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疟疾疫苗研究的现状和展望 被引量:12
1
作者 潘卫庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-4,共4页
疟原虫抗药性及疟蚊对杀虫剂抗性的产生和迅速扩散迫切需要研究新的疟疾防治方法 ,以控制该传染病的流行。根据自愿者试验、动物模型及现场研究结果 ,研制疫苗预防疟疾是可行的。当前 ,全球科学家正在研制 3种类型的疟疾疫苗——抗红内... 疟原虫抗药性及疟蚊对杀虫剂抗性的产生和迅速扩散迫切需要研究新的疟疾防治方法 ,以控制该传染病的流行。根据自愿者试验、动物模型及现场研究结果 ,研制疫苗预防疟疾是可行的。当前 ,全球科学家正在研制 3种类型的疟疾疫苗——抗红内期原虫疫苗、抗红前期原虫疫苗和传播阻断疫苗 ,其中一些候选疫苗已进入临床试验 ,并产生有意义的结果。由于疟原虫具有复杂的生活史、抗原变异和多种入侵途径 ,有效疫苗的研制将面临极大的困难 。 展开更多
关键词 疟疾 疫苗 预防 红内期 红前期 疟原虫
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恶性疟P190抗原基因的表达及免疫学研究 被引量:1
2
作者 潘卫庆 杨树桐 +1 位作者 邓海琳 陆德如 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期306-311,共6页
克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原三肽重复区基因,定名为P190TR。该基因片段经DNA序列分析鉴定后连接到改建的pGEX-2T表达载体BamHI和XbaI位点中,经鉴定的重组质粒转化感受态JM109(DE3)大肠杆菌进行表达。结果显示:该基因得到高效融... 克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原三肽重复区基因,定名为P190TR。该基因片段经DNA序列分析鉴定后连接到改建的pGEX-2T表达载体BamHI和XbaI位点中,经鉴定的重组质粒转化感受态JM109(DE3)大肠杆菌进行表达。结果显示:该基因得到高效融合表达,经一步亲和纯化后就取得高纯度的重组蛋白。用纯化的表达蛋白免疫动物亦产生P190TR特异性抗体。 展开更多
关键词 P190抗原 基因表达 免疫学 恶性疟
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恶性疟P190抗原保守区Ⅰ、Ⅴ基因的亚克隆及在大肠杆菌中高效表达
3
作者 潘卫庆 杨树桐 +1 位作者 邓海琳 陆德如 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期205-209,共5页
作者采用PCR方法克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原两个保守区基因,分别定名为P190CRI和P190CRV。基因片段经纯化后连接到pUC18载体中进行DNA序列分析,结果显示:除了P190CRV中有5个碱基变换外,其余序列均与MAD20型序列一致。经序列分... 作者采用PCR方法克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原两个保守区基因,分别定名为P190CRI和P190CRV。基因片段经纯化后连接到pUC18载体中进行DNA序列分析,结果显示:除了P190CRV中有5个碱基变换外,其余序列均与MAD20型序列一致。经序列分析的两个基因片段分别与pGEX-2T载体连接,经双酶切鉴定后转化感受态JM109(DE_3)大肠杆菌进行高效融合表达,并且用Sepharose 4B-谷胱甘肽层析柱进行亲和纯化,结果为:两个插入基因片段均得到高效融合表达,经一步亲和纯化后就取得高纯度的重组蛋白。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 疟疾疫苗 遗传工程
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恶性疟红细胞结合抗原功能区基因的克隆及其序列变异性的研究
4
作者 潘卫庆 陆德如 +1 位作者 缪为民 管惟滨 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1992年第10期20-23,共4页
关键词 疟原虫 疟疾 疫苗 基因序列
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恶性疟原虫红内期疫苗研究进展
5
作者 潘卫庆 陆德如 《国外医学(寄生虫病分册)》 北大核心 1992年第4期149-152,共4页
