克里阳雪菊复合型饮料的研制

以克里阳雪菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)、黑叶杏(Armeniaca vulgaris Lam.)和若羌灰枣(Elaeagnus crispa Thunb.)为原料,研制具有抗氧化活性的复合饮料。通过响应面法优化得到雪菊总黄酮、杏干总多酚、灰枣总多糖的提取工艺,而后以感官评分为指标,经正交试验得到饮料的配方,并对饮料的抗氧化活性进行测定。结果表明,雪菊最佳提取工艺为:料液比1∶90,提取时间23 min,温度95℃,提取2次,总黄酮提取量为316.25 mg/g;杏干最佳提取工艺为:料液比1∶7、时间2 h、温度90℃,提取2次,总多酚提取量为3.05 mg/g;灰枣最佳提取工艺为:料液比1∶18、时间88 min、温度73℃,提取2次,总多糖提取量为667.76 mg/g。通过感官评价得到饮料最佳配比为:菊杏汁∶枣汁1∶1、柠檬酸0.1%、蔗糖5%,且理化指标和微生物指标均符合国家标准。成品饮料的DPPH清除率能力为825.24μg/mL,总抗氧化能力为90.32 U/mL。

加兰他敏介导Nrf2/HO-1信号通路对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨加兰他敏介导核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)损伤的影响及其机制。方法48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、加兰他敏组、加兰他敏+ML385组,每组12只。假手术组大鼠进行手术操作但不烙闭巩膜静脉,其余各组大鼠采用巩膜上静脉烙闭法建立慢性高眼压大鼠模型。加兰他敏组大鼠ip 4 mg/kg加兰他敏溶液;加兰他敏+ML385组大鼠ip 4 mg/kg加兰他敏溶液和30 mg/kg ML385。采用便携式动物眼压计测定眼压;苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜组织形态及RGCs数量;TUNEL染色检测RGCs凋亡情况;试剂盒法检测视网膜组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;Western blotting法检测视网膜组织中Nrf2、HO-1蛋白表达。结果与模型组相比,加兰他敏组大鼠眼压降低,视网膜组织病理损伤得到改善,RGCs数量增多,RGCs凋亡率降低,视网膜组织中SOD、CAT活性以及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均升高,MDA含量降低(P<0.05)。与加兰他敏组相比,加兰他敏+ML385组大鼠眼压升高,视网膜组织病理损伤加重,RGCs数量减少,RGCs凋亡率升高,视网膜组织中SOD、CAT活性以及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均降低,MDA含量显著升高(P<0.05)。结论加兰他敏可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻慢性高眼压大鼠RGCs损伤。

余甘子维吾尔医炮制前后主要成分含量及指纹图谱变化分析

目的研究余甘子维医炮制后化学成分变化及指纹图谱分析,阐释维药余甘子特殊炮制工艺与其化学成分、指纹图谱的关系,为维吾尔药余甘子炮制方法的现代应用奠定基础。方法总鞣质采用紫外分光光度法及HPLC法进行测定余甘子不同种炮制品及生粉中鞣质、没食子酸、柯里拉京和鞣花酸含量,HPLC法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱,检测波长为273nm,流速为1ml·min-1,柱温30℃。结果建立了余甘子不同炮制品中4种药效成分检测方法和指纹图谱,确立了余甘子不同炮制品的14个共有峰,12组不同批次不同炮制方法的余甘子样品指纹图谱相似度差异较大;不同炮制品化学成分发生变化明显,与生粉相比,各炮制品中鞣质和鞣花酸含量均有不同程度的降低;而没食子酸和柯里拉京含量除在水煎组中有显著提高,另外两组也均显著降低。结论所建立的余甘子HPLC指纹图谱及测定方法具有较好的线性关系、重现性、回收率、重复性、稳定性和精密度;检测结果表明不同炮制方法的余甘子化学成分含量差异明显,牛奶煎煮炮制方法以使有效成分含量降低为主,其具体的药效作用还有待进一步探究。

星点设计-响应面法优化维吾尔药刺山柑果总酚酸提取工艺

目的:优选维吾尔药刺山柑果总酚酸的提取工艺。方法:采用乙醇回流提取法,通过单因素试验确定提取次数,以乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间为自变量,总酚酸提取量为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,利用响应面法优选刺山柑果总酚酸的提取工艺并进行预测分析。结果:最佳提取工艺为加15倍量70%乙醇提取2次,每次1 h;总酚酸提取量7.29 mg·g-1,与模型预测值(7.34 mg·g-1)的相对标准偏差0.68%。结论:星点设计-响应面法优选的刺山柑果总酚酸提取工艺简单、精密度高、可预测性好。

