV双重以上的感染。

Taqman探针实时荧光定量PCR检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平及其临床意义

目的:运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和Taqman探针,运用Taqman探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例乙型肝炎(hepatitis B)患者、15例丙型肝炎(hepatitis C)患者、15例正常对照者(HC)、11例肝癌术后(PHCC)患者及10例肝癌术后复发(recurrence)患者血清中miR-122的表达水平,并分析miR-122与肝脏疾病相关标志物的关系。结果:Taqman探针实时荧光定量PCR方法能检测血清中miR-122的表达。HCC、hepatitis B、hepatitis C及recurrence患者血清中miR-122的表达水平均高于HC和PH-CC患者(P<0.05),hepatitis C患者血清miR-122表达水平高于HCC、hepatitis B和recurrence患者(P<0.05),但HCC、hepatitis B和recurrence患者血清miR-122的表达水平无明显差异(P>0.05),PHCC患者血清miR-122的表达水平比HCC和recurrence患者低(P<0.05)。血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性和(或)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与miR-122的表达水平有正相关性(r=0.34,P<0.05)。血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L组血清miR-122的表达高于AFP<400μg/L组(P<0.05)。结论:Taqman探针实时荧光定量PCR适用于检测血清miR-122的表达水平。在HCC、hepatitis B、hepatitisC及recurrence患者血清中miR-22均有不同程度的增高,尤其是hepatitis C患者,且PHCC患者血清miR-122表达下降,复发后升高。血清miR-122的表达与肝脏疾病的某些指标有关,提示血清miR-122可作为肝脏疾病,特别是肝癌早期诊断、手术疗效及预后判断的新指标。

血清miR-21在糖尿病肾病中的诊断价值

目的：评价血清miR-21对糖尿病肾病的诊断价值,探讨糖尿病肾病诊断的分子标志物.方法：对25例糖尿病肾病患者、25例Ⅱ型糖尿病患者A[尿微量白蛋白（UmAlb）＜14.29 mg/L]、25例Ⅱ型糖尿病患者B（UmAlb＞14.29 mg/L）、25例糖尿病肾病引发的尿毒症患者及25例正常对照组的血清标本进行总RNA提取,并进行miR-21的实时荧光定量PCR检测,分析血清miR-21相对表达量与相关临床指标的关系,评估血清miR-21对糖尿病肾病的诊断效能.结果：miR-21在糖尿病肾病患者血清中的相对表达量显著低于正常对照组、糖尿病A组及B组,同时显著高于尿毒症组（均P＜0.01）,糖尿病肾病患者血清miR-21水平与胱抑素C、UmAlb、UmAlb/尿肌酐呈显著负相关（P〈0.01,P〈0.05,P〈0.05）.经logistic回归及ROC曲线分析,血清miR-21在糖尿病肾病患者与正常对照组、糖尿病A组、糖尿病B组、糖尿病A组＋正常对照组、糖尿病B组＋正常对照组和糖尿病A组＋糖尿病B组中诊断糖尿病肾病的曲线下面积（AUC）为0.848（95%CI：0.737～0.959）、0.896（95%CI：0.812～0.980）、0.782（95%CI：0.641～0.922）、0.838（95%CI：0.743～0.933）、0.796（95%CI：0.675～0.917）和0.808（95%CI：0.704～0.911）,敏感性和特异性分别为80.0%和72.0%、72.0%和88.0%、72.0%和84.0%、76.0%和77.0%、76.0%和82.0%、70.0%和86.0%;在4组人群中诊断糖尿病肾病的AUC为0.845（95%CI：0.752～0.939）,敏感性和特异性分别为76.0%和77.3%.结论：血清miR-21可作为糖尿病肾病的分子诊断标志物.

齿龈内阿米巴的连续培养与致病性研究

[目的 ]建立齿龈内阿米巴 (Entamoeba gingivalis,E.g.)的连续培养方法和研究虫体的致病性。 [方法 ]比较不同培养条件下虫体生长繁殖情况 ,调查人群感染 E.g.情况及观察感染 E.g.与唾液中酸性磷酸酶含量的关系 ,大鼠实验观察 E.g.感染与牙周脓肿的关系 ,E.g.体外实验观察甲硝唑的杀虫效果。 [结果 ]虫体最适培养条件为 :改良的 L ES培养基中加含 2 0 %小牛血清的 L ocke液、青霉素、链霉素和米粉 ,p H6 .7于 35℃培养 ,第4天虫体繁殖达高峰 ,可存活 12 0～ 16 8h;E.g.检测阳性的牙周病患者其酸性磷酸酶和脂质过氧化的终产物(MDA)含量高于阴性者 ,牙周脓肿患者 E.g.感染率高于健康人群。E.g.可致大鼠牙周脓肿 ,甲硝唑与绣球花叶(SBF)杀 E.g.有良效。 [结论 ]E.g.在改良的 L ES培养基中生长良好 ,当宿主免疫力低下时 E.g.