T淋巴细胞在疟疾免疫中起重要作用,因此在疫苗设计时应注重掺入T细胞表位。活的减毒细菌或病毒载体在携带异源抗原和诱生细胞免疫方面具有重要作用。红内期MSA1,MSA2,RESA和EBA-175抗原等被列为重要疫苗候选抗原,它们的一些保护性表位... T淋巴细胞在疟疾免疫中起重要作用,因此在疫苗设计时应注重掺入T细胞表位。活的减毒细菌或病毒载体在携带异源抗原和诱生细胞免疫方面具有重要作用。红内期MSA1,MSA2,RESA和EBA-175抗原等被列为重要疫苗候选抗原,它们的一些保护性表位也已鉴定。SPf.66合成肽疫苗目前受到很大关注,并已进入人体临床试验。本文还展望了红内期疫苗的发展前景。 展开更多
关键词 疟原虫 红内期 疫苗
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毕赤氏酵母工程菌高密度发酵表达恶性疟原虫融合抗原的研究 被引量:5
6
作者 郭美锦 吴康华 +5 位作者 储炬 庄英萍 张嗣良 黄大庆 张青锋 潘卫庆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期456-459,共4页
The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in geneti... The effects of cultural conditions,which were fermentation period when methanol was as sole carbon source,methanol concentration,range of pH,on the expression of the chimeric protein of Plasmodium falciparum in genetically engineered methylotrophic Pichia pastoris were investigated by shake flask experiments in this paper.The results showed:(1)fermentation period with methanol inducement is about 96 hours;(2)the optimum methanol concentration as sole carbon source is 10g/L;(3)the range of pH is from 6.0 to 7.0. On the base of above experimental results the cell high-density fermentation had been done on the FMG-5L fermentor with multi-sensors.The results showed that the cell optical density (OD 600) can reached 550 and the ma-ximum expression level of target proteins was 780mg/L which was 4 times higher or more than the shake flask culture’s. 展开更多
关键词 甲醇营养型毕赤酵母 恶性疟原虫融合抗原 发酵条件 优化 高密度发酵 表达
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Nest-PCR和PCR-RFLP在恶性疟原虫地理株基因分型及多态性研究中的应用 被引量:7
7
作者 张青锋 胡晶莹 +1 位作者 杨月欣 潘卫庆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期95-98,共4页
目的分析套式PCR(nest-PCR)和限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法在恶性疟原虫地理株裂殖子表面蛋白(MSP2)基因多态性研究中的分型效率及特异性。方法分别在海南省三亚市和云南省腾冲县等地通过静脉采血法采集疟疾患者血样98份,... 目的分析套式PCR(nest-PCR)和限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法在恶性疟原虫地理株裂殖子表面蛋白(MSP2)基因多态性研究中的分型效率及特异性。方法分别在海南省三亚市和云南省腾冲县等地通过静脉采血法采集疟疾患者血样98份,其中恶性疟88份,间日疟10份。另从上海地区的健康人群中抽取10份血样作为阴性对照。用nest-PCR和PCR-RFLP方法分别对疟原虫地理株进行MSP2等位基因分型,并对分型结果进行归纳和比较分析。结果常规nest-PCR方法对于恶性疟原虫地理株MSP2等位基因的总检出效率为79.8%(166/208),其中,对于FC27家族等位基因的检出效率为92.7%(101/109),但对3D7家族等位基因的检出率仅为65.7%(65/99),且无法鉴定具体的等位基因。PCR-RFLP分型法检出效率比nest-PCR法提高了20.2%,且特异性好。结论PCR-RFLP相对于常规的nest-PCR分型法具有检出效率、分辨率和特异性皆高的优点,可以鉴定地理株中具体的等位基因类型。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 MSP-2 RFLP 等位基因分型
