基于ITS2序列的黄连及其伪混品的分子鉴定

为建立重要中药材黄连及其伪混品的DNA条形码鉴定方法,采用国际通用的条形码序列ITS2对黄连属3个物种6份样品的ITS2序列进行PCR扩增与测序,同时从GenBank下载黄连及其常见混伪品共8个物种18个样本的序列信息。采用MEGA5.05计算黄连及其伪混品的种内、种间K2P距离,并基于K2P模型构建NJ树。结果显示:ITS2种间遗传距离大于种内遗传距离,黄连属及其伪混品不同种样品分别聚类在一起,能很好地区分开来。故ITS2序列可以作为黄连及其伪混品鉴定用的条形码。

五倍子蜂蜜TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

为五倍子蜂蜜的鉴定检测提供技术支撑,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以五倍子树基因组中ITS基因为靶序列,设计并筛选出特异性引物探针,通过特异性、灵敏度和重复性等试验,建立五倍子蜂蜜TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立的方法特异性良好,生成的标准曲线有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.998,最低检测限为0.2pg DNA/反应。该方法特异性强、灵敏度高、结果可靠。

柑桔黄龙病LAMP快速检测方法的建立

根据GenBank中柑桔黄龙病菌的外膜蛋白(OMP)基因序列,设计了一套环介导等温扩增引物,建立了柑桔黄龙病的环介导等温扩增检测方法。该方法灵敏度可达25pg/μL,与实时荧光PCR方法灵敏度相同。全部反应只需一个可控温的水浴锅在60分钟内即可完成,通过肉眼观察浊度状况即可判定结果。该方法具有简便、快速、灵敏、特异等特点,适用于基层工作站的柑桔黄龙病鉴定工作。

基于ITS2条形码的人参属物种鉴定研究

人参属植物种类繁多,多数具有重要的生物学及药用价值。采用植物DNA条形码候选序列之一的ITS2片段鉴定人参属药用植物。结果表明,ITS2基因区通用性强,序列在人参属物种间差异较大,属内变异位点为41个,保守位点189个,种内遗传距离为0-0.004,种间遗传距离为0.006-0.098,平均遗传距离为0.044。基于K2P模型构建的系统发育树（NJ树）显示,同一物种均聚为一类。因此,ITS2作为DNA条形码能够有效地区别人参属物种,为人参属药材及其伪混品的鉴定提供基础。

进境辣椒中低龄辣椒实蝇幼虫的鉴定

自菲律宾进境旅客携带的小红辣椒中截获1头低龄实蝇幼虫。分别用辣椒实蝇(Bactrocera latifrons)、橘小实蝇(B.dorsalis)和地中海实蝇(Ceratitis capitata)的特异性引物lati1/lati2、PF-1/PF-2和CCCA-COL-L/CCCA-COL-R对样品总DNA进行PCR扩增和测序后,与Genbank中已知序列比对,结果表明该实蝇与Genbank中辣椒实蝇(FJ903498.1)的同源性达99%。结合形态学特征,确认截获的样本为辣椒实蝇(Bactrocera latifrons)。

石柱黄连出口现状及对策研究

虽有报道石柱黄连已出口日本、马来西亚、新加坡等50多个国家和地区,但大多为转口贸易,直接出口的量非常小。为了破解石柱黄连直接出口贸易遇到的难题,不断的推动石柱黄连国际市场的开发,从信息获取受限、政府引导乏力、产品质量不高、大品牌缺乏等方面分析了原因,并提出了扩大信息获取途径、理顺产品出口渠道、重视深加工、做优品牌等应对策略。

几种苋属杂草的鉴定与分析

重庆口岸近3年截获数据及当地调查显示,长芒苋等苋属超级农田杂草已在重庆几个重要口岸出现。基于此,对为害较严重的长芒苋、糙果苋、皱果苋等进行形态鉴定,并初步探索苋属杂草DNA条形码分子鉴定方法。

重庆口岸4种重要外来入侵植物的鉴定

文章对重庆万州港、重庆寸滩港、重庆植物种苗指定口岸及重庆汉氏哈泊装卸有限公司码头等4处主要港口进行本底调查,对危害较严重的长芒苋、紫茎泽兰、菟丝子及加拿大一枝黄花等外来入侵植物进行检疫鉴定研究。

喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pg DNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。

双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参

目的建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对,设计特异性的引物探针,建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq(Probe qPCR)10μL,人参上下游引物各0.5μL,西洋参上下游引物各0.3μL,人参与西洋参特异性探针各0.4μL,DNA模板2μL,灭菌去离子水补至20μL。反应条件为95℃预变性30 s;然后以95℃变性5 s,60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品,包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA,以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测,用以确定该方法的灵敏度。结果人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线,人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线,其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。

苹果壳色单隔孢溃疡病菌TaqMan实时荧光PCR检测方法

【目的】针对我国检疫性植物病原真菌苹果壳色单隔孢溃疡病菌Botryosphaeria stevensii,建立实时荧光PCR检测方法。【方法】根据苹果壳色单隔孢溃疡病菌及其近似种的β微管蛋白基因(β-tubulin基因)保守序列设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,分别以病菌DNA和β-tubulin基因靶标序列重组质粒DNA为阳性标准品检验探针的特异性和灵敏度。【结果】探针BsP267对苹果壳色单隔孢溃疡病菌菌株表现出特异性阳性扩增,且与近缘种及其他常见的果腐病菌无交叉反应,扩增效率为105.858%,探针检测DNA的灵敏度达到1 fg/μL。【结论】本研究建立的苹果壳色单隔孢溃疡病菌实时荧光PCR检测法具有高特异性和灵敏度,可用于该病害的防控检测和检疫工作。

