石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应影响因素的研究

目的 探讨石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。方法 应用从石蜡包埋组织中提取的DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子 ,分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。结果 10 .0 μm× 1组织切片组 ,PCR反应循环次数 4 0次组 ,PCR反应模板量 0 .0 5 μg组PCR反应取得高质量目的基因DNA。结论 减少提取组织用量有利于减少抑制PCR物质的量 ,有利于反应的成功 ;PCR反应循环次数一般应大于 4 0次 ;PCR反应时减少模板量有利于PCR反应成功。

散发型甲状腺髓样癌RET基因突变的研究

目的 :研究散发型甲状腺髓样癌酪氨酸激酶受体基因 ( RET)的突变情况。方法 :提取1 7例中国人散发型甲状腺髓样癌基因组 DNA,PCR扩增该基因第 1 3外显子全部序列 ,纯化目的基因 DNA后直接序列测定。结果 :分析测序图发现所有散发型甲状腺髓样癌在该基因的第 1 8973和 1 8974位点之间均有一个鸟嘌呤插入突变 ,插入突变位于该基因的第 1 3外显子和内含子之间。结论 :此位点突变对酪氨酸激酶受体蛋白表达的影响和在散发型甲状腺髓样癌的发生。

PCR反应体系中Mg^(2+)浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响

目的 探讨PCR反应体系中Mg2 + 浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响。方法 从石蜡包埋组织中提取DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 13外显子 ,分析PCR反应体系中Mg2 + 浓度分别为1 5mmol L、2 0mmol L、2 5mmol L、3 0mmol L、4 0mmol L时PCR反应产物中目的基因含量及对PCR产物基因序列测定的影响。结果 5种条件扩增的目的基因经纯化后DNA含量分别为 4 8ng μl(1 5mmol L)、2 6 6ng μl(2 0mmol L)、4 0 2ng μl(2 5mmol L)、38 5ng μl(3 0mmol L)、4 4 5ng μl(4 0mmol L) ;Mg2 + 浓度为 4 0mmol L时PCR产物电泳图见到多条非特异性条带 ;Mg2 + 浓度为 2 5mmol L时PCR产物直接测序反应曲线峰图背景噪音 (噪峰 )减小 ,信噪比 (信号 噪音 )增高。结论 从石蜡包埋组织中提取DNA行PCR反应 ,Mg2 + 浓度为 2 5mmol L时反应特异性强 ,PCR产物质量高。较高的Mg2 + 浓度可以增加PCR反应产量 。

散发型甲状腺髓样癌及正常甲状腺组织RET基因第13外显子碱基序列分析

目的研究散发型甲状腺髓样癌酪氨酸激酶受体基因（RET）第13外显子的突变情况。方法提取17例散发型甲状腺髓样癌和4例正常甲状腺组织基因组的DNA,PCR扩增该基因第13外显子全部序列,纯化目的基因DNA后直接序列测定。结果与Genebank比较全部散发型甲状腺髓样癌和正常甲状腺组织在RET基因第18973和18974位点之间均有一个鸟嘌呤插入,插入点位于该基因的第13外显子和第13内含子之间。结论该位点处鸟嘌呤插入不是基因突变,可能为不同人种间基因组差异或Genebank存在错误。

西藏山南地区甲状腺疾病的实地考察报告——关于缺碘地区食用加碘食盐后甲状腺疾病的变化

自 2 0世纪 70年代以来 ,我国各地逐步食用加碘食盐后 ,西藏地区的缺碘状况也得到了改善。地方性甲状腺肿的发病率明显减少 ,但实际情况并不完全明确。因此 ,我们于 2 0 0 0年 ,2 0 0 1年在西藏山南地区进行了甲状腺触诊 ,B型超声检查、甲状腺功能及尿中碘的测定。根据实地考察测定结果 ,明确了山南地区甲状腺疾病的发病情况及补碘现状 ,为今后的防治工作提供参考依据。

缺碘地区长期供碘后甲状腺形态的研究

本文应用日本Atoka公司产浅表超声仪对缺碘地区长期供碘后和非缺碘地区甲状腺形态进行了各个切面的描记。结果是;居住在缺碘地区人群,甲状腺异常改变率占28.67%,而非缺碘地区为9.94%。二者差异非常显著,缺碘与非缺碘地区甲状腺改变异常率均女高于男。异常改变主要发生在>30岁年龄组;而<30岁年龄组则无差异。原因是从1958年后缺碘地区开始供应碘盐,机体缺碘状态已被纠正,而>30岁年龄组是供碘盐前出生并居住在病区,是因缺碘而造成的甲状腺损害,致病后虽供应了碘盐,然而甲状腺内部却残留了不同程度的病理损害,这些损害主要是形成腺瘤样甲状腺肿、结节性甲状腺肿、甲状腺钙化、甲状腺恶变及桥本氏病等。

散发型甲状腺髓样癌RET基因第11外显子序列分析

目的分析散发型甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子碱基序列 ,明确RET基因突变与散发型甲状腺髓样癌的关系。方法提取 17例散发型甲状腺髓样癌基因组DNA ,PCR扩增RET基因第 11外显子 ,PCR产物经纯化后直接测序。结果分析测序图发现 1例病例在该基因第15 16 5位碱基处G→A突变 ,导致丝氨酸691→赖氨酸错意突变。结论散发型甲状腺髓样癌RET基因第 11外显子基因突变率较低 ;散发型甲状腺髓样癌致病的关键基因可能位于该基因的其他外显子或其他基因上。