α-半乳糖基神经酰胺静脉注射对小鼠肝脏恒定性自然杀伤T细胞及亚群的影响

目的通过采用静脉注射α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer),观察其对小鼠肝脏恒定性自然杀伤T细胞(iNKT)频率及亚群的影响。方法研究时间2021年11月至2022年2月,选取C57BL/6J健康小鼠,采用随机数字表法分为观察组和对照组,观察组静脉注射α-GalCer,对照组静脉注射生理盐水,在注射后的第2、4、6、8、10天取小鼠肝脏,采用流式细胞术检测小鼠肝脏的iNKT细胞及亚群变化情况;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血血清中白细胞介素-4(IL-4),干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-17A(IL-17A)的表达水平。结果与对照组相比,静脉注射α-GalCer可引起肝脏iNKT细胞频率及亚群频率变化,且差异有统计学意义(P<0.05)。观察组肝脏iNKT细胞频率明显升高,但随时间呈逐渐降低趋势,自第6天恢复至与正常水平相当[观察组第2、4、6、8、10天分别为(20.87±2.15)%、(5.61±0.51)%、(2.65±0.26)%、(2.62±0.64)%、(2.51±0.11)%,对照组分别为(2.72±0.19)%、(2.72±0.19)%、(2.93±0.24)%、(3.06±0.45)%、(3.14±0.35)%];注射α-GalCer后,iNKT1亚群频率低于对照组,于第10天恢复至正常水平[观察组第2、4、6、8、10天分别为(1.04±0.37)%、(0.48±0.12)%、(1.99±1.04)%、(0.60±0.11)%、(3.25±0.53)%,对照组分别为(3.68±1.02)%、(2.74±0.21)%、(2.81±0.33)%、(2.93±0.29)%、(3.12±0.11)%];iNKT2亚群频率高于对照组,后逐渐降低[观察组第2、4、6、8、10天分别为(75.13±3.48)%、(33.83±9.08)%、(17.20±5.37)%、(12.00±1.99)%、(6.26±1.28)%,对照组分别为(38.03±1.70)%、(40.13±3.20)%、(40.16±3.15)%、(38.03±1.70)%、(36.37±1.18)%];iNKT1亚群频率总体上低于iNKT2亚群;iNKT17亚群频率低于对照组,第4天亚群频率最高,后又降至正常水平以下;与对照组相比,血清中IL-4水平在注射第2天无明显变化(P>0.05),注射后第6天,IL-4水平明显降低(P<0.05);IFN-γ水平自注射α-GalCer后明显升高,第6天又降低(P<0.05),IL-17A水平均低于正常水平(P<0.05)。结论静脉注射α-GalCer可诱导小鼠肝脏iNKT细胞的增殖,影响其亚群的分化。

腹腔注射α-半乳糖苷神经酰胺对小鼠肺恒定自然杀伤T细胞及亚群的影响

目的探讨腹腔注射α-半乳糖苷神经酰胺(α-GalCer)对小鼠肺恒定自然杀伤T细胞(iNKT)、细胞亚群及外周血细胞因子的影响,从而为治疗相关肺部疾病提供基础研究数据。方法60只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分为α-GalCer干预组和正常对照组,每组30只,选择不同时间点观察干预组与对照组小鼠肺iNKT细胞、亚群及外周血细胞因子的变化。结果组间比较发现,与对照组(3.49±0.25)%相比,腹腔注射α-GalCer可引起肺脏iNKT细胞频率及亚群的变化,差异有统计学意义(P<0.05)。α-GalCer干预组肺iNKT细胞频率前2 d(6.56±0.05)%明显升高而后[d6(2.56±0.08)%、d8(2.64±0.14)%、d10(2.37±0.24)%]降低(P<0.05)。iNKT 1细胞频率低于对照组且呈降低的趋势(P<0.05)。iNKT 2细胞频率高于对照组在第4天肺部iNKT2细胞频率达到峰值,随后降低(P<0.05)。iNKT 17细胞频率略高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05),与第2天相比,第4、6、8、10天iNKT17细胞频率均显著升高(P<0.05)。组间比较发现,干预组与对照组外周血血清IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度比较,差异有统计学意义,α-GalCer干预组在不同时间点IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度比较,差异有统计学意义,与第2天相比,IFN-γ、IL-4水平于第6天、第8天均降低(P<0.05);IL-17A水平于第6天降低(P<0.05)。α-GalCer干预组的IFN-γ水平与对照组相比均有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);除第8天外,α-GalCer干预组的IL-4水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);第2天、第8天α-GalCer干预组的IL-17A水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论腹腔注射α-GalCer对小鼠肺组织iNKT细胞和亚群有不同的激活效应;iNKT细胞激活后,会由脉管系统迁入间质;腹腔注射α-GalCer可诱导血清细胞因子的变化,提示α-GalCer注射可影响机体免疫功能。