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恶性疟原虫对青蒿素产生抗性的研究进展 被引量:31
8
作者 张逸龙 潘卫庆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期418-424,共7页
青蒿素及其衍生物是我国发明的强效抗疟药,WHO已推荐以青蒿素为基础的联合用药(ACTs)为治疗恶性疟的一线药物。青蒿素及其衍生物的应用已使全球疟疾流行得到了有效控制,疟疾发病率和死亡率逐年下降。但近年来,在东南亚多个地区陆续报道... 青蒿素及其衍生物是我国发明的强效抗疟药,WHO已推荐以青蒿素为基础的联合用药(ACTs)为治疗恶性疟的一线药物。青蒿素及其衍生物的应用已使全球疟疾流行得到了有效控制,疟疾发病率和死亡率逐年下降。但近年来,在东南亚多个地区陆续报道恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)对青蒿素类药物产生抗性,并有进一步扩散的趋势,这已严重威胁到全球疟疾防治和消除疟疾计划的实施。本文综述近年来恶性疟原虫对青蒿素产生抗性研究领域的相关研究进展,包括青蒿素抗药性的检测方法、抗性相关的分子标记、抗性虫株的起源及传播流行等。 展开更多
关键词 青蒿素 恶性疟原虫 抗药性 起源
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重组恶性疟原虫DNA质粒免疫小鼠及抗原表达的调控 被引量:6
9
作者 谢文凯 陈启宇 +3 位作者 汪群斌 潘卫庆 颜日辉 陆德如 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期13-16,共4页
将恶性疟原虫MSP131基因序列,引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE,获得重组质粒pTRE31。将MSP131的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP131,亲和纯化后作检测用抗原。pTRE31与辅助质粒pTetoff(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,观察... 将恶性疟原虫MSP131基因序列,引入四环素(Tc)控制的真核表达载体pTRE,获得重组质粒pTRE31。将MSP131的原核表达载体pDS56T1转化大肠杆菌表达MSP131,亲和纯化后作检测用抗原。pTRE31与辅助质粒pTetoff(tTA)肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,观察DNA介导免疫情况。结果显示,四环素饲喂的小鼠4周时血清抗体阳转率为71%(1/14),而不饲喂四环素组可达100%(14/14),表明用pTRE31/pTetoff重组质粒组合直接注射小鼠有效地引发了针对疟原虫MSP131抗原的体液免疫反应,且可受控于四环素。不饲喂四环素组小鼠在12周后仍能维持抗体阳性,倍比稀释ELISA显示血清抗体滴度在4周、8周和12周内持续上升。饲喂四环素组小鼠4周后停止饲喂Tc,第8周和第12周检测仍有部分(60%)小鼠血清抗体阳转,而继续饲喂Tc的小鼠未有抗体阳转,暗示重组质粒DNA在小鼠体内可持续存在至少4周并仍具备表达功能。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 DNA疫苗 四环素 Tet-off调控系统
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我国疟疾疫苗研究进展及前景 被引量:12
10
作者 张冬梅 潘卫庆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期390-393,共4页
研发安全有效的疟疾疫苗是当前全球疟疾防治的重要需求。以生物技术为代表的新型技术的应用,有效推动了疟疾疫苗的研发进程。30多年疟疾疫苗研发已取得了重要的成果,鉴定了一批有价值的疫苗候选抗原,其中一些已进入临床试验,一些结果令... 研发安全有效的疟疾疫苗是当前全球疟疾防治的重要需求。以生物技术为代表的新型技术的应用,有效推动了疟疾疫苗的研发进程。30多年疟疾疫苗研发已取得了重要的成果,鉴定了一批有价值的疫苗候选抗原,其中一些已进入临床试验,一些结果令人鼓舞。我国疟疾疫苗研发同样取得可喜进展。自主研制PfCP-2.9疟疾疫苗在国内率先进入临床试验,一些疟疾疫苗候选抗原也陆续进入临床前研究阶段。近年来,多种国家科技计划和国际上研究经费的投入也促进我国疟疾疫苗的研发工作。尽管研发有效疫苗以控制乃至根除疟疾是个长期目标,取得疟疾疫苗突破仍需在疟疾免疫学以及多个技术层面上解决一些关键问题,但我们正在朝着这个目标迈进。 展开更多
关键词 疟疾 疫苗 研究 进展
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重组恶性疟原虫红细胞结合抗原175功能区的制备及联合免疫 被引量:6
11