星点设计-响应面法优化维药刺山柑果生物碱提取工艺

目的:优化维吾尔药刺山柑果总生物碱的提取工艺。方法:以乙醇体积分数、加醇倍量、提取时间为自变量,以刺山柑果中总生物碱(以甜菜碱为对照)含量为因变量,应用Design-Exepert 8.0.5软件,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用响应面法优化出最佳提取工艺,同时进行预测值与实测值比较分析。结果:二项式拟合复相关系数R2=0.955 8,回归方程代表性较好;确定最佳提取工艺为10倍量90%的乙醇提取2次,每次1.5 h;经5次验证试验,最佳工艺提取的刺山柑果总生物碱含量为77.99 mg/g(RSD=0.95%,n=5),与预测值78.33 mg/g比较偏离率小于2%。结论:星点设计-响应面法优化刺山柑果总生物碱的提取工艺方法简单,精密度高,模型可靠,可预测性趋势良好。

维药新塔花(Ziziphora bungena)zbHDS基因克隆及组织表达分析

对维药新塔花(Ziziphora bungena)萜类化合物生物合成途径中,关键酶1-羟基-2甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合成酶HDS基因克隆,进行组织表达特异性分析,为研究新塔花萜类化合物生物合成途径与基因调控提供基础。结合新塔花转录组数据库,根据编码区序列设计引物,通过RT-PCR方法对Z. bungena基因HDS (zbHDS)的编码区cDNA进行克隆,对其进行相关生物信息学分析,通过Real-Time进一步分析其组织表达特异性。RT-PCR扩增了一个长2 465 bp的zbHDS (登录号:MG065856)基因片段,含一个2 229 bp的开放阅读框,编码742个氨基酸。进化树分析结果显示,与丹参(Salvia miltiorrhiza)具有较近的亲缘关系。Real-Time PCR结果显示zbHDS基因在各器官中均有表达,在茎和叶中表达量较高,根和花中表达量相对较低。本研究首次从新塔花中克隆HDS基因并获得其编码区序列,zbHDS基因具有组织表达特异性,为进一步研究新塔花中萜类化合物生物合成途径提供数据支持。

HPLC同时测定新疆不同产地新塔花中3种有效成分的含量

为更加全面的反映维吾尔族药材新塔花的内在质量,对新塔花中的多种成分进行HPLC同步测定,比较不同产地新塔花中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量。样品制备采用回流提取,选用ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5.0μm）;流动相为甲醇（A）-0.2%冰醋酸溶液（B）,梯度洗脱,检测波长340 nm,柱温30℃,流速1.0 m L·min-1。咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷分别在240 mg·L-1（r=0.999 9）,360 mg·L-1（r=1）,7140 mg·L-1（r=0.999 9）呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.9%（RS 1.3%）,98.25%（RSD 2.0%）,101.2%（RSD 1.5%）。测得13批新塔花中咖啡酸质量分数在0.081.07mg·g-1、迷迭香酸质量分数在1.233.59 mg·g-1、蒙花苷质量分数在2.0810.90 mg·g-1。该方法结果准确、重复性好,可用于测定新塔花药材中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量;3种成分在不同批次的新塔花药材中的含量差异显著,其内在质量差异较为明显。

新塔花查耳酮合成酶基因克隆及表达分析

目的克隆新塔花Ziziphora bungena黄酮类化合物生物合成途径中关键酶查耳酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因,对其进行组织表达特异性分析,构建原核表达载体并进行重组蛋白诱导表达。方法结合新塔花转录组数据设计特异性引物,通过RT-PCR克隆新塔花查耳酮合成酶zbCHS基因,对其进行生物信息学分析,通过RT-PCR进一步分析其组织表达特异性,构建原核表达载体pET28a-chs,并转化至BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达。结果zbCHS基因长1226 bp,包含一个长度为1176 bp的开放阅读框,编码319个氨基酸,其理论相对分子质量为42848.37。该编码蛋白定位于细胞质中,不存在跨膜区及信号肽,为非分泌蛋白,有1个糖基化位点和31个磷酸化位点。α-螺旋是该蛋白多肽链中大量的结构元件,散布于整个肽链之中。系统进化树分析表明,新塔花zbCHS基因与丹参、藿香、紫苏等亲缘关系最为接近。RT-PCR结果显示zbCHS基因在各组织中均有所表达,在叶中表达量较高,花相对表达量次之,根、茎中表达量相对较低。原核表达载体pET28a-chs在BL21(DE3)感受态细胞表达系统中,经IPTG诱导后,有明显的重组蛋白表达,其相对分子质量为42800,与预测相符合。结论通过对zbCHS基因的全长cDNA克隆、组织表达特异性分析和原核表达载体的构建,为进一步研究zbCHS基因在新塔花黄酮类化合物生物合成与基因调控提供依据,最终为该药材品质的提升奠定基础。