中华蜜蜂气味结合蛋白基因AcerOBP14的克隆及时空表达

【目的】克隆获得中华蜜蜂(Apis cerana cerana)Acer OBP14基因序列,并对其蛋白结构进行预测,分析其在不同组织和发育阶段的时空表达差异,为该基因的功能研究提供参考。【方法】以中华蜜蜂全组织c DNA为模板利用RT-PCR技术扩增和克隆获得Acer OBP14 c DNA全长序列,并提交至Gen Bank数据库;利用多种生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;采用MEGA5.2软件中的邻位相连法(neighbor-joining,NJ)构建Acer OBP14及其同源膜翅目昆虫OBPs的系统发育树;通过实时荧光定量PCR技术分析Acer OBP14在1、5、10、15、20、25和30日龄中华蜜蜂不同组织(触角、头、胸、腹、足和翅)中m RNA的表达情况。【结果】克隆获得了中华蜜蜂气味结合蛋白基因Acer OBP14的c DNA序列(Gen Bank登录号为KT24648)。Acer OBP14的开放阅读框(ORF)长度为408 bp,编码135个氨基酸,预测其蛋白分子量为15.08 k D,理论等电点为5.44,有信号肽,无跨膜结构,且第18—127位氨基酸之间存在一个昆虫气味结合蛋白家族PBP-GOBP superfamily保守结构域;存在多个比较明显的疏水区域,可能是脂溶性气味分子的结合位点;含有4个保守的半胱氨酸位点,属于Minus-C OBP亚家族。亚细胞定位分析表明,Acer OBP14属于分泌型蛋白,主要集中在内质网-高尔基体-质膜分泌途径上。Acer OBP14蛋白具有7个α螺旋,α1—α6属于典型OBPs核心螺旋,α7位于C端且暴露在蛋白表面。氨基酸同源序列比对结果显示,Acer OBP14与西方蜜蜂Amel OBP14的氨基酸序列一致性最高,达到86%;其次是大蜜蜂Ador GOBP56a-like,一致性为55%。系统进化树分析表明,同为蜜蜂属的中华蜜蜂Acer OBP14、西方蜜蜂Amel OBP14、大蜜蜂Ador GOBP56a-like、中华蜜蜂Acer OBP21和小蜜蜂Aflo GOBP56d-like聚为一个分支,切叶蜂属的苜蓿切叶蜂Mrot GOBP56a-like、侧沟茧蜂属的毁侧沟茧蜂Mdem GOBP83a-like、壁蜂属的角额壁蜂Ocor OBP3和熊蜂属的Bter GOBP56d-like和Bimp GOBP56d-like聚为另一大分支。荧光定量PCR结果显示,Acer OBP14在成蜂不同发育期的触角、头、胸、腹、足和翅中均有表达,其表达程度有差异。1日龄工蜂的胸部表达量最高,触角次之,且两者均极显著高于头、腹、足和翅(P<0.01);其他日龄工蜂触角表达量均极显著高于其他组织(P<0.01),其中20日龄工蜂的触角表达量最高。从各组织在不同发育阶段的表达量来看,触角的表达量在1日龄最低,极显著地低于其他日龄(P<0.01);5、10日龄逐渐增加,15日龄突然下降,20日龄达到最高,极显著高于其他日龄(P<0.01);之后又呈逐渐下降趋势。头、胸、腹、足和翅膀表达量总体上随日龄增加而呈下降趋势,5日龄之后大幅下降,之后趋于平稳且呈低丰度表达。【结论】Acer OBP14属于Minus-C OBP亚家族,具有PBP-GOBP家族的典型结构;组织表达谱结果暗示,Acer OBP14属普通气味结合蛋白GOBP,在中华蜜蜂中除嗅觉识别之外还参与其他生理功能。

中华蜜蜂气味受体基因AcerOR113的克隆与时空表达分析

【目的】鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana气味受体基因并分析其结构特征,明确其在外界蜜粉源充足和缺乏时期不同发育阶段各组织中的表达差异,以期为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】利用RT-PCR技术从中华蜜蜂采集蜂触角中扩增获得气味受体基因的cDNA序列;利用生物信息学软件预测分析其编码蛋白的结构特性;采用MEGA6.0邻接法(neighbor-joining)构建系统进化树;利用实时荧光定量PCR技术分析该基因在不同蜜粉源条件下在中华蜜蜂不同日龄(1,5,10,15,20,25和30日龄)工蜂的不同组织(触角、头(去除触角)、胸(去除翅)、腹、足和翅)中的表达差异。【结果】从中华蜜蜂采集蜂触角中克隆获得了中华蜜蜂气味受体基因Acer OR113的cDNA序列(Gen Bank登录号:KT252877.1)。该基因的开放阅读框(ORF)长1 035 bp,编码344个氨基酸,成熟蛋白分子量为40.13 kD,理论等电点(pI)7.05,无信号肽,含有6个跨膜结构且N端位于胞内,在第59-343位氨基酸之间存在一个昆虫气味受体家族7tm-6 superfamily保守结构域。Acer OR113与西方蜜蜂Apis mellifera的Amel OR113亲缘关系最近,氨基酸序列一致性高达94%。实时荧光定量PCR结果显示,无论外界环境中蜜粉源是否充足,Acer OR113在不同日龄工蜂触角中的表达量均极显著高于其他组织(P<0.01),腹部中的表达量最低;外界蜜粉源充足时各日龄工蜂触角中Acer OR113的表达量均极显著低于蜜粉源缺乏时相应日龄工蜂触角中的表达量(P<0.01)。【结论】Acer OR113具有昆虫气味受体的典型特征,其基因特异性高表达于中华蜜蜂成虫触角中,且表达量在外界蜜粉源缺乏时期高于在蜜粉源充足时期,推测其主要与识别外界蜜粉源的花香气味有关。

