上海市菜地分布的遥感调查

首次利用ＴＭ遥感资料提取了上海市菜地的分布信息，并以此为根据，制作了１９９５年上海市１∶１０万菜地分布的遥感影像图和线划图，取得了令人满意的效果。有关研究成果已提交市政府有关决策部门，为上海市新一轮“菜篮子”工程的建设提供了及时、准确的信息。同时，为利用ＴＭ遥感资料提取像菜地那样总量少、田块小、分布零碎、光谱离散度大的农作物积累了经验。

遥感图像的神经网络分类法

神经网络的研究已有近３５ａ的历史，各种模型相继出现，应用领域越来越广，近年来，神经网络的研究在国内外遥感界也越来越受到重视。笔者结合国家“八五”攻关项目“太湖地区水稻遥感估产”的要求，运用半线性前馈神经网络对ＴＭ图像进行分类作了研究，并以无锡县的华庄、羊尖两个乡作为试验区，用１９９１年７月２３日的ＴＭ资料提取了两个乡的水稻种植面积，并与采用传统的Ｂａｙｅｓ分类法作的分类结果进行了比较，取得了满意的效果。

HSPA5基因3′非翻译区多态性与肝细胞癌预后的关系

目的调查70 kDa热休克蛋白5(HSPA5)基因3′非翻译区的变异与肝细胞癌预后的关系。方法从288例肝细胞癌患者外周血中提取DNA,采用TaqMan检测HSPA5基因的rs16927997、rs1140763和rs12009。Kaplan-Meier方法和Log-rank检验用于评价总生存率。结果 HSPA5单体型的分布与临床特性不相关。单变量分析显示等位基因、基因型、单体型和双体型不影响生存。多重比较结果显示临床特征与病人总的预后无关(P>0.05)。结论中国人HSPA5基因3′非翻译区的变异对HCC的预后没有明显影响。

IFN-γ逆转免疫编辑后人肺癌A549细胞对CIK杀伤敏感性的研究

目的:探讨IFN-γ对免疫编辑后人肺癌A549细胞对CIK杀伤敏感性的逆转作用。方法:应用RT-PCR和MTT方法分别检测IFN-γ对免疫编辑后A549细胞表面MICA表达的影响及A549细胞对CIK杀伤敏感性的变化。结果:免疫编辑后A549细胞表面低表达MICA,对CIK细胞杀伤敏感性低。IFN-γ可明显上调编辑后A549细胞MICA mRNA的表达率,提高CIK对编辑后A549细胞的细胞毒活性。结论:IFN-γ可以增强A549细胞表面MICA mRNA表达,逆转免疫编辑后A549细胞对CIK细胞杀伤敏感性。

2种方法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较

目的比较测序法和Taqman实时荧光PCR法检测表皮生长因子受体(EGFR)基因19、21外显子基因突变的一致性,为寻找适宜临床应用的EGFR基因突变检测方法提供实验依据。方法收集60例非小细胞肺癌患者肿瘤组织,应用测序法和Taqman实时荧光PCR法分别检测EGFR基因19、21外显子基因突变,比较两种方法的有效性。结果两法检测EGFR基因19、21外显子突变结果符合率分别为96.7%(58/60)和98.3%(59/60),差异无统计学意义(P>0.05)。结论 2种方法均可用于EGFR基因19、21外显子突变检测,测序法更适合指导临床分子靶向治疗。

两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗对Lovo细胞的体外杀伤作用

目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原(CEA)基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。体外培养CTL并检测其活性;MTT法检测两组CTL对Lovo细胞的杀伤作用。结果两种方式致敏DC均可诱导激活CTL并分泌INF-γ,而重组痘苗病毒转染DC组CTL诱导率高于细胞裂解物组;重组痘苗病毒转染组诱导的CTL对Lovo细胞的特异性杀伤活性显著高于细胞裂解物组。结论两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗均能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性,而使用重组痘苗病毒转染CEA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,为DC疫苗用于结肠癌的免疫治疗奠定基础。

血清HSP27在原发性肝细胞癌早期诊断中的应用

目的探讨热休克蛋白27(HSP27)在原发性肝细胞癌(HCC)早期诊断中的应用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测正常人、乙肝病毒携带者和HCC患者血清中HSP27的含量,并结合化学发光免疫分析法进行血清甲胎蛋白(AFP)的平行检测。结果 HCC患者平均HSP27水平明显高于正常对照组和HBV携带者。其中大/小肝癌组、或AFP阴性/AFP阳性HCC组与正常对照组、慢性HBV感染组及急性HBV感染组比较,差异均有统计学意义。所有肝癌组与AFP阳性的HBV感染组相比差异也有统计学意义。并且,当HSP27与经典标志物AFP相结合检测HCC时,诊断的敏感性、特异性、阳性预测值均大大提高。结论 HSP27可以作为HCC的早期血清学诊断的生物标志物。HSP27和AFP平行试验可提高敏感度,减少误诊率,有利于临床诊断工作。