类风湿关节炎发病不同时期cDC成熟状态研究

目的采用hGPI325-339和hGPI469-483混合多肽片段构建类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)小鼠模型,观测RA小鼠体内经典树突状细胞(conventional dendritic cells,cDC)的频率及成熟状态。方法流式细胞术检测RA模型小鼠发病时脾脏、淋巴结cDC的频率和CD80、CD86分子的表达情况。结果RA小鼠脾脏cDC频率在炎症4个时期均显著低于健康对照组;CD80分子的表达在炎症初期、高峰期和缓解期明显高于健康对照组,在炎症进展期明显低于健康对照组;CD86分子的表达在炎症的4个时期均明显高于健康对照组。淋巴结cDC频率在炎症4个时期均显著高于健康对照组;CD80分子的表达在炎症初期明显高于健康对照组,其余3个时期均低于健康对照组;CD86分子的表达在炎症初期、进展期和缓解期明显低于健康对照组,在炎症高峰期高于健康对照组。结论在RA发生中脾脏cDC的抗原提呈作用较之淋巴结可能更为重要;RA中脾脏和淋巴结cDC的成熟度存在先升高后降低的起伏波动现象。

腹腔注射α-GalCer对非酒精性脂肪性肝病的影响

探讨了腹腔注射α-GalCer对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响,为以iNKT细胞为靶点的NAFLD免疫学防治奠定基础.利用高脂饲料或蛋氨酸/胆碱缺乏饲料分别喂养C57BL/6J小鼠,建立非酒精性脂肪肝(NAFL)模型和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型.全自动生化分析仪分析小鼠外周血中TCH、TG、HDL、LDL、ALT及AST水平;H&E染色观察肝脏病理变化;流式细胞术检测肝脏iNKT、iNKT1、iNKT2细胞频率.与对照组相比,NAFL小鼠体质量升高,血清TCH、HDL、LDL及ALT水平升高,肝脏脂肪沉积增加;而NASH小鼠体质量降低,血清TCH、TG及LDL水平降低,肝脏脂肪沉积增加并伴有炎细胞浸润.腹腔注射α-GalCer后,NAFL小鼠血清TCH、HDL及LDL水平降低,肝脏脂肪沉积减少,肝脏iNKT2亚群比例增加;NASH小鼠血清ALT和AST水平升高,肝脏脂肪沉积减少,炎细胞浸润增加,肝脏iNKT1、iNKT2亚群比例增加,其中以iNKT1亚群增加为主.腹腔注射α-GalCer可以改善NAFL和NASH小鼠肝脏脂肪沉积;小鼠NAFLD发病不同阶段(NAFL或NASH)肝脏局部微环境的改变可能影响α-GalCer对肝脏iNKT细胞不同亚群的激活,为进一步研究NAFLD的发病机制及免疫学治疗策略提供了有价值的实验数据.

原代肝细胞脂肪变性细胞模型的构建

目的为非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制和防治研究提供可靠的原代肝细胞脂肪变性细胞模型。方法采用Seglen两步灌流法及其改良方法分离获取小鼠原代肝细胞,体外培养48 h后,给予不同浓度的游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)混合物(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导24 h,采用油红O染色,观察肝细胞内脂滴沉积情况,全自动生化分析仪测定细胞内三酰甘油(TG)含量。结果与对照组相比,模型组肝细胞内出现红色脂滴沉积,且与加入的FFA混合物浓度呈剂量依赖性;模型组肝细胞内TG含量明显高于对照组(P<0.05),且随着加入的FFA浓度升高而增加,提示肝细胞内脂质沉积随着加入的FFA浓度升高而增加。结论成功构建了原代肝细胞脂肪变性细胞模型,为NAFLD的研究提供了可靠的细胞模型。

