流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞吞噬荧光标记细菌的方法学探讨

目的建立流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬AlexaFluor 488(AF488)荧光染料标记细菌的方法。方法用不同浓度的AF488标记金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌,流式细胞术检测AF488对上述细菌的标记率和平均荧光强度;AM与不同浓度比例的AF488标记的细菌于37℃共孵育2、4、6和8 h,洗涤后加台盼蓝淬灭未被吞噬的细菌荧光,流式细胞术检测AM平均荧光强度、吞噬率和吞噬指数;激光共聚焦荧光显微镜下观察AM吞噬细菌的情况及分布。结果 AF488的浓度大于50μg/mL时,金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的标记率均大于92%(P<0.05),金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的标记率在荧光染料浓度大于50μg/mL便已迅速达到上限。随着孵育时间的延长,AM的吞噬率从孵育2 h的20.4%升高到8 h的76.5%。随着细菌比例的增加,AM的吞噬率从1∶10的7.7%升高到1∶300的85.1%。结论流式细胞术检测AM吞噬AF488荧光染料标记的细菌是测定AM吞噬活性的有效方法,但染料浓度、孵育时间和细菌比例均会对结果产生影响。

儿童肾移植术后巨细胞病毒感染9例诊治经验

目的总结单中心儿童肾移植术后巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染的发生情况及防治经验。方法回顾性分析2014年5月至2021年7月在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成移植和/或术后门诊规律随访的104例儿童肾移植受者中,出现CMV感染9例(8.65%)的临床资料。其中,男6例,女3例;中位年龄10岁(3月龄~15岁)。结果9例受者中,采用多克隆抗体进行免疫诱导6例,术前CMV IgG阴性4例。除1例外,余8例均因围手术期肾功能恢复不佳未早期使用抗CMV预防药物。CMV感染中位时间为肾移植术后22 d(7~50)d。9例受者中,7例出现发热、肺炎和腹泻等症状,2例无典型症状。3例受者感染CMV同时并发其他病毒、细菌或真菌感染。3例在感染CMV同时或CMV DNA转阴后出现细胞或抗体介导的排斥反应。9例受者经过注射更昔洛韦或口服缬更昔洛韦治疗后,均痊愈出院,血CMV DNA转阴中位时间为32 d(17~90)d。结论儿童肾移植术后CMV感染风险高,且发生时间较早,应综合考虑CMV感染高危因素,在移植后尽早启动CMV普遍性预防。

小鼠肾移植尿路重建术式总结与应用体会

本文总结小鼠肾移植尿路重建方法和技术要点。膀胱瓣和输尿管植入术均是小鼠肾移植中重建尿路的可行术式。膀胱瓣术式主要并发症为术后膀胱瓣及输尿管远端缺血坏死。其发生率受供体小鼠品系和手术技术影响。输尿管植入术式主要并发症为术后尿漏。其发生率受受体小鼠性别和手术技术影响。膀胱瓣术式重点是术中判断膀胱瓣血供并合理修剪缝合膀胱瓣。输尿管植入术式重点是妥善修剪和固定输尿管。输尿管植入术式比膀胱瓣术式快捷。其早期发生的尿路并发症更容易通过二次手术成功修复,但远期尿潴留发生风险高于膀胱瓣术式。手术干预的及时性是成功修复早期尿路并发症的关键因素。

儿童肾移植术后随访期新发糖尿病五例诊治

目的总结分析儿童肾移植术后新发糖尿病(PTDM)的临床特点及治疗经验。方法2014年5月至2021年3月华中科技大学同济医学院附属同济医院门诊规律随访的93例儿童肾移植受者中(中位随访时间34个月),5例(5.38%)被诊断为PTDM。回顾性分析5例儿童受者的临床资料,总结发病特点、治疗方案及转归。5例儿童PTDM中男性1例,女性4例,年龄在12~17岁。5例患儿均使用他克莫司为基础的免疫抑制方案,口服糖皮质激素均在移植后0.5~3.0个月停用。结果PTDM的中位发病时间在肾移植术后17个月(1~46个月)。诊断为PTDM后,2例儿童受者将他克莫司转换为环孢素A,其中1例儿童受者需临时辅助胰岛素治疗,之后2例儿童受者血糖均逐渐恢复正常。3例未转换环孢素A的儿童受者均需依赖降糖药物,1例单服阿卡波糖,1例单服二甲双胍,1例需二甲双胍联合阿卡波糖。中位随访6个月(2~10个月),5例儿童受者血糖控制稳定,血肌酐及尿蛋白较前无显著变化。结论儿童PTDM的治疗应综合考虑年龄、性别和患儿的诉求制定个体化方案,他克莫司转换为环孢素A可能会逆转糖尿病,不转换时需联合二甲双胍等药物控制血糖。