长沙地区呼吸道感染流感嗜血杆菌的分子流行病学特征及耐药性分析

目的分析2004年1月～2006年6月长沙地区呼吸道感染患者标本流感嗜血杆菌的耐药情况。方法采用KB法检测106株临床分离的流感嗜血杆菌（Hi）的耐药性，nitrocefin法检测β-内酰胺酶，PCR检测流感嗜血杆菌的TEM和ROB型耐药基因。结果本地分离的流感嗜血杆菌对亚胺培南、阿奇霉素、氨苄西林／舒巴坦、环丙沙星、头孢噻肟、头孢呋辛、氨苄西林、氯霉素和复方磺胺甲噁唑的耐药率分别是：0、0、0、5．6％、22．6％、25．5％、34．O％、43．4％、53．8％。在106株流感嗜血杆菌中，共检出36株氨苄西林耐药，其中35株β-内酰胺酶检测为阳性，均对氨苄西林耐药；1株为氨苄西林耐药而β-内酰胺酶阴性。PCR检测有34株β-内酰胺酶阳性和4株β-内酰胺酶阴性的流感嗜血杆菌为TEM型基因，未发现ROB型基因菌株，1株为非TEM非ROB型产β-内酰胺酶流感嗜血杆菌。结论本地流行的流感嗜血杆菌的主要耐药机制是产TEM型β-内酰胺酶，对复方磺胺甲噁唑和氯霉素的耐药率较高，不适宜用于流感嗜血杆菌引起感染的治疗，对头孢噻肟、头孢呋辛、亚胺培南、阿奇霉素和环丙沙星有较高的抗菌活性，临床可加强药敏监测，合理选用。

肝移植患者真菌感染的流行病学特点及耐药性分析

目的了解肝移植术后真菌感染的种类及耐药特性,为临床治疗提供依据。方法分析2003年6月至2006年6月,我院67例肝移植患者术后感染的标本,鉴定真菌种类,分析其耐药性。结果67例肝移植患者有21例发生真菌感染,占肝移植患者的31.3%;共检出73株真菌,以酵母菌感染为主,占98.6%,其中近平滑念珠菌、白色念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌、克柔念珠菌的检出率分别是53.4%、21.9%、9.6%、8.2%、2.7%。曲霉菌感染1例。药敏试验显示73株真菌对两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、制霉菌素(MYS)、酮康唑(KTC)、益康唑(ECO)和咪康唑(MIC)的平均敏感率分别为98.6%、95.7%、87.1%、70.0%、65.7%和64.3%。结论加强肝移植术后真菌的鉴定和耐药性监测,对指导临床治疗具有重要意义。

鲍曼不动杆菌的耐药表型及耐药基因的表达

目的分析临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药表型及耐药基因的表达状况. 方法用K-B琼脂扩散法检测鲍曼不动杆菌耐药率,以ESBLs确证实验和三维试验检测鲍曼不动杆菌的超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、AmpC酶产酶情况与变化. 结果临床感染鲍曼不动杆菌的ESBLs与AmpC酶检出率分别为1.4%、71.0%,对常用抗生素的耐药率从23.3%～59.1%,对亚胺培南的耐药率最低,为12.8%. 结论临床院分离的鲍曼不动杆菌流行株主要是产AmpC酶株,且呈多重耐药.

重组TFAR19蛋白对鼻咽癌CNE-1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响

目的研究重组TFAR19(TF-1cellapoptsis-relatedgene19)蛋白对鼻咽癌细胞株CNE-1端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的影响,探讨重组TFAR19蛋白促CNE-1细胞凋亡的作用机制。方法将不同浓度的高纯度重组TFAR19蛋白分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养后,通过7-AAD及AnnexinV-PE标记进行流式细胞术分析,检测TFAR19蛋白对细胞的促凋亡效应;RT-PCR法比较试验组和对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA的表达水平;TRAP-银染法检测重组TFAR19蛋白作用下CNE-1细胞株端粒酶活性的改变。结果(1)一定浓度的TFAR19蛋白在未加载体的情况下,可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30mg/L的TFAR19蛋白后,CNE-1细胞的凋亡率分别是15.26%,29.48%,37·11%,54·20%,72.36%。阳性对照组(凋亡诱导剂stuanrosporin处理)与阴性对照组(PBS处理)的细胞凋亡率分别是98·37%、13·40%。(2)试验组与对照组CNE-1细胞株端粒酶hTERTmRNA表达无显著差异。(3)与20mg/L以上浓度的重组TFAR19蛋白共同培养后,CNE-1细胞株端粒酶活性明显降低。结论重组TFAR19蛋白在较高浓度下可降低鼻咽癌细胞株CNE-1的端粒酶活性,明显促进肿瘤细胞凋亡。