用巢氏PCR检测防止香港型地中海贫血漏诊

目的探讨经α-地中海贫血基因诊断试剂盒检测为-α3.7/αα(右向缺失,静止型)的样本中是否携带anti4.2片段,以判断是否存在漏诊的香港型地中海贫血(HKαα)。方法设计HKαα和anti4.2片段的引物,用巢式PCR检测50例-α3.7/αα样本中是否存在anti4.2片段,并结合平均红细胞体积(MCV)及血红蛋白A2(HbA2)比较分析。结果巢式PCR结果表明,50例-α3.7/αα样本中存在8例为HKαα型,漏诊率为16%;且HKαα携带者的MCV明显高于-α3.7/αα携带者,差异有统计学意义(t=7.04,P<0.05)。结论巢式PCR可鉴别HKαα与-α3.7/αα携带者,提高其检出率。

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究进展

鲍曼不动杆菌是一种非发酵革兰阴性杆菌,近年来临床耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌检出率不断上升,成为医院感染中最重要的致病菌之一。鲍曼不动杆菌因其强大的生存力、极高的耐药率引起了广泛地关注。其耐药机制主要包括碳青霉烯酶产生、外膜孔蛋白改变、外排泵活性增强、青霉素结合蛋白位点改变及整合子机制。本文就鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究进展做一综述。

铜绿假单胞菌的耐药现状及外膜孔蛋白分析

目的:总结分析我院2007年-2009年铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药状况,以指导临床合理选用抗生素,同时探讨外膜孔蛋白缺失介导的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制。方法:采用PCR方法检测外膜孔蛋白OprD的编码基因,利用Whonet 5.4软件对药敏资料进行统计分析。结果:3年中铜绿假单胞菌每年的分离数量分别为132株、159株和173株,分离率分别为13.6%、14.1%和19.3%,主要分离至呼吸内科和ICU病房,标本类型则以痰液为主,474株铜绿假单胞菌对米诺环素和莫西沙星的耐药率最高,分别是89.50%和81.50%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为37.1%和34.80%,多重耐药菌株占49.50%,其中7.80%为泛耐药菌株。随机选择的8株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中,有一株外膜孔蛋白OprD编码基因出现缺失。结论:铜绿假单胞菌整体耐药现象比较严重,对亚胺培南的耐药率也较高;OprD的缺少是引起本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的机制之一。

家族性和三阴性乳腺癌血清中miR-21的表达

目的:检测血清miR-21在乳腺癌中的表达差异,为进一步阐明miR-21在家族性和三阴性乳腺癌发病机制中的作用.方法:收集健康女性体检者、具有患乳腺癌高风险者、不同种类乳腺癌患者的血清.以线虫miR-39为外参,通过实时荧光定量PCR检测77份血清中miR-21的表达水平.结果:家族性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组和乳腺癌高风险组血清miR-21水平显著高于正常对照组、其他乳腺癌组(P<0.01).血清miR-21的表达水平与淋巴结转移、Ki67高表达有关(P<0.01).结果显示血清miR-21表达量在家族性和三阴性乳腺癌中升高,且与淋巴结转移和Ki67表达有关.结论:血清miR-21与三阴性、家族性乳腺癌的发生有紧密联系,其表达增高与乳腺癌的遗传性、恶性程度及预后判断有关.

齿龈内阿米巴的连续培养及其生长情况

目的： 建立齿龈内阿米巴（ Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ， Ｅｇ） Ｆ Ｊ４ 的连续培养方法， 并观察其生长情况。方法： 在不同培养条件下观察 Ｅｇ虫体大小及其存活时间。结果： Ｅｇ在改良的 Ｌｏｃｋｅｅｇｇｓｅｒｕｍ 与改良的ｙｏｌｋｅｇｇｓｅｒｕｍ 培养基中生长良好， 建立了福建３ 株 Ｅｇ（ Ｆ Ｊ２ 、 Ｆ Ｊ３ 及 Ｆ Ｊ４） ， 虫体大小均值为１３１９ μｍ ～４３９３ μｍ ×９８８ μｍ ～３０７４ μｍ 。 Ｅｇ最适宜培养条件为ｐ Ｈ 在６４ ～６７ 、改良的 Ｌｏｃｋｅｅｇｇｓｅｒｕｍ 或蛋黄液含２０ ％ 小牛血清加青霉素、链霉素及米粉。虫体繁殖高峰为ｄ４ ， 其在上述培养液体中可存活１２０ ｈ ～１６８ ｈ 。结论： Ｅｇ在 Ｌｏｃｋｅｅｇｇｓｅｒｕｍ 与 Ｙｏｌｋｅｇｇｓｅｒｕｍ 培养基中生长良好， 每４ ｄ 转种１ 次， 可达到长期培养的效果。

