RNA干扰缺氧诱导因子2对肾癌786-0细胞的影响

目的:研究RNA干扰缺氧诱导因子2(HIF-2)对肾癌786-0细胞的影响。方法:合成HIF-2RNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;转染人肾癌786-0细胞,RT-PCR、Western印迹法检测HIF-2 RNAi表达载体对HIF-2基因表达的影响,MTT法检测转染HIF-2 RNAi表达载体对细胞生长作用,裸鼠种植肿瘤观察RNA干扰组对肿瘤生长的影响。结果:RNA干扰组HIF-2mRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组HIF-2mRNA的表达(P<0.01),空载体组HIF-2mRNA的表达没有受到影响;RNA干扰组的HIF-2蛋白表达明显降低,明显低于空载体组和对照组(P<0.01),空载体组和对照组HIF-2蛋白的表达无显著差异;RNA干扰组细胞生长减慢,RNA干扰组肿瘤体积和瘤重均小于空白组(P<0.01)。结论:RNA干扰HIF-2可以抑制肾癌786-0细胞HIF-2的表达和抑制细胞生长,减慢裸鼠肿瘤的生长;为肾癌的生物治疗提供一定的实验基础。

缺氧诱导因子-1与前列腺癌研究进展

缺氧诱导因子-1(HIF-1)与前列腺癌存在密切的关系。研究表明HIF-1在前列腺癌中不但与血管生成因子、增殖与存活因子、葡萄糖转运以及糖分解酶等有关,而且与p53、p21、信号转导通路等有关。通过对HIF-1的深入研究将对前列腺癌的诊断与治疗提供新的思路。现对HIF-1的结构、功能及与前列腺癌关系进行综述。

RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究

目的:构建前列腺癌血管内皮生长因子(VEGF)RNA干扰(RNAi)真核表达载体,并研究RNAi对前列腺癌VEGF表达的影响。方法:合成VEGFRNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;RNAi表达载体转染人前列腺癌PC-3细胞,Western印迹法检测VEGFRNAi表达载体对VEGF蛋白表达的影响,MTT法检测转染VEGFRNAi表达载体对细胞生长的抑制作用。结果:成功构建VEGFRNAi真核表达载体;VEGFRNAi组VEGF蛋白的表达明显降低,显著低于空载体组和未转染的对照组;前列腺癌PC-3细胞24、48、72h的生长抑制率分别为23.5%、33.5%、40.8%。结论:VEGFRNAi可以抑制前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达和抑制细胞生长,为前列腺癌的生物治疗提供一定的实验基础。

人反义血管内皮生长因子基因载体构建及对肾细胞癌血管内皮生长因子表达的影响

目的:构建反义血管内皮生长因子基因表达载体,观察其对肾癌细胞血管内皮生长因子表达的影响。方法:实验于2006-07/2007-03在郑州大学第三附属医院实验中心完成。①实验材料:质粒pcDNA3.1(-),宿主菌DH5α,肾癌细胞株786-0。②实验过程:克隆人血管内皮生长因子基因,将反义血管内皮生长因子基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)表达载体,酶切鉴定;转染人肾癌细胞,并分别命名为反义血管内皮生长因子组和空载体组,未转染细胞命名为对照组;G418筛选阳性克隆。③实验评估:反转录-聚合酶链反应方法检测血管内皮生长因子mRNA的表达,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子基因的蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长情况。结果:①成功构建反义血管内皮生长因子基因表达载体。②反义血管内皮生长因子组血管内皮生长因子mRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组血管内皮生长因子mRNA的表达(P<0.01),空载体组血管内皮生长因子mRNA的表达没有受到影响。③反义血管内皮生长因子组的血管内皮生长因子蛋白表达明显降低,明显低于空载体组和对照组(P<0.01),空载体组和对照组血管内皮生长因子蛋白的表达差异无显著性。④反义血管内皮生长因子组细胞生长减慢,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,反义血管内皮生长因子组细胞生长明显减慢。结论:成功构建血管内皮生长因子的pcDNA3.1(-)反义基因表达载体,人反义血管内皮生长因子基因可明显降低肾癌细胞血管内皮生长因子基因在转录和翻译水平的表达,抑制肾癌细胞生长,为肾癌基因治疗提供一定的实验依据。