免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的比较

目的探讨免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分泌细胞因子水平及细胞杀伤活性的变化。方法采用Ficoll密度梯度法提取脐血单个核细胞,定向诱导成CIK细胞,即免疫编辑前CIK细胞。Transwell小室共培养CIK细胞与人肺癌A549细胞,分离纯化CIK细胞即免疫编辑后CIK细胞。通过ELISA和MTT法分别检测免疫编辑前后CIK细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的变化。结果CIK细胞与A549细胞共培养后,其分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的含量较共培养前CIK细胞显著下降(P<0.05),IL-2则略有降低。共培养后CIK细胞杀伤活性明显减弱(P<0.05)。结论CIK细胞与人肺癌A549细胞间存在免疫编辑作用,编辑后的CIK细胞分泌细胞因子水平及杀伤活性均下降。

CEA-rV治疗CEA阳性肿瘤的实验和应用研究

目的:探讨CEA重组基因痘苗病毒(CEA-rV)对实验动物CEA阳性肿瘤的预防和治疗作用。方法:1)预防组:将实验鼠分为4组,先皮下接种痘苗病毒(1、2组野生型W-VV,3、4组CEA-rV)3次,再分别皮下注射同源鼠肝癌细胞(1、3组Hepa-CEA-,2、4组Hepa-CEA+)。2)治疗组:同样4组,先皮下注射肝癌细胞(1、3组Hepa-CEA-,2、4组Hepa-CEA+),7d后再分别皮下接种痘苗病毒(1、2组W-VV,3、4组CEA-rV)。以后每周测量一次肿瘤大小,并观察动物反应。结果:1)预防组:接种CEA-rV/Hepa-CEA+组各鼠在观察期限内无肿瘤形成,而3个对照组各鼠皮下均有肿瘤形成,并且以相近速度快速增长(肿瘤体积平均3.5cm3)。2)治疗组,接种Hepa-CEA+/CEA-rV组小鼠皮下肿瘤生长缓慢,瘤块较小(平均1cm3),而3个对照组肿瘤生长迅速,瘤块较大(平均5cm3)。无论预防组和对照组小鼠在整个实验过程中均未表现有毒副反应。结论:CEA-rV对实验性阳性肿瘤具有良好的预防和治疗作用,而且预防作用更佳。

细胞因子诱导的杀伤细胞上清液的细菌内毒素检测

目的:通过试验建立细胞因子诱导的杀伤细胞(cyto-kine induced killer cells,CIK细胞)上清液细菌内毒素的检查方法。方法:参照中国药典(2005年版二部附录ⅪE)细菌内毒素检查法进行干扰试验。结果:用灵敏度0.25EU.mL-1的鲎试剂,同时将样品稀释40倍,进行细菌内毒素检查,可消除干扰作用。结论:细菌内毒素检查法可以用于CIK细胞上清液的细菌内毒素检测,对CIK细胞制剂进行质量控制。

CEA-rV负荷树突状细胞与CIK细胞共培养后对裸鼠结肠癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨负荷了CEA-rV的树突状细胞与CIK细胞共培养后在裸鼠体内特异性的抑瘤作用。方法在Balb/c裸鼠颈背皮下接种Lovo结肠癌细胞,次日起连续6d给予不同的效应细胞(CIK、DC+CIK、CEA-rV+DC+CIK)治疗,观察其对结肠癌生长的抑制作用。结果裸鼠体内实验表明,CEA-rV+DC+CIK能够显著抑制CEA阳性的Lovo结肠癌细胞的生长,其抑瘤率可达51.2%,明高于CIK组的25.1%以及DC+CIK组的28.5%。结论负荷CEA-rV的DC与CIK细胞共培养后在裸鼠体内对CEA阳性的Lovo结肠癌有特异性抑瘤作用。

去甲斑蝥素诱导人肾癌786-0细胞凋亡的体外研究

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)诱导人肾癌细胞株786-0凋亡的机制。方法实验分NCTD组和对照组,分别应用MTT法、流式细胞术和实时定量PCR检测NCTD对体外培养786-0细胞的生长抑制率、细胞周期和凋亡率以及肿瘤凋亡控制因子Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果NCTD能抑制786-0细胞生长,随着NCTD浓度升高、处理时间延长作用增强,有明显的时间-剂量依赖性。流式分析显示,786-0细胞的S期细胞减少,G2/M期细胞增多,凋亡率上升。实时定量PCR结果表明,在80μmol/L NCTD处理24h后,Bcl-2 mRNA表达量明显减少、Bax mRNA表达水平则升高,Bcl-2/Bax比值明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论NCTD可明显抑制786-0细胞的增殖和生长,诱导其凋亡,其机制可能与干扰786-0细胞生长周期、抑制DNA合成代谢以及影响凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。

HSPA5基因3′UTR区多态性与肝细胞癌的相关性

目的调查70kDa热休克蛋白5(HSPA5)基因3′非翻译区(UTR)的多态性与HCC发病风险之间的关系。方法从576例肝细胞癌患者和539例在性别和年龄上匹配的健康对照者外周血中提取DNA,采用TaqMan检测HSPA5基因3′UTR区的rs16927997、rs1140763和rs12009。结果连锁不平衡的分析确定了3种单倍型和6种双倍型。等位基因、基因型、单体型和双体型在肝癌患者和正常对照组之间的分布没有显著差异。结论本研究表明,HSPA5基因3'UTR的多态性不是有效预测肝细胞癌风险的诊断标志物。

