淋巴瘤证型及其“痰瘀”证素与趋化因子及凝血指标的相关性研究

目的分析淋巴瘤证型和主要病性证素“痰瘀”与常见趋化因子及其受体、凝血指标的相关性,初步探讨淋巴瘤“痰瘀”证素的现代科学本质。方法选择198例淋巴瘤患者,统计并分析不同证型患者趋化因子及受体(CXCL2、CXCR2、CXCL8、CXCL12、CXCR4)和凝血指标(PT、APTT、FIB、FDP、D-D)水平差异;并采用二元Logistic回归分析探讨“痰”、“瘀”与上述各指标的相关性。结果CXCL2、CXCR2、CXCR4、CXCL8、PT、APTT、FIB、FDP、D-D在不同证型中均有差异(P<0.05),在痰瘀互结证型的表达水平高于其他证型(P<0.05);CXCL12在不同证型之间的水平差异无统计学意义(P>0.05)。痰、瘀是淋巴瘤最主要的病性证素,其中CXCR2、CXCR4、D-D、FIB对“痰”有影响,D-D与“瘀”有密切相关性。结论淋巴瘤证型、“痰瘀”证素与常见趋化因子及其受体、凝血指标具有明确相关性,趋化因子和凝血功能异常可能是淋巴瘤“痰瘀”证素相关的生物标志物。

过敏原定量检测与特应性皮炎临床表型的相关性

近年来特应性皮炎(AD)发病率逐年增高[1]。6%~60%AD患者存在过敏原经皮致敏[2],寻找特定过敏原,进行过敏原回避或特应性免疫治疗,对防治AD至关重要。此外,过敏原定量检测可以提供量化的数值结果,有助于预测过敏症状发生的概率。本研究对AD患者进行过敏原定量检测,并对其与AD临床表型的相关性进行分析,现将结果报告如下。

缺氧诱导因子-1α调控肝癌细胞对奥沙利铂耐药的机制

目的探讨微环境缺氧及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和多药耐药相关(multidrug resistance,MDR)基因在肝癌细胞耐药中可能的作用机制。方法运用浓度梯度诱导法建立肝癌奥沙利铂耐药细胞株,流式细胞术检测不同耐药亚系细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量及细胞凋亡的情况。RT-PCR及Western blot检测HIF-1α及耐药相关基因MDR1、MRP1、BCRP的mRNA及蛋白表达。结果随着耐药浓度的增加,细胞内活性氧含量逐渐减少,细胞凋亡率明显减少,HIF-1α、MDR1、MRP1、BCRP mRNA含量增加,蛋白水平和mRNA水平相一致。结论肝癌细胞的微环境缺氧是诱导肝癌细胞对奥沙利铂产生耐药的重要原因之一。缺氧可以通过HIF-1α调控肝癌细胞内多药耐药相关MDR1、MRP1、BCRP基因的表达,也可以通过抑制凋亡而出现获得性耐药,从而使肝癌细胞对奥沙利铂产生获得性耐药。

凝血和纤维蛋白溶解指标监测对脑梗死患者的临床意义

目的探讨脑梗死患者凝血和纤维蛋白溶解指标的变化对临床治疗及预后判断的临床应用价值,以指导临床用药及对脑梗死疾病治疗过程的监测和患者预后的判断。方法采用法国STGAO全自动血凝仪对脑梗死患者的凝血谱进行监测,凝血4项采用磁珠法;D-D二聚体应用免疫比浊法检测。结果脑梗死组与正常组相比PT、Fib、D-D明显增高(P<0.01);APTT、TT无明显差异(P>0.05)。其中D-D二聚体增高最明显,而且D-D二聚体明显升高的患者预后大多有后遗症。结论监测脑梗死患者凝血谱的变化有利于对患者病情的评估和指导临床制定合理的治疗方案,并对患者的预后评估有一定的参考价值。