作者 张冬梅 潘卫庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期14-17,共4页
目的 :全合成恶性疟原虫 eba- 1 75 f2基因并在毕氏酵母中进行高效分泌表达 ,用该重组蛋白与我室研制的疟疾疫苗候选抗原 Pf CP- 2 .9进行联合免疫以观察是否存在竞争性免疫抑制。方法 :采用不对称 PCR法拼接合成 eba- 1 75 f2基因(95... 目的 :全合成恶性疟原虫 eba- 1 75 f2基因并在毕氏酵母中进行高效分泌表达 ,用该重组蛋白与我室研制的疟疾疫苗候选抗原 Pf CP- 2 .9进行联合免疫以观察是否存在竞争性免疫抑制。方法 :采用不对称 PCR法拼接合成 eba- 1 75 f2基因(95 9bp) ,用电转化方法将合成基因导入毕氏酵母中并进行诱导表达 ,采用离子交换层析和分子筛层析纯化 EBA- 1 75 F2蛋白。 结果 :全合成 eba- 1 75 f2基因在毕氏酵母中高效分泌表达。重组 EBA- 1 75 F2和 Pf CP- 2 .9联合免疫后 ,以 EL ISA和IFA检测 ,针对 2个蛋白联合免疫的抗体滴度明显高于 2个蛋白单独免疫的滴度。 结论 :重组 EBA- 1 75 F2和 Pf CP- 2 .9联合免疫时不存在竞争性免疫抑制 ,这 展开更多
关键词 重组红细胞结合抗原 175功能区 制备 联合免疫 恶性疟原虫 疟疾 疫苗
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恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT免疫原性及免疫保护作用的研究 被引量:2
12
作者 肖景莹 张冬梅 +2 位作者 蔡连顺 沈璐辉 潘卫庆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期192-195,共4页
目的探讨在毕赤酵母中表达的恶性疟原虫重组蛋白次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGX-PRT)诱导小鼠产生的免疫原性和免疫保护作用。方法35只BALB/c小鼠随机分为HGXPRT+ISA720实验组、HGXPRT+福氏佐剂试验组、ISA720对照组、福氏... 目的探讨在毕赤酵母中表达的恶性疟原虫重组蛋白次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGX-PRT)诱导小鼠产生的免疫原性和免疫保护作用。方法35只BALB/c小鼠随机分为HGXPRT+ISA720实验组、HGXPRT+福氏佐剂试验组、ISA720对照组、福氏佐剂对照组和空白对照组等5组。HGXPRT(50μg/200μl)经小鼠后腿皮下免疫3次,间隔3周。每次免疫后2周尾静脉采血,ELISA检测血清特异性抗体水平。以间接免疫荧光试验(I-FAT)分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况。于末次免疫后10d,各组小鼠经腹腔攻击感染约氏疟原虫致死株105个,继而每隔1d采尾血制薄血片,观察原虫感染的动态变化。结果重组蛋白HGXPRT经与佐剂乳化后免疫的小鼠均诱导出针对HGXPRT的体液免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达到1∶105以上,而两佐剂组和空白对照组小鼠均未产生特异性抗体。经HGXPRT诱导血清能识别恶性疟原虫天然HGXPRT抗原。经约氏疟原虫致死株攻击感染后4d,两佐剂对照组和空白对照组疟原虫感染高峰相比实验组提前1d。HGXPRT+ISA720实验组平均原虫率(29.3%)明显低于ISA720对照组(70.0%)和空白对照组(70.0%)(P<0.05);HGXPRT+福氏佐剂实验组平均原虫率(51.0%)亦明显低于福氏佐剂对照组(60.7%)与空白对照组(70.0%)(P<0.05)。结论恶性疟原虫重组蛋白HGXPRT对小鼠有较强的免疫原性,产生的抗体能识别恶性疟原虫HGXPRT天然蛋白,并对疟原虫攻击感染后的小鼠有一定免疫保护作用。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 毕赤酵母 次黄嘌呤-鸟嘌呤-黄嘌呤磷酸核糖转移酶 免疫原性 约氏疟原虫
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恶性疟原虫AMA-1基因变异区在大肠杆菌中的诱导表达 被引量:2
13
作者 聂本勇 张龙兴 +1 位作者 潘卫庆 钱锋 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期198-200,共3页