茎环引物的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测miR-155表达及其临床初步应用

目的建立茎环状逆转录引物（简称茎环引物）的SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）,并作初步应用。方法应用SYBR GreenⅠ实时FQ-PCR检测CD4＋T细胞株的miR-155,初步验证方法的可行性。用所建立的方法对60份临床宫颈刮取物标本进行检测,分析miR-155与宫颈癌及感染的高危型人类乳头状瘤病毒（HPV）基因型别的关系,其聚合酶链反应（PCR）反应产物通过电泳验证产物特异性。结果所建方法能特异的检测到miR-155的扩增信号,最低检出限为10^-7nmol/L,在10^-1-10^-6nmol/L之间有良好的线性关系,相关系数（r）为0.99,扩增后惟一的熔解曲线特异峰显示很好的特异性。CD4^＋T细胞株及60例临床宫颈刮取物标本miR-155均显示阳性,PCR反应产物电泳可获得单一条带。宫颈刮取物miR-155与宫颈癌有关（P〈0.05）,但与本研究涉及的HPV基因型别无关（P〉0.05）。结论所建立的茎环引物的SYBR GreenⅠ实时FQ-PCR能快速、敏感、特异地检测细胞株和临床宫颈刮取物miR-155的表达水平,为进一步研究miR-155及其临床应用奠定了基础。

桂西地区疟疾感染人群红细胞CD59分子表达研究

疟疾曾广泛流行于广西桂西南等中国西南低纬度地区, 红细胞不仅为疟原虫提供食物和寄生场所, 而且疟疾感染的许多病理特征都跟疟原虫与感染红细胞及其他组织相互作用有关。许多研究显示, 疟疾的感染与红细胞免疫功能有关, 在红细胞膜表面存在着大量的免疫相关分子, 它们可能是红细胞发挥抗疟免疫功能的重要分子基础, 本研究运用流式细胞术测定红细胞表面分子CD59表达, 初步探讨了疟疾的感染与红细胞免疫功能关系。

UF-500i尿液分析仪及SE-9000i血细胞分析仪在浆膜腔积液白细胞计数中的对比性研究

目的研究UF-500i尿液分析仪及SE-9000i型血细胞分析仪在浆膜腔积液白细胞计数中的应用。方法应用UF-500i尿液分析仪及SE-9000i型血细胞分析仪对浆膜腔进行白细胞计数检测,并作统计学分析。结果手工计数法、UF-500i尿液分析仪及SE-9000i型血细胞分析仪检测法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Sysmex UF-500i尿液分析仪用于浆膜腔积液标本的细胞计数,简便、快速、重复性好,可以替代显微镜计数法测定浆膜腔积液白细胞数、上皮细胞数和非肉眼血性标本的红细胞数,而肉眼血性浆膜腔积液的红细胞计数不能用UF-500i尿沉渣分析仪检测。

miR-155-5p在宫颈癌血清中的表达及其对宫颈癌细胞的影响

目的:检测miR-155-5p在不同宫颈疾病患者血清中的表达差异,并分析其对宫颈癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,探讨miR-155-5p在宫颈癌发生、发展中的可能作用机制。方法:采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,检测并分析比较miR-155-5p在不同宫颈疾病患者血清中的表达差异。利用miR-155-5p mimic或inhibitor提高或降低宫颈癌细胞中miR-155-5p的表达。CCK-8法和流式细胞术检测宫颈癌细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果:宫颈癌组血清中miR-155-5p的表达高于宫颈炎组和健康对照组(P<0.05),宫颈上皮内瘤样病变组和宫颈癌组血清中miR-155-5p的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染100 nmol/L和200 nmol/L miR-155-5p mimic的SiHa细胞中,S期细胞比例升高,凋亡细胞比例降低(P<0.05)。转染100 nmol/L和200 nmol/L miR-155-5p inhibitor的SiHa细胞中,G2/M期细胞比例明显增多(P<0.05)。结论:(1)宫颈癌患者血清中miR-155-5p表达较健康对照人群上调,可能作为宫颈癌早期诊断的肿瘤分子标志物。(2)miR-155-5p对宫颈癌HeLa细胞增殖、细胞周期和凋亡无明显影响。(3)miR-155-5p可促进宫颈癌SiHa细胞进入S期,并抑制SiHa细胞凋亡,提示miR-155-5p可能在宫颈鳞癌发生、发展中起作用。

