成骨不全14种长链非编码RNA差异表达分析

目的研究14种长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)在成骨不全骨组织中的表达。方法采用先天性骻关节脱位患者骨组织作为对照,应用RT-q PCR分析成骨不全骨组织中14种lnc RNA(ATB、EBIC、HEIH、h LACR1、HOTAIR、PVT1、LET、Loc285194、SRHC、LSINCTS、Nbla10727、Nbla12061、PRNCR1与UC.388)的表达,使用REST-2009软件进行数据统计分析。结果与对照组相比,14种lnc RNA中仅PRNCR1表达下调并具有显著性差异;ATB、EBIC、HOTAIR、PVT1、LET、Loc285194、SRHC等7种lnc RNA表达差异均小于2倍,LSINCTS表达下调,HEIH、h LACR1、Nbla10727、Nbla12061与UC.388等5种lnc RNA表达上调,但均无统计学意义。结论 PRNCR1在成骨不全骨组织中低表达,其在成骨不全疾病的功能尚有待于进一步研究。

成骨不全病人原代成骨细胞中胶原蛋白提取方法改良

目的：本文对成骨不全患者骨骼中胶原蛋白的提取方法进行探讨，拟建立较为稳定的和可控的提取技术。为该病的治疗寻找新思路。方法：选取成骨不全患者在接受外科矫形手术中废弃的骨骼组织，经原代细胞培养后，采用盐析法配合胃蛋白酶消化提取细胞内和培养液中胶原蛋白。分别选取0．05～0．2mM抗坏血酸、0．1～0．25mMβ-氨基丙腈（BAPN）、0．5-1．5mg／mL胃蛋白酶进行梯度实验，比较胶原蛋白提取效果。抗坏血酸作用时间2到5天，每间隔24小时取样一次。胃蛋白酶作用时间，分别为5小时、10小时和20小时三个时间点进行比对。结果：从细胞中和培养液中提取的胶原蛋白，最适的胃蛋白酶消化时间为5小时，作用浓度1mg／mL。培养液中抗坏血酸浓度在0．1-0．15mM之间，β-氨基丙腈浓度达到0．1mM时，连续培养96h以上胶原蛋白产出量较高。结论：实验初步说明，通过优化后的胶原蛋白提取方法，可有效提取患者原代成骨细胞及细胞培养液中的胶原蛋白，

大鼠骨髓间充质干细胞原代培养及成骨成脂分化能力染色鉴定

目的实验旨在建立一套简便有效的骨髓间充质干细胞原代培养、诱导分化及染色方法,观测骨髓间充质干细胞生物学特性,及其成骨、成脂分化潜能,为后续进行骨髓间充质干细胞基因修饰实验做好准备。方法本实验通过全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞,并用诱导分化培养液做定向诱导培养,观察骨髓间充质干细胞向成骨及成脂肪细胞分化过程中的细胞形态学变化,进行成骨成脂细胞染色鉴定,以探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法、生长规律及向成骨成脂细胞分化的条件。结果 (1)通过全贴壁法成功进行了骨髓间充质干细胞原代及传代培养并绘制出第4代细胞生长曲线;(2)通过茜素红染色验证了骨髓间充质干细胞的成骨分化能力;(3)通过油红O染色验证骨髓间充质干细胞的成脂分化能力。结论全贴壁法提取的大鼠骨髓间充质干细胞经传代4次左右可达到一定纯度,在一定诱导条件下,经特定染色方法鉴定,可分化为成骨细胞,成脂细胞。