正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位蛋白及其mRNA的平行分布规律

目的观察正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位(NR2B)蛋白质及其mRNA的基础性表达特征及两者在海马不同区域的表达关系。方法正常SD大鼠海马,灌注取脑,连续冰冻切片,ABC免疫组织化学方法染色和原位杂交组织化学染色,光镜下观察NR2B蛋白质及其mRNA的表达。结果NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的免疫反应强度存在明显差异,CA1区最强,CA3区次之,齿状回着色较弱。NR2B mRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的原位杂交组织化学反应强度与NR2B蛋白质免疫反应强度存在平行变化,也是CA1区最强,CA3区次之,齿状回着色较弱。结论NR2B蛋白质及其mRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的表达强度不同,并存在平行表达差异关系,这种基础状态的分布特征可能与海马缺血易损性和耐受性相关。

NR2B反义寡核苷酸对脑缺血海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响

目的:观察前脑缺血后NR2B反义寡核苷酸(ANR2B)对海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响,为临床脑血管疾病的防治以及研制特异性新药提供理论基础。方法:正常SD大鼠,脑缺血手术48 h前海马CA1区分别立体定位预注射ANR2B、NR2B 正义寡核苷酸(SNR2B)。后行四动脉阻断全脑缺血手术,免疫组织化学反应,观察NR2B蛋白质在ANR2B的作用下的表达变化。结果:海马CA1区立体定位注射ANR2B后,注射区及其周围NR2B免疫组织化学染色强度明显下降,仅有少量锥体细胞散在分布。结论:ANR2B可以在体局部抑制缺血早期NR2B亚单位蛋白表达上升趋势。

NR2B反义寡核苷酸对大鼠海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响

目的观察NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(ANR2B)对海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响,筛选有效的反义寡核苷酸,为探讨针对NR2B的新药物提供形态学基础。方法设计、筛选、合成ANR2B。正常SD大鼠,海马CA1区立体定位注射ANR2B,灌注取脑,连续冰冻切片,ABC免疫组织化学方法染色,光镜下观察NR2B蛋白质的表达变化。结果注射ANR2B后,注射区及其周围NR2B免疫组织化学染色强度明显下降,仅有少量锥体细胞和颗粒细胞散在分布;而在注射NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、生理盐水及生理盐水插针不注射的海马切片上,海马CA1区的染色特征与注射ANR2B者有明显差别,其作用区锥体细胞、颗粒细胞及顶树突的NR2B免疫组织化学染色强度无明显变化。结论ANR2B能够降低NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区的基础性高表达。

非影像专业医学生开设断层解剖学教学实践和探讨

人体断层解剖学是解剖学的重要组成部分，是形态结构及其相关功能的科学，是影像技术高速发展和迅速普及对医学教育提出的新要求。医学教育在培养专门的医学影像人才以外，应在非影像专业医学生中大力普及断层解剖学知识，以适应影像医学时代的临床工作需要。就人体断层解剖学选修课的性质、教育思想、课程体系、教学内容、教学方法、教学效果和教学反馈等进行了一些探索。

NR2B反义寡核苷酸对大鼠海马CA1区NR2BmRNA表达的影响

目的:观察NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(ANR2B)对海马CA1区NR2BmRNA表达的影响,筛选有效的ANR2B,探讨改变NR2BmRNA表达的新方法。方法:正常SD大鼠,海马CA1区立体定位注射ANR2B,灌注取脑,连续冰冻切片,原位杂交组织化学方法染色,光镜下观察NR2BmRNA在ANR2B作用下的表达变化。结果:正常大鼠海马CA1区立体定位注射ANR2B后,注射点及其周围NR2BmRNA原位杂交染色强度明显下降,仅有少量锥体细胞和颗粒细胞散在分布;而在注射NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、生理盐水(NS)及NS插针不注射(NS-NO)的海马切片上,海马CA1区的染色特征与注射ANR2B有明显差别,其作用区锥体细胞、颗粒细胞及顶树突的NR2B原位杂交染色强度无明显变化。结论:ANR2B能够降低NR2BmRNA在正常大鼠海马CA1区的基础性高表达。

NR2B反义寡核苷酸对脑缺血海马CA1区NR2BmRNA表达的影响

为研究NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide to NR2B,ANR2B)对短暂性脑缺血后海马CA1区NR2B mRNA表达的影响,分别向成年SD大鼠海马CA1区内立体定位注射ANR2B、NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、无菌生理盐水(NS),或者插针不注射(NSNO),24h后行四动脉阻断前脑缺血手术(缺血15min、再灌注24h),经心冲灌固定取脑,连续冰冻切片,原位杂交组织化学方法染色,光镜下观察各组每侧鼠脑NR2B mRNA的表达变化,并用LEICAQWin进行图像分析。结果显示,单纯缺血组海马各区的NR2B mRNA显色强度明显增加;缺血再灌组、假手术组和正常组海马CA1区内ANR2B注射点及其周围的NR2B mRNA显色明显下降;而在注射SNR2B、NS或NSNO的各组海马切片上,NR2B mRNA显色均无明显变化。结果表明ANR2B可以特异性地在体局部防止缺血后NR2B mRNA的高水平表达。