齿龈内阿米巴培养方法的研究

本文报道了齿龈内阿米巴（Ｅｎｔａｍｏｅｂａｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ，Ｅｇ）福建株是在改良的ＬＥＳ双相培养基内含２０％小牛血清，培养起始ｐＨ为５．８、于３５±０．５℃下培养分离建立起来的虫株。而抗坏血酸（Ｖｉｔｃ）及柠檬酸铁铵的添加对Ｅｇ生长无促进作用。该株Ｅｇ共生的四种细菌经分离鉴定为：普通变形杆菌、大肠埃希氏菌、表皮葡萄球菌和微球菌属细菌。由于这是国内首次报道建立Ｅｇ虫株的体外培养，它对进一步研究这种口腔原虫与牙周病的关系以及牙周病的防治有重要意义。

齿龈内阿米巴引起牙周炎及其致病机制的研究

目的 研究齿龈内阿米巴 ( Entamoeba gingivalis,E.g.)与牙周炎的关系及其致病机制。 方法 给大鼠免疫抑制剂 ,于下颌切牙颈部结扎细钢丝 ,在 E.g.组和对照组大鼠龈缘涂抹 E.g.或生理盐水 ,观察大鼠发病和病理改变情况 ;检测感染 E.g.的牙周炎患者唾液中的超氧化物歧化酶 ( SOD)、过氧化氢酶 ( CAT)、酸性磷酸酶 ( ACP)和丙二醛 ( MDA)含量 ;应用电镜细胞化学技术观察 E.g.的细胞器。 结果 大鼠牙龈上皮组织溃疡、炎症细胞浸润、牙龈沟内上皮增生、牙周脓肿形成、牙槽骨吸收和脓液查见活 E.g.,对照组未见病理改变 ;感染 E.g.的牙周炎患者的 SOD较正常组低 ( P<0 .0 1) ,而 CAT两组间差异不明显 ( P>0 .0 5 ) ,ACP与 MDA含量显著高于正常组 (均 P<0 .0 1) ;E.g.的伪足粘附、伸入口腔上皮细胞微绒毛之间 ,溶酶体标志酶反应阳性。 结论 当宿主免疫力降低时 ,E.g.可致宿主牙周炎。虫体伪足的活动 ,溶酶体含 ACP等水解酶对牙周组织的溶解、破坏与氧自由基对细胞膜的损害是虫体引起牙周炎的重要致病机制。

常用消毒剂对念珠菌最小杀菌浓度的测定

在实验室内测定了８种常用消毒剂对８种２５株念珠菌的最小杀菌浓度。结果表明，不同消毒剂对同种念珠菌的杀灭作用不一致，同一消毒剂对不同种念珠菌的杀灭作用亦相异，但对同种内不同株者无差别。在各种念珠菌中，以白色念珠菌与热带念珠菌的抗力较强，其它种念珠菌较弱，且基本相似。ｐＨ与作用时间变化可影响消毒效果。

中性粒细胞/淋巴细胞计数与降钙素原对肿瘤患者合并细菌感染的诊断价值

目的:探讨中性粒细胞/淋巴细胞计数(NLR)和降钙素原(PCT)对肿瘤患者合并细菌感染的预测诊断价值。方法:研究对象为380例肿瘤患者,其中感染组215例,非感染组165例。测定患者血常规和PCT水平,获取中性粒细胞和淋巴细胞计数,计算出NLR值。通过ROC曲线评价PCT和NLR以及两者联合对肿瘤患者合并细菌感染的早期诊断意义。结果:肿瘤患者感染组的NLR和PCT水平显著高于非感染组(P<0.001),ROC曲线分析结果显示,PCT曲线下面积(AUC)为0.750、检测灵敏度50.7%、特异度88.5%,NLR为0.741、88.8%、57.6%,两者联合时三个指标分别为0.823、94.4%、61.2%。结论:PCT和NLR对肿瘤患者合并细菌感染患者具有诊断价值,当两者联合检测时,检验灵敏度提高,联合检测可以成为预测肿瘤患者细菌感染生物标志物。