流式病毒检测法的应用进展

流式病毒检测法(flow virometry,FVM)是一种利用流式细胞仪检测单个病毒颗粒及其特征的前沿技术。通过FVM,可以精确测量样本中完整病毒颗粒的浓度、表面靶抗原的丰富度以及相对直径等关键参数,进而实现对单个病毒颗粒的高效分析和表征。随着仪器设备、荧光染料和标记策略的不断发展和优化,FVM得到了广泛的应用和研究。该方法不仅被用于实现对单个病毒颗粒的精确分析,还被用于细胞外泌体和微囊泡的检测。本文总结了FVM的发展历程以及病毒等微颗粒的常用标记方法和应用领域,旨在为FVM在病毒学、免疫学、生物医学等研究领域的进一步应用提供参考和借鉴。

马立克氏病病毒相关非编码RNA的研究进展

马立克氏病(Marek’s disease,MD)是一种禽类的淋巴组织增生性疾病,其特征是在禽类的多种组织器官中出现急性淋巴瘤并通过渗入外周神经系统导致其瘫痪和麻痹[1]。世界上各养禽地区均有MD的广泛流行且每年因MD造成的经济损失也很惨重[2]。因此,为了有效控制MD在鸡群中的发生和流行,降低MD对养禽业造成的经济影响,对MD病原学和致病机理的研究是必须的。

副猪嗜血杆菌Apd-ELISA抗体检测试剂盒的制备和初步应用

旨在对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的黏附素蛋白(autotransporter passenger domain,Apd)ELISA抗体检测方法进行参数优化、临界值确定和应用评价,获得性能稳定的副猪嗜血杆菌病抗体检测试剂盒。首先通过猪的免疫攻毒试验获得HPS阴、阳性对照血清,优化Apd-ELISA的反应参数;然后用背景确认的阴、阳性血清确定其临界值,并对封闭液及酶标板的包装方式进行选择;最后用Apd-ELISA试剂盒对临床样品进行检测并与荷兰Biocheck的OppA-ELISA试剂盒进行比较。结果表明,抗原包被质量浓度为0.5μg·mL^-1、被检血清以1:200倍稀释后反应45 min以及二抗稀释度为1:15000时,Apd-ELISA的反应背景下降,区分度提高。根据背景确认的27份阳性和40份阴性血清的OD630 nm值以及临界值计算公式(S-N)/(P-N),得到Apd-ELISA的阴阳性临界值是0.33。证实用封闭液K封闭和真空包装的酶标板可以在50℃保存4 d(相当于在4℃保存22个月)。用Apd-ELISA试剂盒检测1179份临床血清,表明母猪、后备和育肥猪以及仔猪的HPS血清阳性率分别为83.76%、61.09%和27.48%。与荷兰的Biocheck试剂盒进行比较,发现Apd-ELISA与Biocheck试剂盒(OppA-ELISA)对HPS临床阴性血清和疫苗免疫血清检测的符合率为100%,对HPS临床阳性血清的符合率仅为4.76%(6/126)。然而,Apd-ELISA与OppA Western blot的阳性符合率可达到73.02%(92/126)。本研究获得了能有效区分HPS阴、阳性血清和稳定保存的Apd-ELISA抗体检测试剂盒,可用于HPS灭活疫苗免疫后的抗体检测和副猪嗜血杆菌病的血清抗体检测。