人脑胶质瘤中PHLPP1的表达及意义

目的:研究PHLPP1在人脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取徐州医学院附属医院神经外科2009年12月至2011年10月间手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤标本37例,其中I级1例,Ⅱ级12例,Ⅲ级16例,胶质母细胞瘤8例。另取11例因脑创伤行内减压术患者的正常脑组织标本作为对照。应用RT-PCR、Western blotting分别检测各标本中PHLPP1 mRNA和PHLPP1蛋白的表达。结果:RT-PCR和Western-blotting检测结果显示正常脑组织标本中PHLPP1 mRNA和PHLPP1蛋白表达最高,不同级别胶质瘤组织PHLPP1 mRNA和PHLPP1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),且随着肿瘤病理级别的增高,胶质瘤组织中PHLPP1 mRNA和PHLPP1蛋白表达值降低,表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PHLPP1在正常脑组织和不同级别的脑胶质瘤组织中都有表达,其表达值与肿瘤的病理分级呈负相关性,这可能是胶质瘤发生发展的重要机制之一。

反义寡核苷酸技术及其在NMDA受体亚单位研究中的应用

反义寡核苷酸技术是利用碱基互补配对的原则 ,设计一段寡脱氧核苷酸 ,与靶序列特异结合 ,从而抑制基因表达 ,降低mRNA和 /或蛋白质水平 ,影响动物的后续生物效应。反义寡核苷酸技术作为一种快速、特异性阻断基因表达的方法 ,近二十年来取得迅速发展 ,其潜在应用价值巨大。特别是近年来在对NM DA受体领域的反义研究 ,越来越得到人们的重视。本文就反义寡核苷酸技术及当前反义寡核苷酸技术在NMDA受体亚单位研究中的应用进行阐述。

鼠脑内的几种化学成分在尾壳核和苍白球交界区的分布特点

目的 比较几种化学成分在大鼠尾壳核 (CPu)和苍白球 (GP)交界区的分布情况 ,以探讨两核团间新的功能区的形态学基础。方法 正常成年SD大鼠 ,灌注取脑 ,连续冰冻切片 ,ABC免疫组织化学法和四唑氮蓝(NBT)组织化学法染色 ,光镜下观察还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 (NADPH -d)、多巴胺和环腺苷酸调节磷蛋白 (DARPP - 32 )、维生素D依赖性钙结合蛋白 (calbindinD - 2 8K ,CB)和小白蛋白 (parvalbumin ,PV)阳性神经元的分布情况。结果 NADPH -d组化阳性神经元和DARPP - 32免疫组化阳性 (DARPP -ir)神经元在两核交界区的分布从前到后均匀一致、境界清晰。在CPu和GP交界处的前 2 / 3,CB免疫组化阳性 (CB -ir)神经元和PV免疫组化阳性 (PV -ir)神经元的分布境界清晰 ,但在两核交界处的后 1/ 4 ,CB -ir神经元的形态及分布密度与前部有极为明显的差异 ;PV -ir神经元在两核交界处的后 1/ 4细胞形态虽未见明显改变 ,但两核的境界却已表现不明显。结论 钙结合蛋白calbindinD - 2 8K和parvalbumin在CPu和GP交界处后 1/

NMDA受体2B亚单位反义寡核苷酸对缺血性脑损伤影响的实验研究

目的 :观察短暂性全脑缺血大鼠海马NMDA受体 2B亚单位 (NR2B)蛋白质及其mRNA的表达 ,以及CA1区NR2B在NR2B反义寡核苷酸 (ANR2B)作用下的表达情况。方法 :成年SD大鼠立体定位注射在体给药 ,改良四动脉 (4AO)全脑缺血动物模型 ,观察NR2B的表达变化 ,以及CA1区NR2B的表达在NR2B反义寡核苷酸 (ANR2B)作用下的变化。结果 :NR2B蛋白质以CA1区免疫组织化学染色最强。短暂性全脑缺血再灌注后早期即出现海马CA1区NR2B蛋白质及其mRNA的急剧升高现象。在体给药 ,注射点周围NR2B蛋白质及其mRNA表达下降。结论 :NR2B及其mRNA在正常大鼠海马CA1区的基础性高表达和缺血复灌后的过表达可能与海马CA1区缺血易损性相关。ANR2B能够降低海马CA1区的基础性高表达和缺血复灌后的过表达 。