小鼠肥胖不同阶段相关免疫器官恒定自然杀伤T细胞(iNKT)的频率和亚群变化

目的采用高脂饮食喂养构建小鼠肥胖模型,观察恒定自然杀伤T细胞(iNKT)在肥胖不同阶段脂肪及相关组织中的频率及亚群变化,探讨iNKT细胞在肥胖脂肪组织慢性炎症中的作用。方法记录小鼠体重和精神状态以及葡萄糖耐量和胰岛素耐量的变化;苏木精-伊红(HE)染色观察脂肪组织病理变化;流式细胞术检测iNKT细胞和巨噬细胞频率和亚群的变化;CBA检测血清和脂肪组织淋巴细胞培养上清中细胞因子水平;Western blot检测脂肪组织中相关蛋白质的表达量差异。结果(1)高脂喂养4周后,脂肪细胞体积明显增大,炎性细胞浸润不明显;高脂喂养12周后,炎细胞浸润明显增多。(2)高脂喂养可致脂肪组织中iNKT细胞频率下降,iNKT1亚群比例增高,iNKT10亚群比例下降;胸腺iNKT1亚群比例升高,iNKT2亚群比例下降;脂肪组织中巨噬细胞频率及M1亚群比例增高,M2亚群比例下降,上述变化在高脂喂养12周组更为明显。(3)高脂喂养造成脂肪组织中E4BP4、精氨酸酶1(Arg-1)表达下降,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达增高。(4)高脂喂养使小鼠血清和脂肪组织淋巴细胞培养上清中促炎性细胞因子明显增高,抑炎性细胞因子显著下降,且12周组变化更为明显。结论肥胖小鼠脂肪组织中iNKT1细胞亚群升高和iNKT10细胞亚群降低与M1型极化的增强可能存在密切关系,iNKT细胞亚群的失衡可能参与了肥胖小鼠脂肪组织慢性炎症的进展。

iNKT2细胞改善非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

目的探讨恒定自然杀伤T(invariant natural killer T,iNKT)2细胞改善非酒精性脂肪肝(NAFL)肝脂质沉积的机制。方法高脂饮食喂养C57BL/6J小鼠建立NAFL模型。以全自动生化分析仪分析小鼠外周血中血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平。以苏木精-伊红(HE)进行常规肝病理染色。肝iNKT频率及iNKT1、iNKT2亚群频率采用流式细胞术检测。以Western印迹法检测肝脏组织中固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α、核因子-κB(NF-κB)表达情况。结果与对照组相比,NAFL小鼠体重增加,总胆固醇、HDL-C、LDL-C、ALT水平升高,肝脏脂质沉积增加,肝脏SREBP-1c、PPAR-α蛋白表达升高,NF-κB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05或P<0.01)。腹腔注射α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer)后,NAFL小鼠总胆固醇、HDL-C、LDL-C水平降低,肝脂质沉积减少,肝脏SREBP-1c下调,PPAR-α表达上调,肝脏iNKT2亚群比例增加(P<0.05或P<0.01)。结论iNKT2细胞改善NAFL肝脂质沉积与下调肝组织SREBP-1c和上调PPAR-α有关。

CMTM6在消化道肿瘤中的研究进展

CKLF样MARVEL跨膜结构域成员(CMTM)家族是一种新基因家族,CMTM6是其中重要一员。程序性死亡配体1(PD-L1)是一种免疫检查点抑制分子,其可参与介导肿瘤细胞的免疫逃逸。研究表明,CMTM6与PD-L1结合后,可稳定细胞表面PD-L1的表达,从而实现肿瘤细胞的免疫逃逸,提示CMTM6可能在调节肿瘤细胞免疫抑制方面起着一定的作用,继而为肿瘤的免疫治疗提供了新的思路。本篇综述对CMTM6及其在消化系统肿瘤中的研究进展进行作一介绍。

The mechanism of iNKT2 cell improving lipid deposition in the liver of nonalcoholic fatty liver mice

Objective To investigate the mechanism of invariant natural killer T( iNKT) 2 cell improving hepatic fat deposition in nonalcoholic fatty liver( NAFL).Methods NAFL model was established by feeding C57 BL/6 J mice with high fat diet.The levels of serum total cholesterol,triglyceride,high density lipoprotein-cholesterol( HDLC),low density lipoprotein-cholesterol( LDL-C),alanine aminotransferase(ALT),and aspartate aminotransferase(AST)in the peripheral blood of mice were analyzed using automatic biochemical analyzer.