幽门螺杆菌感染与胃部病变组织端粒酶活性相关性的研究

目的探讨胃部疾病病变组织的端粒酶活性表达与Hp感染的关系。方法用通过TRAP-银染法和幽门螺杆菌培养法检测21例胃癌(GC),35例萎缩性胃炎(AG)和38例良性胃溃疡(BGU)组织的端粒酶活性和Hp感染状况。结果胃癌、萎缩性胃炎、良性胃溃疡中端粒酶活性的分别为76.2%,48.6%,15.8%。端粒酶活性在胃癌、萎缩性胃炎标本中的表达显著高于良性胃溃疡(P<0.01或P<0.05)。胃癌组织中的端粒酶活性最高。Hp阳性组的端粒酶活性与Hp阴性组相比有显著性差异(P<0.01)。结论Hp的感染引起端粒酶的活性增高,加速病变组织损伤,可能与胃癌的发生、发展具有相关性。

女性泌尿生殖道标本支原体检测及体外耐药性分析

分析了长沙市女性泌尿生殖道解脲支原体（Uu）和人型支原体（Mh）感染的现状，分布及耐药情况。应用支原体培养药敏试剂盒，对476例女性泌尿生殖道分泌物标本进行Uu和Mh的检测和药敏试验。476份标本支原体总检出率为37．0％。Uu检出率26．0％；Mh检出率为3．0％；两者混和感染栓出率为8．0％。感染年龄集中在20～30岁的年龄段。支原体对常见抗生素的耐药率11．9％～79．5％。支原体感染是女性泌尿生殖道常见的感染病原体，对支原体感染敏感的抗生素是多西环素和美满霉素。

原位肝移植病人术后细菌感染病原菌及耐药性的研究

目的研究原位肝移植病人术后感染的主要病原菌分布及耐药情况,探讨防治方法。方法分析从67例原位肝移植病人术后各部位分离出的167株病原菌及药敏结果。结果67例肝移植病人分离的病原菌,革兰阴性杆菌82株,占49.1%,革兰阳性球菌79株,占47.3%,真菌6株,占3.6%。主要致病菌依次为金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌。感染部位最常见呼吸道,其次为胆汁和腹腔引流液。其中有21例病人合并有两种以上病原菌感染。碳青霉烯类和糖肽类抗生素分别对革兰阴性杆菌和革兰阳性球菌有较高敏感性。结论感染是肝移植术后主要的并发症,合理、适当选用抗生素对降低肝移植病人术后感染,提高病人存活率非常重要。

重症监护病房医院感染病原菌分布及其耐药性分析

目的:了解重症监护病房(ICU)医院感染病原菌及其药敏特征,为临床抗感染治疗提供依据。方法:对我院2 0 0 2年至2 0 0 4年在ICU发生的感染送检标本所分离的细菌及药敏特征进行回顾性分析。结果:ICU的医院感染病原菌以革兰阴性杆菌为多(占4 8.2%),其次为革兰阳性菌(占4 3.3%)和真菌(占8.5%);革兰阴性杆菌以铜绿假单胞菌和大肠杆菌为主,革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌为主;革兰阴性杆菌对4种及4种以上的抗生素的耐药率超过4 0%,耐苯唑西林葡萄球菌对7种常用抗菌素耐药率均在5 0%以上;大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与头孢菌素酶(AmpC酶)检出率分别为3 4.0%,3 0.7%和1 3.2%,2 3.1%;耐苯唑西林葡萄球菌检出率为6 6.3%,其对大多数常用抗菌素均显示较高的耐药率(>5 5%),与非耐药株有统计学差异。结论:ICU中医院感染虽以革兰阴性杆菌感染为主,但革兰阳性球菌仍是重要的致病菌;抗生素耐药率逐渐升高,且具有高耐药与多重耐药的特点,产ESBLs与AmpC酶是革兰阴性杆菌产生耐药性的重要因素,耐苯唑西林葡萄球菌对抗生素耐药率高。