肾癌缺氧诱导因子2小干扰RNA表达载体的构建及筛选

目的:构建肾癌缺氧诱导因子2(HIF-2)小干扰RNA真核表达载体,并研究其对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。方法:根据GenBank数据库提供的HIF-2基因核苷酸序列,选择设计双链小干扰RNA,合成HIF-2RNAi片段No1、No2、No3和对照片段,将RNAi片段定向克隆于pSilencer2.1-U6neo真核表达载体,转化感受态菌,挑取阳性载体克隆,DNA测序进行鉴定;培养人肾癌786-0细胞,在脂质体的介导下分别将No1、No2、No3和对照片段重组载体转染入人肾癌786-0细胞,并设未转染组,WesternBlot法检测各载体对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。结果:构建的HIF-2RNAi真核表达载体经DNA测序证实与设计完全一致,转染肾癌786-0细胞24h后,No1组、No2组和No3组HIF-2蛋白表达水平降低(分别为0.05±0.00、0.11±0.01、0.15±0.01),与未转染组(0.22±0.02)和对照组(0.21±0.01)相比,差异有统计学意义(F=83.85,P<0.05);未转染和对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建人肾癌HIF-2RNAi真核细胞表达载体,并可有效干扰肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白的表达。

无症状肾上腺偶发瘤46例临床分析

目的提高无症状肾上腺偶发瘤的诊断和治疗水平。方法对46例无症状肾上腺偶发瘤病例的临床资料进行分析研究。结果46例无症状肾上腺偶发瘤患者年龄25-76岁,平均51岁;良性肿瘤43例(93.4%),恶性肿瘤3例(6.6%);无分泌功能肿瘤21例(45.6%),有分泌功能肿瘤13例(28.2%);行开放手术切除20例(43.4%),腹腔镜手术切除23例(50%),未手术3例(6.6%)。结论对无症状肾上腺偶发瘤应联合应用影像学和实验室检查以明确诊断;大多数无症状肾上腺偶发瘤应行手术治疗,小于2cm者可长期随访。

人反义VEGF基因对肾癌细胞VEGF表达的影响

目的:构建反义VEGF基因真核表达载体,研究其对肾癌细胞VEGF表达的影响。方法:克隆人 VEGF基因,将反义VEGF基因定向克隆于质粒PCDNA3．1(-)真核表达载体,酶切鉴定;转染入肾癌细胞,G418筛选阳性克隆。RT-PCR方法检测VEGFMRNA的表达,免疫组化法检测VEGF基因的蛋白表达,MTT法测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期。结果:成功构建反义VEGF基因真核表达载体;反义VEGF组VEGFMRNA的表达受到抑制, 明显低于空载体组和对照组VEGFMRNA的表达,空载体组VEGFMRNA的表达没有受到影响;反义VEGF组的VEGF 蛋白表达明显低于空载体组和对照组,空载体组和对照组VEGF蛋白的表达无显著差异;反义VEGF组细胞生长减慢,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论:人反义VEGF基因可明显降低肾癌细胞VEGF基因在转录和翻译水平的表达,抑制肾癌细胞生长,为肾癌基因治疗提供一定的实验依据。

SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨SEPT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化精子,免疫细胞化学技术检测SEPT4在特发性弱精子症患者和正常男性精子中的定位及表达变化,同时用RT-PCR和W estern印迹技术,从基因和蛋白水平检测SEPT4的表达及差异。结果:免疫细胞化学表明,SEPT4定位于精子环并且在特发性弱精子症患者精子中的表达显著低于正常男性(94.75±19.95vs111.51±17.57,t=3.452,P<0.01);RT-PCR显示,特发性弱精子症患者精子中SEPT4 mRNA的表达水平与正常男性相比显著降低(0.56±0.15vs0.71±0.16,t=3.521,P<0.05);W estern印迹结果与RT-PCR结果一致,SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达亦显著低于正常男性(0.48±0.20vs0.77±0.18,t=5.872,P<0.05)。结论:SEPT4在特发性弱精子症患者精子中的表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的原因之一。

CATSPER1蛋白与特发性弱精子症关系的研究

目的:探讨CATSPER1蛋白在特发性弱精子症发病中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离精子,免疫细胞化学技术检测CATSPER1蛋白在特发性弱精子症患者精子中的定位及表达变化;同时用蛋白印迹技术检测CATSPER1蛋白在正常对照组及轻度弱精子症组、中度弱精子症组和重度弱精子症组中表达的差异,进行统计学分析。结果:CATSPER1蛋白定位于精子鞭毛主段;与正常对照组相比,CATSPER1在弱精子症患者中的表达下降,差异具有显著性(t=2.188,P=0.042);CATSPER1蛋白在正常对照组、轻度弱精子症组、中度弱精子症组和重度弱精子症组中的相对含量分别为(0.806±0.266)、(0.669±0.207)、(0.505±0.214)、(0.295±0.162),与对照组相比,CATSPER1蛋白相对表达量在各弱精子症组均存在不同程度的下降,差异存在显著性(P<0.05)。前向运动精子(a+b级)百分率与CATSPER1蛋白的含量成正相关(r=0.633,P=0.000)。结论:CATSPER1蛋白表达下降或异常可能是导致特发性弱精子症发生的一个环节。

特发性弱精子症患者精子中TCTE3的表达

目的:探讨T复合体相关睾丸表达3(TCTE3)与特发性弱精子症发生的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常成年男性(正常对照)和特发性弱精子症患者各30例精子标本中TCTE3 mRNA和蛋白的表达。结果:TCTE3 mRNA和蛋白在特发性弱精子症组精子中的相对表达量均低于正常对照组(t=3.038和2.460,P=0.005和0.017)。结论:TCTE3表达的降低可能在弱精子症的发生中起着重要作用。

河南省育龄男性精液质量调查分析

目的:了解河南省育龄男性精液质量现状。方法:随机取集2008年7月～2010年7月到郑州大学第三附属医院人类精子库志愿供精人员及河南省、地市妇幼保健院进行婚前体检和孕前体检的4052名正常育龄男性进行问卷调查,并采用计算机辅助精液分析系统进行精液运动指标分析。结果:4052名志愿者的精液量为2.60±1.39ml,精子密度为(57.85±24.19)×106/ml,a级精子百分率为(29.87±16.01)%,(a+b)级精子百分率为(51.28±22.15)%,正常形态精子百分率为(11.42±4.11)%;精液各项参数正常1254例(30.95%),异常者2798例(69.05%)。豫南地区育龄男性中,吸烟、饮酒、高温洗浴的人数低于河南省其他地区(P<0.05),其精子密度、精子活动力优于河南省其他地区(P<0.05)。结论:男性生殖健康应引起全社会的广泛关注,不良生活习惯和环境污染可能是影响育龄男性精液质量的重要因素。

生精片治疗精液不液化100例临床研究

目的:研究生精片治疗精液不液化的疗效,探讨其可能机制,寻求一种治疗精液不液化的有效药物。方法:150例精液不液化患者,随机分为治疗组100例,对照组50例,分别口服生精片和维生素E胶囊,45 d为1个疗程,连续观察2个疗程,记录精液液化时间及其他参数变化情况。结果:1个疗程后,治疗组痊愈68例,有效20例,无效12例;2个疗程后痊愈84例,有效9例,无效7例,治愈率(痊愈+有效)达93.0%;对照组2个疗程后痊愈8例,有效8例,无效34例,与对照组比较有统计学差异(P<0.01)。同时生精片可以显著提高精子密度和精子活力。结论:生精片可显著缩短精液液化时间,临床治疗精液不液化效果显著,安全可靠。

TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨TEKT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化特发性弱精子症患者和正常男性精子,采用RT-PCR和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测TEKT4的表达及其差异。结果:RT-PCR结果表明,TEKT4 mRNA在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比显著降低(0.59±0.13 vs 0.75±0.15,t=4.325,P<0.05);Western印迹结果与RT-PCR结果一致,TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比亦显著降低(0.48±0.14 vs 0.69±0.13,t=5.939,P<0.05)。结论:特发性弱精子症患者精子中TEKT4表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的重要环节之一。

紧密连接蛋白11在非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:分析紧密连接蛋白11(CLAUDIN-11)在非梗阻性无精子症(NOA)患者不同生精障碍类型的睾丸组织中的表达情况,探讨其临床意义。方法:62例NOA患者按不同病理类型分为精子发生能力低下(HS)组和唯支持细胞综合征(SCO)组,其中HS组30例,SCO组32例。免疫组化法检测CLAUDIN-11在睾丸组织中的表达,实时荧光定量PCR检测CLAUDIN-11 mRNA的表达变化,化学发光法检测生殖激素在两组间的差异。结果:免疫组化结果显示,CLAUDIN-11在HS组的表达主要分布于靠近生精小管管壁的支持细胞胞质,在SCO组的表达定位混乱。实时荧光定量PCR结果显示,CLAUDIN-11 mRNA在SCO组表达高于HS组,分别为0.013±0.002、0.008±0.001(t=10.616,P<0.01)。血清LH和FSH在HS组和SCO组患者中差异显著[(3.62±1.34)IU/L vs(4.96±3.10)IU/L,(5.36±2.80)IU/L vs(10.65±9.18)IU/L,P均<0.05]。结论:CLAUDIN-11在睾丸支持细胞上的表达上调,可能在NOA患者睾丸生精功能障碍的发生和发展中起重要作用。

肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失检测

目的:对肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失情况进行检测。方法:30例散发性肾母细胞瘤组织,其中上皮优势型6例,母细胞优势型14例,间质优势型10例,采用Southern印迹分子杂交技术检测肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失,并分析其与组织类型的关系。结果:2例WT1基因的缺失为间质优势型肾母细胞瘤,1例P53等位基因缺失为间变型肾母细胞瘤。结论:WT1基因缺失可能与间质优势型肾母细胞瘤的发生有关,P53基因缺失可能与间变型肾母细胞瘤的发生有关。

F16微通道与标准通道经皮肾镜取石术临床疗效比较

目的探讨F16微通道与标准通道经皮肾镜取石术在临床治疗中的效果差异。方法选取2017年7月至2019年10月安徽省宁国市人民医院收治的上尿路结石患者110例,根据治疗方法分为微通道组55例(采用F16微通道经皮肾镜取石术)和标准组55例(采用标准通道经皮肾镜取石术)。对比两组的手术时间、出血量、术后即刻结石清除率、4周后的结石清除率、手术并发症发生率;于手术前、术后24h检测尿液肾损伤分子-1(kidney injury molecule 1,KIM-1)、皮质醇(cortisol,Cor)、去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)、肾上腺素(epinephrine,E)水平。结果微通道组患者的手术时间长于标准组,差异有显著性(P<0.05),微通道组患者的手术出血量、住院时间、并发症发生率低于标准组,差异有显著性(P<0.05);两组的术后即刻结石清除率、4周后的结石清除率差异无显著性(P>0.05)。两组患者术前KIM-1、Cor、E、NE差异无显著性(P>0.05);微通道组术后24h的KIM-1、Cor、E、NE测定值均低于标准组,差异有显著性(P<0.05);两组患者术后24h的KIM-1、Cor、E、NE测定值较术前均显著增高差异有显著性(P<0.05)。结论采用F16微通道经皮肾镜取石术与标准通道经皮肾镜取石术的结石清除率效果差异无显著性,但是前者的创伤更小,术后引起患者应激反应及肾功能损伤程度更轻。