中华蜜蜂气味受体基因AcerOr167的克隆及表达分析

本研究通过RT-PCR获得中华蜜蜂气味受体基因Or167的cDNA序列,并采用多种生物信息学软件对其结构特征进行预测分析;利用荧光定量PCR检测Acer Or167 m RNA在工蜂羽化后不同发育阶段(1、5、10、15、20、25和30日龄)和不同组织(触角、头、胸、腹、足、翅)中的相对表达量。克隆获得中华蜜蜂Or167的c DNA序列,命名为Acer Or167(Gen Bank登录号为KF239369),其全长1311 bp,编码436个氨基酸,预测有5个跨膜结构域;多序列比对结果显示,中华蜜蜂Acer Or167与西方蜜蜂Amel Or167的一致性最高,达94%,而与毕氏粗角蚁Cbir Or4-like的一致性最低,为49%;荧光定量结果显示,Acer Or167 m RNA在成蜂不同发育期的各个组织中均有表达,且触角中的表达量极显著高于其它各个组织(P<0.01),在头、胸、腹、足、翅中有少量表达;从触角不同发育阶段的表达情况来看,1日龄表达量最低,5日龄表达量显著升高,20日龄表达量最高,且极显著高于其它各日龄(P<0.01)。推测Acer Or167可能在中华蜜蜂的嗅觉识别系统中起着重要的作用,与中华蜜蜂外出采集,识别花香气味有关。本研究为进一步深入研究中华蜜蜂传统气味受体的功能奠定理论基础。

大型活动交通研究范围确定方法

在城市建设项目交通影响分析(TIA)中有关交通研究范围确定方法研究成果的基础上,从大型活动的交通需求特征和交通流特征出发,研究大型活动交通研究范围的确定方法.提出了大型活动交通研究范围的确定流程与主要步骤、大型活动交通研究范围确定的两项关键技术:观众吸引总量预测技术和观众生成及分布预测技术,确定了大型活动交通研究范围的判定阈值。选择"十运会"开幕式进行了实例分析.

中华蜜蜂Malvolio基因Acmvl的克隆及组织表达分析

【目的】本研究克隆了中华蜜蜂Apis cerana cerana Malvolio(Mvl)基因的c DNA序列,分析了其编码蛋白的结构特点,并探讨其mRNA在内勤蜂、采蜜蜂和采粉蜂各部位组织中的表达差异,以期为该基因的生物学功能研究提供参考。【方法】利用RT-PCR技术从中华蜜蜂内勤蜂头部组织中扩增和克隆获得Acmvl的全长序列,并采用多种生物信息学软件分析Acmvl蛋白的结构特征;采用Real-time PCR对中华蜜蜂Acmvl在内勤蜂、采蜜蜂和采粉蜂各组织中的表达特征进行分析。【结果】Acmvl基因c DNA全长为2 130 bp(Gen Bank登录号:KP662686),编码587个氨基酸,预测该蛋白分子量为65.86 k D,等电点为6.03,无信号肽,存在11个跨膜结构域、9个糖基化位点和14个潜在磷酸化位点;系统发育树分析结果显示,中华蜜蜂Acmvl与其他膜翅目昆虫Malvolio聚为一支,与小鼠Mus musculus和人Homo sapiens Nramp家族的Nramp2聚为另一大分支,且与小鼠、水稻Oryza sativa、黑腹果蝇Drosophila melanogaster和酵母Saccharomyces cerevisiae的Nramp家族同源体在跨膜区、跨膜区带电残基及转运蛋白特征结构域上有很高的保守性,尤其是与Nramp2。Acmvl基因在中华蜜蜂各部位组织中均有表达,但高表达于内勤蜂的胸部及采蜜蜂和采粉蜂的腹部和足部,提示该基因表达的差异影响采集行为。【结论】Acmvl属于Nramp基因家族,可能为Nramp2的同源基因,该基因影响采集行为可能与转运Cu2+,Mn2+和Fe2+(尤其是Fe2+)有关。