肝移植术后早期感染病原菌与耐药性分析

目的探讨肝移植术后感染的主要病原菌及病原菌耐药情况。方法回顾性分析我院45例肝移植手术后细菌性感染的发生率、细菌分布及其耐药性。结果肝移植术后细菌性感染的发生率为71.1%,分离病原菌398株,其主要病原菌分别为:粪肠球菌17.6%、阴沟肠杆菌16.1%、真菌14.8%、大肠埃希菌14.1%,碳青酶烯类、糖肽类抗生素仍分别是革兰阴性杆菌与革兰阳性球菌最有效抗生素。结论细菌性感染是肝移植术后早期感染的主要并发症,病原菌对多种抗生素具有抗药性,预防细菌性感染的发生与合理使用抗生素,同样具有十分重要的意义。

翻转课堂结合学生小讲课在临床微生物学检验技术实习教学中的探索

探讨翻转课堂结合学生小讲课在临床微生物学检验技术实习教学中的应用价值。选择在中南大学湘雅三医院检验科实习的2018年医学检验技术专业实习生48名为对照组,2019年的42名实习生为实验组。对照组采用传统的实习带教模式,实验组采用翻转课堂结合学生小讲课的教学模式。两组实习生均接受出科考试及满意度调查问卷填写,比较两组教学方式的效果。结果显示,实验组出科考试的理论成绩、操作成绩及总成绩均高于对照组(P<0.05),实验组对实习满意率明显高于对照组(P<0.05)。表明翻转课堂结合学生小讲课应用于临床微生物学检验技术实习教学,可以有效提高实习生的实习效能,值得进一步推广。从传统实习教学模式的现状和不足、翻转课堂与学生小讲课相结合实习教学模式在临床微生物学检验技术实习教学中的引入、构建和效果评估方面进行了探讨。

葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的检测及耐药性分析

目的:了解我院葡萄球菌对克林霉素诱导性耐药的检出率及耐药性情况,指导临床合理用药。方法:按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)2004年推荐的D试验检测红霉素对克林霉素诱导耐药的葡萄球菌,同时检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)和甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对12种常用抗生素的耐药性。结果:310株临床分离葡萄球菌中,红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株中D试验阳性的MRS、MSS分别为6.6%(12/183)、18.1%(23/127),MSS菌株明显高于MRS菌株的检出率,具有统计学意义(x^2=9.99,P<0.01)。51株红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌中,D试验阳性菌株35株,检出率为68.6%(35/51)。对于12种常用抗生素的耐药性除复方新诺明和万古霉素外,MRS对其余10种抗生素的耐药率明显高于MSS,具有统计学意义(P<0.01)。结论:常规开展D试验检测红霉素对克林霉素诱导耐药的葡萄球菌,D试验阳性应报告分离株对克林霉素耐药,可避免不适当使用克林霉素导致临床上的治疗失败,有助于医生正确选用大环内酯类及林可霉素类抗生素;并且MRS的耐药性较高,对各类抗生素多重耐药,需加强其耐药性监测。

铜绿假单胞菌外排泵及整合子与碳青霉烯类耐药中的关系

目的明确金属酶、整合子和外排泵在铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药中的作用。方法对42株泛耐药铜绿假单胞菌采用K-B法检测MIC值,双纸片扩散法测金属β-内酰胺酶(MBL),PCR扩增整合子并测序基因盒,real-time PCR检测oprM基因表达,western blot检测外膜蛋白。结果亚胺培南耐药率高达45.23%,美罗培南耐药率71.42%;检出有22株产MBL;Ⅰ类整合子检出率52.30%,携带dhfrⅫ-orfF-aadA2和aacA4-blaVIM-4两种类型的基因盒组合形式;oprM基因高表达细菌是低表达细菌的3.56倍;25株高表达MexAB-OprM外膜蛋白。结论金属酶、整合子均不是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,MexAB-OprM高表达致美罗培南耐药。各种耐药机制相互影响,并相互协同。

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子与耐药性关系

目的研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子的分布,探讨整合子介导的耐药机制在产ESBLs菌耐药性中的作用。方法用PCR检测100株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合酶基因及blaTEM、blaSHV和blaCTX-M基因,对Ⅰ类整合子阳性菌进行耐药基因盒检测并测序。结果产ESBLs菌株中Ⅰ类整合子阳性率为69%,整合子阳性的产ESBLs菌株对包括头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和β-内酰胺酶抑制剂类在内的12种抗菌药物的耐药率高于整合子阴性产ESBLs菌株,2χ检验差异有统计学意义,P<0.05;Ⅰ类整合子在blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因阳性菌株中检出率分别为84.4%、72.9%和68.9%。结论在产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,Ⅰ类整合子广泛分布且参与产ESBLs菌的多重耐药的形成,容易引起多重耐药的广泛传播。