流式细胞仪检测HLA-B27的性能评价及其影响因素的探讨

目的评价流式细胞仪测定人类外周血白细胞抗原B27(HLA-B27)的性能及探讨其影响因素。方法应用BD FASCCantoⅡ流式细胞仪检测外周血HLA-B27,并进行精密度、重复性和稳定性的评价;以及染色时间、溶血时间和加样方式对检测结果的影响。结果取高、中、低3个值经流式细胞仪检测外周血HLA-B27日内精密度分别为CV1.8%、2.7%、1.9%和日间精密度CV12%、15%、13%。在4℃重复性较好,日间差异较大;检测结果的稳定性较好。不同染色时间和不同溶血时间均对结果有影响;先加试剂和先加样本对检测结果无影响。结论流式细胞仪测定HLA-B27性能较好能满足临床需要。

多药耐药相关蛋白在肝癌耐药细胞系HepG2/Oxal中的作用机制研究

目的:探讨多药耐药(multi-drug resistance,MDR)相关蛋白在肝癌细胞系HepG2及不同浓度耐奥沙利铂(oxaliplatin,Oxal)亚系中的表达及参与肝癌对Oxal耐药的机制。方法:以浓度递增法诱导肝癌细胞系HepG2,建立2.5、5.0μg/ml的Oxal耐药亚系,以半定量RT-PCR法测定MDR、多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance related protein,MRP)和乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在亲代和不同耐药亚系中的mRNA表达,并在蛋白水平以Western blot法验证基因表达的差异性。结果:成功建立了IC50值为15和25倍亲代细胞的Oxal耐药亚系(HepG2/Oxal);在mRNA和蛋白水平,BCRP的表达与HepG2的耐药性呈正相关,而MDR、MRP的表达在耐药的早期升高不明显,随着耐药程度的增加其表达增加。结论:BCRP在HepG2对Oxal获得性耐药中起着重要作用,MDR和MRP在HepG2/Oxal耐药过程中早期起的作用不明显,随着耐药浓度的增加,表达越来越高。

PEI与脂质体介导基因转染的比较研究

目的比较新型转染试剂阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)与脂质体2000介导的血管内皮细胞生长因子VEGF165基因转染人胚肾细胞293T的转染效率,为基因转染提供新的方法。方法分别采用脂质体和不同N/P比值的PEI将合成的含有绿色荧光蛋白(GFP)和VEGF165的质粒转入293T细胞。转染24h后,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性;转染48h后在荧光显微镜下观察比较两种转染方法的转染效率,并通过ELISA方法检测细胞上清液中VEGF165浓度,比较两种方法的转染效果。结果当N/P=9时,PEI转染的细胞活性与脂质体转染相近,对细胞的毒性较小;此时,PEI转染效率与脂质体也相似,均可达到约70%;同样,转染后细胞上清中VEGF165浓度较未转染组提高(P<0.05),但两种方法转染组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PEI作为一种新型的转染试剂,与脂质体相比,在一定比例范围内,具有转染效率高,对细胞毒性小且价格低廉的优势,有望成为基因转染的有效载体。

GFP作为脐带间充质干细胞体内示踪标志物在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达

目的通过腺病毒转染携绿色荧光蛋白(GFP)的脐带间充质干细胞(ucMSCs)移植大鼠脑缺血再灌注损伤模型,研究GFP作为示踪剂的可行性。方法体外培养经腺病毒转染GFP的ucMSCs,建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,通过脑立体定位技术将1×10~6携GFP的ucMSCs移植入损伤脑组织,并于造模7d后取脑组织进行冰冻切片,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果体外携GFP的ucMSCs形态呈成纤维状,融合时聚集成簇,呈放射状或漩涡状排列,与未转染ucMSCs形态无差异,荧光显微镜下可见GFP的阳性率达80%以上,且荧光扩散至整个细胞,可反映细胞完整形态。移植后大鼠未出现排斥反应,7d后脑组织移植部位附近均可见GFP表达,荧光未见衰减。结论 GFP作为ucMSCs移植治疗脑损伤的有效示踪剂,可为细胞水平的各种研究及体内移植细胞的研究提供实验手段。