重庆口岸全国首次截获独行菜黑胫病菌

6月20目，重庆检验检疫局从进境美国大豆中分离出一株类似油菜茎基溃疡病菌的真菌有害生物，经形态学及分子生物学鉴定并由上海检验检疫局真菌鉴定专家复核，确认为独行莱黑胫病菌。该病菌是我国禁止进境检疫性真菌有害生物——十字花科蔬菜黑胫病菌的一个亚种，系全国首次截获。

人参实时荧光定量PCR鉴定方法的建立

根据人参和人参属其他物种的18S rRNA基因序列差异设计特异引物和探针,建立人参TaqMan实时荧光PCR鉴定方法.应用该方法测试58个样品,包括30个不同来源的人参样品、 15个其他人参属样品以及13个形态近似样品.结果表明:所有供试的人参样品均表现为阳性扩增,非人参及空白对照均未出现阳性扩增.灵敏度检测结果显示:此实时荧光PCR方法的最低检测限为0.03 pg/μL反应.此方法可快速、准确、灵敏地鉴定人参及其加工产品,适用于口岸进出口鉴定.

DNA条形码技术应用于人参鉴定

人参(Panax ginseng C.A.Meyer),被人们称为"百草之王",是国内外常用的珍稀名贵中草药和高级滋补品,濒临灭绝,是急需进行资源保护的珍贵物种。随着中草药市场的国际化,由于利益的驱动,市场上伪混品屡见不鲜,对其正确鉴定就成为进行资源保护的首要条件。国内外学者对人参等药用植物资源的鉴定和可持续利用进行了广泛研究。DNA条形码(DNAbarcoding)技术是分子鉴定的最新发展,即通过比较一段或几段通用DNA片段,对物种进行快速、准确的识别和鉴定,是近年来生物分类和鉴定的研究热点,在物种鉴定方面显示了广阔的应用前景。在分析传统的鉴定方法在适用范围和局限性的基础上,着重介绍了新兴的DNA条形码技术及其分析方法在人参鉴定上的特点及应用。

进境阿根廷大豆中苹果壳色单隔孢溃疡病菌的检测与鉴定

从阿根廷进境的一批大豆中分离到一株疑似苹果壳色单隔孢溃疡病菌菌株。该菌株在燕麦琼脂培养基(OA)上产生大量的分生孢子器及分生孢子;分生孢子长椭圆形,单胞,无色,继续培养3 d后变褐色,产生1隔膜,个别2隔膜;采用真菌通用引物(ITS4/ITS5)扩增和测序,该菌株与GenBank中已登录的苹果壳色单隔孢溃疡病菌16个菌株的ITS序列同源性最高,均为99%;菌株接种梨、苹果和大豆幼苗不同部位后,均发病。经形态特征鉴定、分子生物学检测及致病性测定,该菌株鉴定为苹果壳色单隔孢溃疡病菌。

草地贪夜蛾及其近似种的鉴定

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda(J.E.Smith,1797))是一种原产于美洲的能对农作物造成严重危害的昆虫,目前已传播到非洲大陆、印度及我国部分地区,对我国农林生产带来巨大威胁。本文综述了草地贪夜蛾的分布、寄主、生物学特性、为害特征、形态特征及其与近似种的区别等,以期为相关人员提供参考。

进境美国大豆中值得关注的真菌 Diaporthe novem

采用常规平板分离法,从一批进境的美国大豆样品中获得1株可疑的间座壳属菌株MDD57。经形态学观察发现,该菌株在PDA培养基上产生分生孢子器,且同时产生大量α型和β型分生孢子,未见有性阶段。经ITS和tef1α基因扩增、核酸序列比对分析,发现该菌株同GenBank中2株Diaporthe novem菌株的基因序列同源性达100%,且聚类于同一发育分支。经柯赫氏法则验证,该菌株可侵染大豆茎部和叶片,引起典型的间座壳属病害症状。根据以上结果,确定进境美国大豆中携带有D.novem,这是天津口岸首次从美国大豆中截获该危险性病菌。该病菌同大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌、大豆拟茎点种腐病菌同为近似种,引起大豆茎秆溃疡及种子腐烂,危害严重。

实蝇监测技术的发展

实蝇类害虫能对新鲜水果、蔬菜生产造成重大危害,严重影响农产品的国际贸易。实蝇监测是对实蝇类害虫进行防控的基础工作,也是实蝇非疫区、低度发生区建设和维护的基础。实蝇监测的技术核心包括监测点的设置、引诱剂种类的选择和诱捕器类型的使用。本文总结了自1912年以来实蝇监测技术中使用的实蝇引诱剂和诱捕器的发展过程,并对实蝇监测技术的发展进行了展望。

对植物检疫领域能力验证项目实施中存在问题的探讨

2017年,受国家认监委委托,由上海海关(原上海出入境检验检疫局)和重庆海关(原重庆出入境检验检疫局)共同承担实施了能力验证项目"苹果壳色单隔鞄溃疡病菌的鉴定CNCA-17-A02"。本文就项目实施过程中存在的问题,结合植物检疫专业特点,对植物检疫领域的能力验证普遍存在的问题及解决方案进行探讨,以期能对今后实施的项目有所改进,使能力验证更好地起到评价、统一、提升植物检疫实验室技术能力的作用。

警惕危险害虫庭园象甲入侵我国

庭园象甲(Phlyctinus callosus)是一种能对水果、观赏植物造成严重危害的害虫,原产南非,现已传播到新西兰和澳大利亚等地,我国尚无分布记录。庭院象甲寄主广,适应性强,为害具有较高的隐蔽性,有较大的入侵风险。本文对庭园象甲的分类地位、寄主、分布、形态特征、为害特点、生物学特性、防控措施等进行了详细介绍,为口岸检疫及防控提供参考。