一种KRAS基因突变检测方法的建立及初步应用

目的建立一种KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值。方法以KRAS基因热点突变区域12、13密码子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估。结果成功构建了KRAS基因12、13密码子野生型、突变型质粒。建立了KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高(9.39×101copies/uL),重复性好(实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1.60%、2.54%)。该法与传统Sanger测序法同时检测40例临床样品,结果符合率为100%。结论本研究成功建立了可用于临床样品检测的KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法。

人脐血来源树突状细胞的体外培养及鉴定

目的建立脐血来源树突状细胞（dendritic cells，DC）的体外培养方法，为进一步研究DC的功能、特性及临床应用提供了技术方法。方法取正常人脐血，分离获得单个核细胞，利用贴壁法去除悬浮细胞后，加入1000U／mL rhGM-CSF、500U／mL rhlL-4，至d7再加入500U／mLTNF-α进行培养，收集培养至d10的DC，分别从形态学、免疫表型和功能上加以鉴定。结果体外培养的d10，大量细胞出现典型的树突状形态；经流式细胞仪检测，高表达HLA-DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c；混合淋巴细胞反应显示其在体外能有效刺激同种淋巴细胞增殖。结论在合适的细胞因子组合下，能够在体外利用脐血成功诱导出成熟DC。

琵琶在唐诗中的演变

唐诗中琵琶意象的演变,见出不同时期的诗人们所关照的价值的不同,由盛唐、中唐、晚唐,具体而言呈现出由追求功业、关注个体命运、言个人情绪这样的脉络。

脐血来源树突状细胞的体外扩增、鉴定及冻存

目的研究脐血来源树突状细胞（DCs）的体外扩增、鉴定和冻存。方法用Ficoll分离获得脐血单个核细胞，以重组hGM—CSF、hIL-4及hTNF-α体外诱导培养14d。在DCs发育过程中，在光镜和电镜下观察其生长情况，应用流式细胞仪检测DCs表型。采用台盼蓝拒染法测定DCs增殖水平，MTT法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。同时用二甲亚砜作为保护剂，DCs经过-20℃和-80℃降温，在-196℃液氮保存，然后40℃水浴复苏。结果第6天体外培养的DCs由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞，随着培养时间的延长，此类细胞数量增多，第14天为形态不规则的毛刺状，为典型树突状细胞形态。流式细胞仪检测表明，成熟DCs高水平地表达HLA—DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c。被激活的T细胞对2种来源于不同组织的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性。冻存DCs和新鲜DCs的生物活性无明显差异。结论脐血单个核细胞细胞经hGM—CSF＋hIL-4＋hTNF—α体外培养，能诱导出DCs，为进一步开展DCs的实验研究与临床应用奠定了基础。

桥门式起重机智能安全监测系统研制

详细阐述了一种桥门式起重机智能安全监测系统,系统通过传感器获取各类监测信息,利用单片机对这些信息进行采集分析,基于ZigBee无线通信技术构建无线通信网络,实现了主从节点间的数据传输。采用Visual C++6.0开发了上位机监测软件,实现了桥门式起重机参数实时显示、分析和存储等功能。系统具有界面友好,速度快,成本低,性能稳定等特点,可以适应各种类型桥门式起重机的安全监测,具有较强的实用性和通用性。

健康人CIK细胞输注对恶性肿瘤患者细胞免疫功能的影响

目的:研究用健康人细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)输注前后恶性肿瘤患者外周血细胞免疫功能的变化。方法:分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),予rhIFN-γ、rhIL-2、rhIL-1β、CD3单克隆抗体(CD3mAb)诱导CIK细胞,回输至病人体内;比较肿瘤患者用CIK细胞治疗前后PBMC对K562的杀伤活性和外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况。结果:肿瘤患者治疗前PBMC杀伤活性和淋巴细胞亚群绝对计数均低于健康人,治疗后除NK细胞绝对计数未见明显改变外均有所提高,但仍比健康人低。结论:健康人CIK细胞治疗能提高肿瘤患者自身抗肿瘤能力。

荷CEA-rV的DC增强CD3AK对CEA阳性肿瘤的特异杀伤作用

癌胚抗原(carcino embryonic antigen,CEA)是一种常见的肿瘤相关抗原,是目前国际上公认的肿瘤标记物.在人体上皮细胞恶性肿瘤中,包括90%的胃肠道肿瘤、胰腺癌、80%以上的非小细胞肺癌和50%左右的乳腺癌,都呈CEA阳性.人们称这类肿瘤为CEA阳性肿瘤[1].罗超权等[2]用牛痘病毒构建的CEA-重组基因痘苗病毒(CEA-rV)既有CEA抗原的高表达,又可刺激机体产生CEA抗体.