日本血吸虫感染小鼠肝脏组织纤维化染色方法的比较

目的比较Van Gieson氏染色和Masson氏三色染色法用于日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化染色的效果。方法建立日本血吸虫感染小鼠肝脏组织纤维化模型,取肝脏标本,常规切片,进行Van Gieson氏染色和Masson氏三色染色,应用图像分析软件统计虫卵肉芽肿纤维化面积。结果染色时间为3～7 min时,2种方法显示肉芽肿纤维化面积差异无统计学意义(P>0.05);染色时间为10 min时,由于非特异性因素使得Masson氏染色法着色面积明显大于Van Gieson氏染色法,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论Van Gieson氏染色法比Masson氏三色操作过程相对简单,易于掌握,染色结果稳定、可靠,可以作为评价日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化程度的较好染色方法。

生物标志物免疫分析方法学验证难点:稳定性

在生物标志物分析方法学验证项中,稳定性验证是难点。与药动学分析不同的是,生物标志物分析待测物为内源性物质,其稳定性与标准品(一般为重组蛋白)有很大不同。所以,生物标志物稳定性验证样品应采用内源性真实样本。但是受分析方法变异影响,内源性真实样本的准确浓度无法得知,而且难以获取新鲜的未冻存过的样本,最终导致稳定性的接受标准难以界定。运用趋势控制图和计算机分析等手段可以更准确地判断生物标志物的稳定性。

食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度检测方法的开发及验证

目的:建立并验证检测食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)方法。方法:游离IgE和总IgE浓度的检测均采用夹心法。采用FcεRI作为捕获试剂,并采用生物素标记的抗IgE多抗作为检测试剂进行游离IgE浓度的测定;对于总IgE的检测,捕获和检测试剂均为抗IgE多抗。该研究对检测方法的关键参数进行了优化并对该方法进行定量范围、精密度、准确度、回收率、稳定性、方法特异性、药物干扰试验等方面的方法学验证。结果:游离IgE和总IgE的定量范围均在6.25~400 ng·m L-1,标准曲线样品复孔间变异(精密度,coefficient of variation,CV%)不超过20%,其中定量上限(upper limit of quantitation,ULOQ)和定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)不超过25%。相对偏差(relative deviation,RE%)不超过±20%,ULOQ和LLOQ不超过±25%。游离IgE检测方法的批内、批间精密度分别在0.87%~9.15%和4.27%~6.50%;检测总IgE方法的批内、批间精密度分别在0.92%~11.60%和7.21%~17.89%;游离IgE的回收率在76.53%~88.85%;总IgE的回收率分别在72.77%~86.93%。干扰试验结果表明,奥马珠单抗不影响总IgE的回收率水平。然而在游离IgE检测中,奥马珠单抗浓度的升高可以显著降低游离IgE的回收率水平。结论:本研究建立的食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度的检测方法,可用于食蟹猴血清中游离IgE和总IgE浓度测定,为抗IgE抗体的临床前评价提供重要的数据支持。

定量检测人血清中可溶性PD-L1蛋白浓度的方法开发及验证

目的:建立一种基于电化学发光法的高灵敏度、高特异性、快速的人血清中可溶性PD-L1(sPD-L1)浓度的定量检测方法,并对该方法进行全面验证。方法:基于Meso Scale Discovery(MSD)技术平台,以鼠抗体PD-L1抗体(mouse anti-human PD-L1 antibody)作为捕获抗体,并采用生物素标记的羊抗人PD-L1抗体(biotinylated goat anti-human PD-L1 antibody)作为检测试剂,定量检测人血清中sPD-L1浓度。该研究对检测方法的关键参数进行了优化,并对该方法的定量范围、准确度和精密度、回收率、稳定性、稀释线性、选择性等性能进行方法学验证。结果:建立了高灵敏度、高特异性的快速检测人血清中sPD-L1的MSD方法并完成方法学验证。该方法定量范围为9.375~1200 pg·mL^(-1),精密度、准确度、回收率、稀释线性及选择性良好,样品室温放置4.3 h,稀释处理后实验台放置4.3 h,冷藏冰箱(2℃~8℃)存放24.4 h,经冻融3次,超低温冰箱(-90℃~-70℃)放置101 d稳定。结论:经过方法学验证,该方法可以用于血清中sPD-L1浓度的定量分析,为PD-1/PD-L1免疫检查点相关药物的临床研究药效学评价提供理论依据,在个性化治疗和伴随诊断领域也有潜在的应用价值。

抗体药物偶联物抗药抗体中和活性分析研究进展

抗体药物偶联物(ADCs)是由单克隆抗体、连接子和小分子细胞毒素构成的多结构域分子。ADCs通过单克隆抗体特异性地结合肿瘤细胞表面高表达的靶抗原,经抗原介导的内化作用进入细胞并释放细胞毒素,可提高疗效并降低细胞毒素对正常组织、细胞的毒性。与常规单克隆抗体一样,ADCs作为蛋白药物,具有免疫原性。此外,由于偶联引入了新的抗原表位,ADCs药物有可能诱导机体产生更为复杂的免疫反应,从而可能影响药物的有效性和安全性。对ADCs诱导的抗药抗体(ADA)进一步表征,尤其是中和活性试验,有助于分析和预测因ADA的产生而可能导致的对有效性和安全性的影响。由于ADCs药物结构和作用机理的特殊性,针对不同结构域而产生的ADA均可能具有中和活性,通过多种机制阻断ADCs药物内化,或阻碍细胞毒素分子释放,从而降低细胞杀伤效应或导致脱靶毒性。因此,ADCs药物的中和抗体检测方法的设计和开发不同于常规抗体类药物,且具有较大的挑战。本文简述了ADCs药物免疫原性分析中中和活性检测方法及目前存在的挑战,以期对该领域的相关研究提供借鉴和参考。