227例成人47，XXY患者临床特点及激素水平相关性分析

目的探讨Klinefelter综合征（克氏征）患者（47，XXY）的临床特点。方法回顾性分析227例接受供精人工授精（artificial insemination with donor，AID）治疗的47，XXY患者临床资料包括年龄、学历、身高、体重、体重指数；FSH、LH、睾酮、催乳素、雌二醇。结果这些患者身高（176．4±5．5）cm、体重（74．5±12．7）kg、体重指数（23．89±3．66）kg／m^2，超重者77例（33．92％），肥胖者34例（14．98％）。性激素FSH（38．35±14．33）IU／L，LH（19．40±9．oo）IU／L，睾酮（132．00±194．50）ng／dl，雌二醇（23．90±15．00）ng／L，催乳素（10．50±8．20）μg／L，雌二醇／睾酮0．21±0．80；睾丸体积与雄激素水平呈正相关（r=0．197，P=0．003）；体重指数与雄激素水平呈负相关（r=-0．284，P=0．000），与雌激素呈正相关（r=0．174，P=0．009）；与雌二醇／睾酮呈正相关（r=0．323，P=0．000）。年龄与睾酮、雌二醇、雌二醇／睾酮之间无相关性（P〉0．05）；与LH之间呈负相关关系（r=-0．154，P=0．02），与FSH之间呈负相关关系（r=-0．196，P=0．03）。高学历组平均年龄高于低学历组（P〈0．01），雄激素水平低于低学历组（P〈0．01）。结论克氏征患者（47，XXY）睾酮与患者睾丸体积密切相关；克氏征患者睾酮、雌二醇和雌二醇／睾酮与患者身高、体重指数、文化程度相关。

HIF-2与肾细胞癌研究进展

近来新发现的缺氧诱导因子2(hypoxia inducib le factor 2,HIF-2),其作用与肾细胞癌有密切关系,目前研究显示其在肾细胞癌发病过程中起重要的作用。本文就目前国外对缺氧诱导因子2与肾细胞癌关系的研究进行综述。

RNA干扰缺氧诱导因子2对肾癌细胞周期和凋亡的影响

研究表明肾细胞癌主要表达缺氧诱导因子2（HIF-2），其主要参与血管生成、糖酵解等调节，在肿瘤生长过程中具有较重要作用。我们通过构建HIF-2RNA干扰真核表达载体转染入肾癌细胞中，观察HIF-2 RNA干扰对肾癌的HIF-2表达的影响，观察其对肾癌细胞周期和细胞凋亡的影响。

63例成人无精子症AZFc缺失患者的临床特点及其与性激素水平相关性分析

目的探讨无精子症无精子因子C区域(Azoospermia factor C region,AZFc)缺失患者的临床特点及其与性激素的相关性。方法回顾性分析63例无精子症并AZFc缺失患者的临床资料,包括年龄、身高、体重、体重指数(BMI)、睾丸体积和性激素。结果无精子症AZFc缺失组患者身高、体重、睾丸体积与精液正常组差异有统计学意义(P<0.05);2组FSH、LH、睾酮、催乳素水平差异也有统计学意义(P<0.05)。BMI与雌二醇呈正相关(r=0.327,P=0.009),与FSH呈负相关(r=-0.251,P=0.04);年龄与睾酮呈负相关(r=-0.256,P=0.04);睾丸体积与FSH呈负相关(r=-0.289,P=0.02);身高与睾酮、雌二醇、FSH、LH无相关性(P>0.05)。结论无精子症AZFc缺失患者更容易出现体重超标现象,容易更早期出现雄激素水平的下降,生活方式的调整和补充睾酮可能对该类患者的长期生活质量有益。