精氨酸残基和赖氨酸残基对大鼠血红素加氧酶-1催化功能的影响

目的研究和探讨大鼠血红素加氧酶鄄1(RHO鄄1)中保守的碱性氨基酸精氨酸残基和赖氨酸残基对该酶催化功能的影响。方法应用定点诱变制备20种RHO鄄1的变异型酶质粒,其中RHO鄄1中保守的碱性氨基酸精氨酸和赖氨酸被置换成谷氨酸,将它们在大肠埃希菌中表达并纯化后,用光谱扫描方法在以NADPH-细胞色素P鄄450还原酶提供电子的模拟体内反应体系下测定变异型酶和野生型酶的活性,从而观察变异型酶的活性是否发生改变。结果变异型酶R35E、K39E、R44E、R136E、K148E、K149E、K153E、R185E和K196E对血红素的降解速度低于野生型酶。结论R35等9个精氨酸残基和赖氨酸残基在参与RHO鄄1催化血红素降解的反应中对该酶的催化功能有着重要影响。

二甲双胍治疗多囊卵巢综合征的临床效果评价

目的评价二甲双胍治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的临床效果。方法选择PCOS患者32例。随机分为两组。A组16例,口服二甲双胍治疗;B组16例,口服达英-35治疗。两组用药时间均为12周。测量患者体重并计算体重指数(BMI),测定患者血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、空腹血糖(FBG)及胰岛素(FBI)水平,计算空腹血糖与胰岛素的比值(GIR),并进行治疗前后的比较。结果A组治疗后较治疗前FBI、GIR明显下降(P>0.01),BMI、T下降(P<0.05),FSH、LH无显著变化(P>0.05);B组治疗后较治疗前LH、T明显下降(P<0.01),BMI、FSH、FBI、GIR均无显著变化(P>0.05)。结论二甲双胍降低血雄激素水平,减轻胰岛素抵抗。

重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究

目的 确定重组血红素加氧酶 2在大肠杆菌中表达与纯化方法。方法 将已构建的血红素加氧酶 2(HO 2 )的重组质粒pMW1 72a HO 2转入大肠杆菌BL 2 1 ,分析不同温度及摇床转速对HO 2表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO 2。检测酶活性。结果 确定了HO 2可溶性表达最佳条件为 37℃ ,(85± 5 )r min ;确定了HO 2具体纯化路线。得到蛋白纯度为 95 .0 % ,纯化倍数为 2 .9倍 ,收得率为 4 0 .9%的活性HO 2蛋白。结论 获得了纯度高、具有活性的HO 2蛋白 ,为进一步进行HO

重组NADPH-细胞色素P450还原酶在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 在大肠杆菌中表达重组NADPH -细胞色素P4 5 0还原酶 (CPR)并纯化获得有活性的CPR蛋白。方法 将已构建的NADPH -细胞色素P4 5 0还原酶重组质粒pMW1 72a CPR采用温和转化法转入大肠杆菌BL 2 1中 ,依次使用超速离心、DE5 2纤维素阴离子交换层析和 2′ 5′ADP亲和层析的方法纯化CPR ,并检测酶的活性。结果 获得了纯度达 99%以上的可溶性CPR蛋白 ,纯化倍数 5 .2 0倍 ,检测酶的比活性为每分钟 1 0 4 5 .4 9nmol mg。结论 获得了纯度高、有活性的CPR蛋白 ,可作为工具酶用于某些相关酶的研究 。

三氧化二砷对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响,以提供含As2O3缓释血管内支架植入手术后防止再狭窄的实验依据。方法分离培养大鼠VSMC并以As2O3处理;用四甲基偶氮唑蓝还原反应(MTT法)检测细胞增殖情况,RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA;以AnnexinV+PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性。结果 2μmol/L的As2O3对VSMC的生长有明显的抑制作用,且此作用呈时间依赖性(P<0.01)。以2μmol/L的As2O3作用72h后,AS2O3对PCNAmRNA表达有显著的抑制作用(P=0.009),对VSMC凋亡的发生(P=0.0001)及对Caspase-3的激活(P=0.005)均有显著促进作用。结论 As2O3可有效抑制VSMC增殖,诱导VSMC凋亡。As2O3的应用有可能为防治血管内支架植入术后再狭窄的药物研究提供一个新思路。

血红素加氧酶在大肠杆菌中稳定表达的氨基酸范围的研究

目的 确定在原核细胞中呈可溶性稳定表达但不改变活性的血红素加氧酶氨基酸范围。方法 应用PCR技术构建了鼠血红素加氧酶 1(RHO 1)和人血红素加氧酶 2 (HHO 2 )的N端和C端部分氨基酸缺失的变异型RHO 1和HHO 2 ,将它们在大肠杆菌中表达并纯化后通过光谱扫描法测定变异型酶与野生型酶的催化活性 ,确定RHO 1和HHO 2中的N端和C端缺失不影响其可溶性表达及催化活性的氨基酸范围。结果 △N8RHO 1(N端缺失 8个氨基酸的RHO 1)和△C70RHO 1在大肠杆菌中表达为可溶性蛋白且催化活性与RHO 1野生型相同 ,△N2 0HHO 2和△C77HHO 2在大肠杆菌中也表达为可溶性蛋白且催化活性与HHO 2野生型相同 ,而△N9RHO 1和△C75RHO 1在大肠杆菌中表达为包涵体。结论 RHO 1和HHO 2的N端和C端部分氨基酸缺失的突变型酶对其催化功能没有影响 ,并可在大肠杆菌中稳定可溶性表达。