亚低温减轻沙土鼠海马前脑缺血再灌注损伤和对Hsp70表达的影响

目的观察亚低温(维持沙土鼠鼓膜温度在33℃,持续4h)对前脑缺血再灌注后沙土鼠海马CA1区细胞损伤和热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响,研究亚低温减轻脑损伤可能的机制。方法采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型:双侧颈总动脉阻断5min。随机分为假手术组(SH组),假手术低温组(HSH组),再灌注常温组(IR组),再灌注低温组(HIR组),根据再灌注的不同时间点(2h、4h、1d、3d、5d)每组又分为5个对应的亚组(每亚组n=6)。在预定时间点行行为学检查,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测海马CA1区的凋亡细胞,免疫组化检测Hsp70在海马CA1区的动态变化。结果亚低温处理4h可减轻缺血沙土鼠的行为学异常,减少海马CA1区的凋亡细胞,促进Hsp70蛋白1d后的表达。结论 4h亚低温增加沙土鼠5min前脑缺血再灌注后海马CA1区Hsp70的表达,可能是其减少凋亡细胞产生脑保护作用的机制之一。

NR2A反义寡核苷酸对短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的探讨NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸在短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤中的保护作用,为研制和开发针对NR2A的特异性新药提供理论基础和形态学依据。方法健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组。经生理盐水、错义寡核苷酸和反义寡核苷酸预处理后,以四血管阻断法建立短暂性全脑缺血(15min)/再灌注(1、2、3和5d)动物模型。在确定的时间点进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行TUNEL反应、焦油紫染色、原位杂交染色以及免疫组织化学染色。结果短暂性脑缺血/再灌注(I/R)3d,大鼠海马CA1区出现大量的凋亡阳性细胞;I/R5d大鼠海马CA1区细胞严重受损,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。经NR2A反义寡核苷酸预处理后,I/R3d和I/R5d海马CA1区的细胞凋亡和细胞损伤明显减轻,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。NR2A反义寡核苷酸能抑制I/R1d NR2A mRNA表达和I/R2d蛋白质表达,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。结论短暂性全脑缺血后,NR2A反义寡核苷酸能明显地减轻缺血诱导的大鼠海马CA1区细胞凋亡和细胞损伤,且这种作用与NR2A反义寡核苷酸特异性抑制NR2A及其mRNA的表达密切相关。

NMDA受体亚单位2A在大鼠海马缺血/再灌注损伤中的作用

目的观察NMDA受体亚单位2A(NR2A)特异性反义寡核苷酸阻断大鼠海马CA1区NR2A表达后在缺血性脑损伤中产生的变化,以揭示NR2A在缺血性脑损伤中的作用。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血/再灌注组。分别经反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、生理盐水对照和空白对照预处理后,以四血管阻断法建立短暂性前脑缺血(15min)/再灌注(24h和48h)动物模型。在确定的时间内进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行原位杂交染色、TUNEL染色和焦油紫染色。结果缺血/再灌注早期(24h)大鼠海马CA1区NR2AmRNA的表达水平显著增高(P<0.05)。经反义寡核苷酸预处理后,大鼠海马CA1区NR2AmRNA的表达水平显著降低(P<0.05);同时TUNEL染色显示,在缺血/再灌注24h和48h凋亡阳性细胞的数量也明显降低(P<0.05)。结论短暂性前脑缺血后,NR2AmRNA的表达水平与细胞凋亡在时间上和空间上具有一致性,提示NR2A参与了脑缺血/再灌注诱导的细胞凋亡过程。

大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

构建脑源性神经营养因子（BDNF）基因真核表达载体，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法获得目的基因片段，克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将BDNFcDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-BDNF以脂质体法转染至COS-7细胞中，用RT-PCR鉴定BDNFmRNA的表达，免疫印迹法检测BDNF蛋白质表达水平。结果：克隆了BDNF的cDNA，并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-BDNF，经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性；免疫印迹法分析显示，转染48h时，COS-7细胞以分泌proBDNF-GFP融合蛋白为主，在96h以分泌成熟BDNF-GFP融合蛋白为主。结论：成功构建pEGFP-N1-BDNF真核表达载体，并且在COS-7细胞中得到高效表达，BDNF前体及成熟体同时分泌到胞外，在不同时间点分泌组合不同。