目的 恶性疟原虫 (P.f .) AMA- 1蛋白抗原在大肠杆菌中的表达。 方法 以 FCC1/ HN基因组DNA作为模板 PCR扩增 AMA- 1基因变异区 ,扩增产物以 Bam H 和 H ind 双酶酶切后作为插入片段 ,与具有相同粘性末端的表达质粒 p QE- 40连接 ,并... 目的 恶性疟原虫 (P.f .) AMA- 1蛋白抗原在大肠杆菌中的表达。 方法 以 FCC1/ HN基因组DNA作为模板 PCR扩增 AMA- 1基因变异区 ,扩增产物以 Bam H 和 H ind 双酶酶切后作为插入片段 ,与具有相同粘性末端的表达质粒 p QE- 40连接 ,并用 DNA自动测序仪测定 AMA- 1DNA片段的序列。取含重组表达质粒的重组菌株以 IPTG进行诱导表达 ,表达产物以 SDS- PAGE电泳和以兔抗 AMA- 1抗血清进行 Western blotting分析鉴定。 结果  FCC1/ HN AMA- 1基因变异区 DNA序列长度为 5 0 6 bp,预计编码 16 8个氨基酸。 Westernblotting分析确认诱导后的 SG130 0 9/ AMA- 1表达产物在分子量约 2 3.0 k Da处出现 1条与兔抗 AMA - 1抗血清特异反应的条带。 结论  FCC1/ HN AMA- 1基因变异区在大肠杆菌中获得表达 ,Western 展开更多
关键词 恶性疟原虫 AMM-1基因变异区 克隆 大肠杆菌 基因表达 聚合酶链反应
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CCK-8法检测疟原虫HGXPRT蛋白刺激对淋巴细胞的增殖作用 被引量:6
14
作者 王冰 张冬梅 潘卫庆 《中国热带医学》 CAS 2006年第6期949-949,957,共2页
目的检测疟原虫HGXPRT蛋白刺激淋巴细胞的增殖效果。方法以HGXPRT蛋白免疫小鼠后制备淋巴细胞,与相应刺激物共同培养后采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果不同浓度的HGXPRT对淋巴细胞的刺激效果不同,以5μg/ml时刺激增殖效果最好... 目的检测疟原虫HGXPRT蛋白刺激淋巴细胞的增殖效果。方法以HGXPRT蛋白免疫小鼠后制备淋巴细胞,与相应刺激物共同培养后采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果不同浓度的HGXPRT对淋巴细胞的刺激效果不同,以5μg/ml时刺激增殖效果最好。结论HGXPRT对淋巴细胞具有增殖作用。 展开更多
关键词 HGXPRT蛋白 淋巴细胞增殖 CCK-8 疟原虫
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药学专业医学寄生虫学教学的实践与思考 被引量:5
15
作者 张冬梅 朱淮民 潘卫庆 《热带医学杂志》 CAS 2004年第6期769-770,共2页
21世纪需要高素质人才,素质教育是关键。从一定意义上说素质教育就是因材施教,高等医学院校基础医学教育同样需要因材施教。本文从优化教学内容、优化教学方法等方面论述了因材施教开展药学专业医学寄生虫学教学的体会。
关键词 因材施教 医学寄生虫学 素质教育
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计算机辅助教学用于医学寄生虫学教学改革的构思 被引量:5
16
作者 张冬梅 潘卫庆 《中国热带医学》 CAS 2004年第5期869-870,共2页
2 1世纪需要高素质人才 ,为适应新世纪教改和培养高素质人才的需要 ,医学寄生虫学的教学现代化势在必行 ,现论述运用计算机辅助教学等现代教学手段改革医学寄生虫学教学的一些构思。
关键词 计算机辅助教学 学用 构思 高素质人才 教改 现代教学手段 教学现代化 医学寄生虫学教学 改革 适应
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在减毒伤寒杆菌CVD908疫苗株中四环素诱导表达恶性疟原虫MSP1-31片段基因 被引量:3
17
作者 钱锋 潘卫庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期51-53,共3页
目的 :用含 PL tet O启动子的 p ZE11质粒在减毒伤寒杆菌 CVD90 8疫苗株中表达恶性疟原虫 MSP1- 31片段基因。 方法 :构建受四环素诱导调控的重组质粒 p ZE11/ MSP1- 31,将该重组质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌 CVD90 8/ tet R... 目的 :用含 PL tet O启动子的 p ZE11质粒在减毒伤寒杆菌 CVD90 8疫苗株中表达恶性疟原虫 MSP1- 31片段基因。 方法 :构建受四环素诱导调控的重组质粒 p ZE11/ MSP1- 31,将该重组质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌 CVD90 8/ tet R疫苗株中 ,用免疫印迹反应检测 MSP1- 31在 CVD90 8/ tet R株中的四环素诱导表达。结果 :构建了重组的 p ZE11/ MSP1- 31质粒 ,免疫印迹反应显示该 MSP1- 31基因在 CVD90 8/ tet R株中得到有效表达 ,且依赖于四环素的存在。结论 :成功地构建了由四环素诱导的、表达恶性疟原虫 MSP1- 31的减毒伤寒杆菌疫苗株。 展开更多
关键词 伤寒沙门氏菌 恶性疟原虫 裂殖子表面蛋白-1 四环素 基因表达 PLteto启动子