重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究

目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

细菌整合子调控机制中启动子的作用研究进展

细菌整合子中大多数的耐药基因盒不含启动子,故基因盒的转录需要依靠整合子可变区上的启动子Pc来启动。不同类型的启动子,可以从整合酶的表达、耐药基因盒的表达以及整合和剪切频率几个方面对整合子的作用产生影响,通过研究不同启动子对整合子表达的影响,研究整合子介导细菌耐药的调控机制,已成为目前的研究热点。本文从启动子的结构、分类以及不同类型启动子对整合子功能的影响等方面,对启动子在整合子调控作用机制中的研究进展做一综述。

反向PCR扩增Ⅰ类整合酶基因侧翼序列

目的采用反向PCR对Ⅰ类整合酶基因侧翼序列进行检测分析。方法以临床分离的Ⅰ类整合子阳性大肠埃希菌为研究对象,用限制性内切酶HindⅢ对基因组DNA进行酶切,T4 DNA连接酶使酶切产物自身环化,设计Ⅰ类整合酶基因反向引物扩增Ⅰ类整合酶基因侧翼序列。结果临床分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子检出率为68.1%,反向PCR扩增得到1800bp大小的Ⅰ类整合酶基因侧翼序列。结论Ⅰ类整合子在临床分离大肠埃希菌中广泛存在,反向PCR对Ⅰ类整合酶基因侧翼序列检测进一步明确了Ⅰ类整合子的结构,并发现其侧翼序列存在RNA聚合酶基因β亚基,为Ⅰ类整合子调控基因分析及克隆奠定了研究基础。

大肠埃希菌质粒介导头孢菌素酶基因型研究

目的调查大肠埃希菌中质粒头孢菌素酶(AmpC酶)的基因型分布以及耐药性。方法收集对头孢西丁耐药的24株大肠埃希菌,根据头孢菌素酶和超广谱内酰胺酶(ESBLs)各种已知基因序列设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定AmpC酶基因以及ESBLs的基因型分布;接合试验证实质粒ampC基因有无可转移性。结果24株耐头孢西丁的大肠埃希菌中13株产CMY型类似AmpC酶,1株产DHA-1型AmpC酶;PCR检测发现ESBLsTEM型15株,CTX-M型2株,SHV型1株。结论耐头孢西丁的大肠埃希菌中发现CMY型类似AmpC酶和DHA-1型AmpC酶。药敏结果对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感。

革兰阴性菌中整合子携带氨基糖苷类耐药基因的分布

目的研究湖南地区革兰阴性菌中整合子的流行现状及其携带的耐药基因的特点。方法收集183株革兰阴性菌,MIC法检测其药敏活性,利用不同的引物PCR筛查整合子的种类及整合子可变区,RFLP分析可变区,并测序确定其所携带的耐药基因盒内容。结果细菌均为多重耐药菌;整合子检出率为54.6%,均为Ⅰ类整合子;携带5种整合子可变区,分别是0.75 kb,1.0 kb,1.8 kb,2.0 kb,3.0 kb;可变区内容为intI1-dfr15-aadA2-qacE△1-ampR,dhfrⅫ-orfF-aadA2,aacA4-catB8-aadA1,dhrfⅫ-aadA2,intI1-dfrA12-aadA2-qacE△1-sul1-ISCR1-blaCTX-M-14-IS903。结论Ⅰ类整合子广泛分布于我院分离的革兰阴性菌中,广泛携带氨基糖苷类和磺胺类耐药基因。氨基糖苷类耐药基因盒的高频出现与抗生素选择性压力无关。

新生儿败血症血培养的病原学分析

目的了解新生儿败血症感染菌株的细菌分布图、细菌的耐药性和它们在五年中的变化趋势。方法回顾性调查中南大学湘雅三医院近五年间新生儿败血症血培养分离的细菌株。结果在2864例标本中,细菌培养阳性为541例。大多数败血症为出生后1周的早期发作(58.6%),革兰阴性杆菌(55.3%)比革兰阳性球菌(44.7%)多见。但金黄色葡萄球菌是最常见的菌株(35.5%)。五年中,革兰阳性和革兰阴性菌的感染率没有很大变化。但是,不动杆菌的感染率在五年中呈现稳定持续的升高趋势。结论从近五年的结果来看,对革兰阴性菌最有效的抗生素是阿米卡星,对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌最有效的是奈替米星和环丙沙星。