脑源性神经营养因子过表达促进大鼠神经干细胞向神经元分化

目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因真核表达载体,探讨BDNF过表达对神经干细胞(NSCs)向神经元分化的影响。方法采用RT-PCR法,以大鼠海马组织RNA为模板,扩增BDNF基因,定向克隆到pEGFP-N1载体中,用脂质体法转染pEGFP-N1-BDNF表达载体至NSCs中,然后用RT-PCR鉴定BDNF的表达,免疫组织化学方法鉴定NSCs向神经元的分化情况。结果成功构建了pEGFP-N1-BDNF真核表达载体,BDNF在重组质粒转染的NSCs中能够高效表达。重组质粒转染的NSCs在体外诱导分化后,能够较空质粒转染的NSCs产生更多的神经元(P<0.01)。结论 BDNF过表达能够显著促进大鼠NSCs向神经元方向分化。

NMDA受体2A亚单位mRNA和蛋白质在大鼠海马前脑缺血再灌注损伤中的变化

目的观察分析大鼠前脑缺血再灌注早期,NMDA受体2A亚单位mRNA和蛋白质表达的改变,探讨两者在缺血性脑损伤中的变化和相互关系。方法选择SD大鼠30只,随机为分正常对照组(NC组)6只,假手术对照组(SC组)12只,缺血再藻注组(IR组)12只,大鼠脑8μm厚石蜡切片,原位杂交染色,TUNEL染色,焦油紫染色。图像和镜下分析。结果 (1)NR2AmRNA在海马的CA1区缺血24h后,显著高于NC组水平,是SC组的141.5%(P<0.01)。(2)NR2A蛋白质水平在海马的CA1区缺血复灌48h后,显著下降,是SC组的59.3%(P<0.01)。结论缺血性脑损伤早期中,NMDA受体2A亚单位mRNA和蛋白质表达并不呈现一致变化,提示缺血过程中2A亚单位的转录水平未受影响,而翻译水平受到了干扰。

NR2A反义寡核苷酸对脑缺血/再灌注大鼠海马NR2A及其mRNA表达的影响

目的研究NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸对短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区NR2A及其mRNA表达的影响,探讨其在脑缺血/再灌注诱导的大鼠海马神经元损伤中的可能作用机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组。经生理盐水、错义寡核苷酸和反义寡核苷酸预处理后,以四血管阻断法建立短暂性前脑缺血(15 m in)再灌注(24 h、48 h和72 h)动物模型。在确定的时间点进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行原位杂交和免疫组织化学染色。结果短暂性脑缺血/再灌注后,大鼠海马CA1区NR2A mRNA的表达显著增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);NR2A反义寡核苷酸能显著地抑制这种表达的增加(P<0.05)。短暂性脑缺血/再灌注后,大鼠海马CA1区NR2A的蛋白表达显著降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);经NR2A反义寡核苷酸预处理后,能够进一步增强NR2A蛋白表达的降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论短暂性脑缺血/再灌注后,在大鼠海马CA1区存在转录增强而翻译抑制现象。NR2A反义寡核苷酸能特异性地抑制NR2A mRNA表达的增加,同时能够增强NR2A蛋白表达的降低。NR2A反义寡核苷酸的这种作用很可能与缺血后的翻译抑制以及海马CA1区选择性易损伤相关联。

亚低温减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CAl区Bax表达变化的关系

目的研究亚低温（33℃，4h）减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CA1区Bax表达变化的关系，探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血／再灌注损伤模型，随机分为假手术组（SH）、常温再灌注组（IR）、低温假手术组（HSH）、低温再灌注组（HIR），每组根据再灌注的不同时间点（2h、4h、1d、3d、5d）又分为5个对应的亚组（／Z=6）。在预定时间点行开阔法迷宫检查，TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞，苏木精-伊红染色检测海马存活细胞，免疫组化检测Bax在海马CA1区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠1d、3d、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞，增加存活细胞，抑制脑缺血后海马CA1区Bax的早期表达（2h、4h、1d）。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用，抑制海马CA1区缺血／再灌注早期Bax的表达可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。

依托大学科技园开展医学大学生创新创业教育的实践探索

医学大学生创新创业教育紧紧贴合"大众创业、万众创新"的时代要求,紧紧围绕国家创新驱动发展的战略,充分发挥医学高校人才优势在医疗体制改革和医药经济改革升级中的支撑作用,具有重要的意义。高校大学科技园作为政府扶持、高校主办的科技创业孵化机构,必然依托高校自身优势资源进行科技成果转移转化、引进相关企业反哺高校人才培养、学科建设和科研发展。依托高校大学科技园,结合医学院校自身的优势专业,开展以创业项目为导向、实践教学基地等形式多样的创新创业教育模式,构建课堂内外结合的医学创新创业教育体系具有重要的实践探索意义。