细胞周期蛋白依赖性激酶4重组蛋白兔血清抗体的制备及鉴定

目的制备细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)重组蛋白兔血清抗体并鉴定其特性。方法将设计合成的CDK4基因克隆至载体pET21a(+)中,构建重组质粒pET21a(+)/CDK4,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经镍螯合亲和层析纯化,将纯化的重组蛋白CDK4与等量弗式佐剂混合,经背部皮下多点免疫日本大耳白兔,隔周1次,共免疫3次。于末次免疫后0(当天)、2、4、6、8周采血,分离血清。间接ELISA法检测效价,免疫荧光及免疫组化法检测特异性。结果经酶切及测序鉴定,重组质粒pET21a(+)/CDK4构建正确。重组蛋白CDK4相对分子质量约为19 100。第8周CDK4兔血清抗体效价达1∶163 840,能特异性识别宫颈癌Siha细胞及宫颈癌组织中表达的CDK4蛋白。结论成功制备了高效价、特异性强的CDK4兔血清抗体,为进一步研究CDK4生物学特性奠定了基础。