雷公藤多甙对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织微血管新生的影响

目的观察雷公藤多甙干预治疗对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织微血管新生及血管新生相关因子表达水平的影响。方法采用鸡Ⅱ型胶原蛋白诱导建立CIA大鼠模型,采用雷公藤多甙进行干预治疗;病理切片分析CIA大鼠模型滑膜组织微血管新生情况;实时荧光定量PCR分析CIA模型大鼠滑膜组织VEGF及其受体2 mRNA表达水平,ELISA分析CIA模型大鼠血清VEGF及其受体2分泌水平。结果 CIA模型大鼠滑膜组织微血管丰富度与正常组比较增高,雷公藤多甙干预治疗后丰富度降低;CIA模型大鼠滑膜组织、血清中VEGF及其受体2 mRNA表达或蛋白分泌水平与正常组比较显著性上调(P<0.05),雷公藤多甙干预治疗后mRNA表达或蛋白分泌水平与模型组比较显著性下调(P<0.05)。结论雷公藤多甙干预治疗可有效改善CIA模型大鼠关节炎症状与抑制微血管新生、下调VEGF及其受体2表达水平有关。

不同分期慢性肾脏疾病患者血清检测指标对其治疗和预后临床价值的探讨

探讨不同分期慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)患者血清检测指标对其诊断、治疗以及并发症防治的应用价值.采用化学发光法和免疫比浊法检测血清尿素、肌酐、尿酸、胱抑素C、视黄醇结合蛋白和人附睾蛋白4,分析不同分期CDK患者血清指标与CDK分期的关系,采用SPSS软件分析各指标与HE4的相关性.不同分期CKD患者,血清尿素和肌酐各组之间具有明显差异.尿酸结果发现,CKD 5、CKD 4和CKD 3组与CKD 1-2组相比具有差异,但CKD 5、CKD 4和CKD 3各组之间比较无差异.不同分期CKD患者血清胱抑素C和视黄醇结合蛋白也具有明显差异;且随着分期越高,血清各项检测指标越高.不同分期CKD患者血清HE4表达水平具有明显差异,且不同分期之间具有统计学意义;且随着慢性肾病分期越高,患者血清HE4水平也越高.不同分析CKD患者血清HE4与尿素,肌酐,尿酸,胱抑素C、视黄醇结合蛋白和PTH之间的相关性分析发现,血清HE4与UREA、CREA、CysC、RBP和PTH均相关,其相关系数和95%CI分别为0.7414(0.66~0.80)、0.8267(0.77~0.87)、0.8490(0.80~0.89)、0.6437(0.54~0.73)和0.4360(0.28~0.57).但血清HE4与UA相关性较差,其相关系数和95%CI为0.2043(0.04~0.35).HE4与CREA对慢性肾病分期具有相同的效能,尿素对慢性肾病分析的ROC曲线面积为0.9712,胱抑素C对慢性肾病分析的ROC曲线面积为0.9037.HE4可以作为CKD分期辅助诊断指标之一,GFR联合HE4可以更好地知道CKD的分期.血清PTH可以作为CKD患者肾脏疾病-矿物质-骨代谢异常并发症的监测指标.不同分期CDK患者血清学指标对疾病的诊断、治疗以及并发症的防治具有重要价值.

TrKA-siRNA抑制乳腺癌细胞系MCF-7 NF-κB的表达并促细胞凋亡

目的探讨TrKA基因表达的变化对NF-κBP65核蛋白的表达和细胞凋亡的影响。方法构建TrKA特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,重组体经测序鉴定正确后转染乳腺癌MCF-7细胞。G418(geneticin)筛选稳定表达TrKAsiRNA干扰细胞株,命名为TrKA-siRNA。荧光实时定量RT-PCR、Western blot和免疫组化法检测TrKA基因和蛋白的表达,Western blot检测NF-κBP65核蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建TrKA-siRNA表达载体,TrKA mRNA和蛋白水平分别下调74.7%和80.5%(P<0.05)。神经生长因子(NGF)作用2h后,MCF-7组细胞NF-κBP65核蛋白表达明显增加,而TrKA-siRNA组细胞NF-κBP65核蛋白改变不显著。与MCF-7组相比,TrKA-siRNA组细胞凋亡明显增加(P<0.05),NGF对其凋亡无促进作用。结论有效阻断TrKA基因的表达能抑制NF-κB抗凋亡途径的活化,从而增加了乳腺癌MCF-7细胞的凋亡。此作用可能不依赖于外源性的NGF。