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恶性疟原虫Var基因家族的变异调控机制 被引量:4
18
作者 张青锋 潘卫庆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期337-341,共5页
本文对恶性疟原虫变异抗原基因家族(Var基因)变异机制的研究进行了综述。Var基因家族的近60个基因中只有一个能够得到表达,其余皆被沉默。这种相互排斥性表达机制是在转录水平上进行控制的,主要包括三方面调控途径:非编码DNA元件、染色... 本文对恶性疟原虫变异抗原基因家族(Var基因)变异机制的研究进行了综述。Var基因家族的近60个基因中只有一个能够得到表达,其余皆被沉默。这种相互排斥性表达机制是在转录水平上进行控制的,主要包括三方面调控途径:非编码DNA元件、染色质结构以及核外周基因位点的迁移。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 Var基因家族 基因变异 基因调控
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恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9的单克隆抗体制备及功能分析 被引量:1
19
作者 王瑞 钱锋 +1 位作者 曲莉 潘卫庆 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期247-250,共4页
目的制备恶性疟原虫(FCC1/HN株)融合抗原PfCP-2.9的单克隆抗体,分析其生物学特性及功能。方法用PfCP-2.9免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG1500)作用下进行融合,制备单克隆抗体,并分析其特性。结果获得1株能分... 目的制备恶性疟原虫(FCC1/HN株)融合抗原PfCP-2.9的单克隆抗体,分析其生物学特性及功能。方法用PfCP-2.9免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG1500)作用下进行融合,制备单克隆抗体,并分析其特性。结果获得1株能分泌抗PfCP-2.9的小鼠杂交瘤细胞株单克隆抗体F12D,经免疫球蛋白类型和亚类鉴定为IgG1。ELISA和蛋白质印迹法(Westernblotting)显示单克隆抗体F12D能与PfCP-2.9发生特异性反应,F12D所识别的PfCP-2.9抗原表位不能耐受还原剂巯基乙醇,表明F12D识别的是构象表位。间接免疫荧光试验(IFA)显示F12D可识别培养的FCC1/HN。体外抑制试验结果显示,F12D终浓度为0.3mg/ml时,对FCC1/HN的抑制率为56%。结论单克隆抗体F12D能与PfCP-2.9发生特异性反应,其所识别表位为构象表位,F12D可识别体外培养的FCC1/HN,并对其生长具有抑制作用。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 疟疾疫苗 单克隆抗体 免疫显性表位
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Cre/loxP介导的伤寒杆菌染色体上插入基因的切除 被引量:1
20
作者 钱锋 潘卫庆 杜景伶 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期732-735,共4页
来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具 ,在体内外都获得了成功的应用 .为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD90 8株中 ,tetR loxP neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD90 8株的△... 来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具 ,在体内外都获得了成功的应用 .为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD90 8株中 ,tetR loxP neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD90 8株的△aroC位点中 .构建一Cre酶表达受启动子PLtetO 1控制的自杀质粒 pJG9/Cre ,以切除CVD90 8株△aroC中同向loxP序列之间的neo基因 .质粒pJG9/Cre电转化入菌中 ,加入去水四环素诱导Cre酶表达 ,通过重组切除neo基因 ,再通过自杀质粒上SacB基因的启动 ,使质粒清除出菌细胞 .抗生素鉴定和PCR扩增都证明 ,CVD90 展开更多
关键词 CRE LOXP 位点专一性重组 基因切除 伤寒杆菌 染色体 疫苗
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