加味犀角地黄汤对人微血管内皮细胞侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨加味犀角地黄汤对人微血管内皮细胞(h MVECs)侵袭的影响及其作用机制的研究。方法利用Transwell小室检测h MVECs细胞迁移能力,ELISA法检测其对MMP2、MMP-9的表达影响;荧光定量PCR检测VEGF,Ang1、TGF-β等相关基因的表达。结果加味犀角地黄汤能够抑制人微血管内皮细胞的侵袭,随着药物浓度的增加抑制作用逐渐明显。加味犀角地黄汤能有抑制人微血管内皮细胞中MMP2、MMP-9的表达,且能够抑制VEGF,Ang1、TGF-β等相关基因的表达。结论加味犀角地黄汤可能的机制是通过抑制VEGF、Ang1、TGF-β相关基因的表达和MMP2、MMP-9蛋白水平的表达,来调控以人血管微内皮细胞的侵袭,从而到达治疗类风湿关节炎的目的。

咳喘停贴剂穴位贴敷对慢性哮喘大鼠肺组织抑炎细胞因子的影响

目的观察咳喘停贴剂穴位贴敷对慢性哮喘大鼠Th1下游抑炎细胞因子含量的影响。方法将48只Wistar大鼠随机分成6组:正常组、模型组、布地奈德组、穴位假贴敷组、地塞米松组、穴位贴敷组,每组8只。用卵清蛋白致敏和激发的方法复制慢性过敏性哮喘大鼠模型。模型复制后各组给予相应的治疗,治疗14d后观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和IL-12含量。结果与正常组比较,模型组大鼠BALF中IFN-γ、IL-2、IL-12含量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,穴位假贴敷组BALF中IFN-γ、IL-2、IL-12含量无明显变化(P>0.05);布地奈德组、地塞米松组、穴位贴敷组IFN-γ、IL-12含量明显升高(P<0.05),IL-2含量呈升高趋势(P>0.05),但3组之间IFN-γ、IL-2、IL-12含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论咳喘停穴位贴敷治疗慢性哮喘大鼠的机制与调节呼吸道中抑炎细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12的分泌异常有关。

TrKA特异小干扰RNA表达载体构建及对乳腺癌细胞增殖的影响

背景与目的:构建TrKA特异小干扰RNA(si RNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促细胞增殖作用和对细胞周期的影响。材料与方法:通过Genbank提供的TrKA基因mRNA全序列,应用设计软件选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与PsilencerTM4.1-CMV neo质粒载体连接,经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染乳腺癌MCF-7细胞。利用G418筛选稳定表达TrKA-si RNA的MCF-7细胞株,通过Real-ti me PCR、Western blot和免疫组化在mRNA和蛋白水平检测TrKA的表达水平。MTT法检测TrKA干扰后NGF对细胞增殖作用的影响。流式细胞术观察细胞周期的变化。结果:序列测定表明成功构建TrKA-si RNA表达载体,Real-ti me PCR显示TrKA mRNA下调74.7%(P<0.05),Western blot显示蛋白表达下降80.5%,免疫组化结果也显示TrKA蛋白表达下降。试剂盒提供阳性对照GAPDH基因其表达水平下降85.0%(P<0.05)。MTT检测显示,NGF组细胞增殖反应均较NGF+si RNA组、si RNA组和对照组明显升高(P<0.05),NGF+si RNA组的细胞增殖反应较其余各组下降(P<0.05),表明TrKA干扰能有效抑制NGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7的增殖。流式细胞术检测细胞周期结果显示:与对照组相比,NGF+si RNA组和si RNA组细胞G0/G1期增加,S期减少(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:TrKA特异si RNA表达载体有效下调TrKA基因的表达,并抑制NGF引起的细胞增殖效应。

黄芪皂苷干预乳腺癌细胞MCF-7的体外实验研究

目的:研究黄芪皂苷在体外对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖与凋亡的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:取对数生长期的人乳腺癌细胞MCF-7,分为对照组和不同浓度黄芪皂苷组(2.5μg/m L,5μg/m L,10μg/m L,20μg/m L);采用CCK-8法检测黄芪皂苷对MCF-7细胞增殖抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Realtime PCR法检测Bcl-2、BAX、MMP-9、nm23-H1 m RNA的表达情况。结果:黄芪皂苷能抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖,抑制作用呈剂量-效应和时间-效应关系;黄芪皂苷能够诱导MCF-7的凋亡,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均随着黄芪皂苷作用浓度的增加及作用时间的延长而增加;黄芪皂苷能上调BAX和nm23-H1基因的表达,同时使Bcl-2和MMP-9基因的表达下调。结论:黄芪皂苷在体外对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移有抑制作用,其作用途径是通过调节细胞凋亡相关基因与肿瘤转移相关基因的表达,从而诱导肿瘤细胞的凋亡。

miR-145在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-145在胃癌中的表达及其临床意义。方法选取2011年2月至2012年6月江苏省中医院就诊的67例胃癌患者,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测胃癌患者miR-145的表达情况,取肿瘤边缘外5cm处的非癌胃黏膜作为对照,比较miR-145在正常组织及胃癌组织中的表达差异及与胃癌临床病理参数的相关性。结果 54例(80.60%)胃癌患者胃癌组织miR-145表达明显低于正常组织,miR-145的表达在不同性别、年龄及TNM分期患者间的差异无统计学意义(P>0.05),但在不同组织学分级及淋巴结转移情况患者间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-145在胃癌中呈低表达,可能与胃癌的发生、发展密切相关,可成为胃癌诊断及预后判断的指标。

RNA干扰抑制Fas基因的表达对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3的影响

目的用RNA干扰(RNAi)技术抑制小鼠Fas基因表达,观察其对脑微血管内皮细胞bEnd.3增殖及FADD-FLIP-TRAF-NF-κB信号传导途径的影响,为后续FasL低剂量兴奋效应研究提供实验基础。方法设计合成靶向小鼠Fas基因的小干扰RNA(siRNA)片段,用脂质体包埋转染bEnd.3细胞;CCK-8法检测细胞增殖;RT-PCR检测bEnd.3细胞Fas mRNA的表达情况;western blot检测Fas、FADD、FLIP、TRAF蛋白表达水平。结果 CCK-8法检测显示,Fas-siRNA组细胞增殖水平与空白对照组比较,无统计学差异(t=1.805,P>0.05);RT-PCR结果表明,与空白组的Fas mRNA表达水平比较,Fas-228-、Fas-310-、Fas-427-、Fas-891-siRNA组mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(F=123.127,P<0.05);western blot显示,Fas-siRNA组与空白对照组Fas蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(t=12.101,P<0.01);Fas-siRNA组FADD、FLIP、TRAF蛋白相对表达水平与空白对照组比较,表达均下调(t=28.315、17.563、8.903,P<0.05)。结论 Fas-siRNA能有效封闭Fas基因的表达,抑制Fas下游信号FADD、FLIP、TRAF蛋白表达。

中西医结合治疗痰瘀互结型高脂血症35例临床观察

目的:观察参蚕降脂方治疗高脂血症的临床疗效。方法:将70例患者随机分为2组,对照组35例口服阿托伐他汀钙片治疗;治疗组35例在对照组治疗基础上加服参蚕降脂方。2组均治疗8周。结果:治疗组总有效率为100%,高于对照组的94.3%;治疗组在TC、TG、LDL-C、HDL-C、ET-1指标改善方面优于对照组。结论:中西医结合治疗高脂血症效果显著。

C肽检测系统评价及临床应用

目的对化学发光微粒子免疫检测法检测c肽的方法进行评估和初步应用。方法连续5d测定同一标本每次重复3次。计算重复性、实验室内精密度、真实度、功能灵敏度和线性范嗣；用美国临床实验室标准化委员会（EP15-A）提供的方案对该方法的重复性、实验室内精密度、功能灵敏度和线性范围进行研究。结果该方法的功能灵敏度为0．60ng／mL；性范围0-18．30ng／mL；~部精密度为7．00％-12．29％，总不精密度为6．63％-8．35％。结论化学发光微粒子免疫检测系统检测C肽各项性能指标良好，符合要求，系统推荐用肝素抗凝管。