大蜡螟气味受体基因Gmel/Orco的克隆与序列分析

为进一步研究大蜡螟嗅觉通讯分子机制和寻求新的大蜡螟防治技术,本研究克隆了大蜡螟Galleria mellonella L.的气味受体基因Gmel/Orco,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中已发表的鳞翅目昆虫非典型气味受体家族基因的氨基酸保守序列设计简并引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆至T载体并测序。克隆获得大蜡螟气味受体Orco的cDNA序列,命名为Gmel/Orco(GenBank登录号:KT020861),序列分析结果显示,Gmel/Orco开放阅读框长1425 bp,编码474个氨基酸,分子量为53.36 k D,等电点为8.44,序列中有7个跨膜区,N-端在细胞膜内,C-端在细胞膜外。通过在Gen Bank中进行序列的同源性比较,该基因与已公布的鳞翅目螟蛾科、夜蛾科昆虫的非典型气味受体基因序列有较高的同源性。克隆所获得的基因属于非典型气味受体家族基因。

大蜡螟触角感器的扫描电镜观察

为明确大蜡螟(Galleria mellonella L.)触角外部形态及其感器的种类与分布,取刚羽化的大蜡螟雌、雄成虫各3头,用镊子取其完整触角,样品脱水处理后,利用扫描电镜对大蜡螟雌、雄成虫触角形态及感器的形态和分布进行观察。结果显示:大蜡螟成虫触角呈线状,触角感器共有7种,分别为毛形感器、刺形感器、锥形感器、腔锥形感器、栓锥形感器、耳形感器和叉形感器,其中毛形感器和锥形感器各有2种类型。大蜡螟雌、雄成虫之间触角感器的类型、分布规律相似。本研究为深入了解大蜡螟的化学感受系统,揭示其嗅觉识别机制奠定了基础。

“绿地”多元化战略解析

随着行业发展的日趋规范、市场竞争的渐趋激烈、产业周期波动的日渐频繁和政府行业调控的逐步加强，战略选择问题备受房地产企业关注。与行业领跑者万科选择专业化战略继而实现持续成长不同，绿地选择了“以房地产主业突出，能源、金融等相关产业并举发展”的多元化战略，并取得了卓越的业绩，2009年前三季度实现多元化营收517．5亿元，预计全年业务营收达到700亿元，

谈中学班主任管理艺术

在中学阶段的教育中,班主任起到管理约束的作用,班主任的管理对于学生的言行举止以及学习生活态度等都有着明显的规范作用,中学阶段的学习中,班主任是较为重要的存在,班主任的德行会影响学生的德行,班主任的管理艺术也会在很大程度上影响班级的管理与规划。每个班级都会遇到各种突发事件、学生之间的矛盾、师生之间的冲突、以及班级间的问题等,这些都是需要班主任从中调和干预的,由此可以看出班主任管理艺术的重要性。本文结合班主任基本的管理工作,对班级管理过程进行分析,打造积极活跃的班集体。

上海市社区婴幼儿食物过敏状况及影响因素分析

目的调查上海市花木社区婴幼儿食物过敏患病率及相关影响因素。方法以花木社区卫生服务中心儿保门诊就诊的0~36个月儿童为研究对象,检测血清总Ig E及20项特异性Ig E,根据病史、血清总Ig E、特异性Ig E,食物回避试验和食物激发试验确诊病例,并随访6个月。结果本组儿童食物过敏检出率为9.82%。最常见的过敏原为鸡蛋清(39.2%)和牛奶(27.4%)。本组患儿最常见临床表现为湿疹。不同性别和不同出生方式的婴幼儿之间食物过敏率差异无统计学意义(P>0.05)。随着婴幼儿年龄的降低,食物过敏率显著升高。在孕期使用抗生素、有父母过敏史和无母乳喂养的婴幼儿中,食物过敏率显著高于未使用抗生素、无父母过敏史和有母乳喂养的婴幼儿。Logistic因素分析结果显示年龄、孕期使用抗生素、母乳喂养、父母过敏史是婴幼儿发生食物过敏的影响因素。结论年龄、孕期使用抗生素、母乳喂养、父母过敏史均能显著影响婴幼儿食物过敏。

丝缎中重金属总量测定方法的研究

利用3种消解方法将丝缎中铜、镉、铅溶解出来,消解液用火焰原子吸收分光光度法测定微量的铜、镉和铅。通过加标回收率实验,确定方法三准确度较高,其测定的加标平均回收率为98.3%～103.5%。

物化—生化法处理油墨生产废水

采用气浮—缩聚—SBR工艺处理油墨生产废水,通过加药气浮去除油墨废水中的悬浮油、乳化油后再进行碱性缩聚,使废水中的醛类变成生化的碳源,再进入SBR生化反应器进行降解,出水指标COD_(Cr)可降至150 mg/L以下。

珍贵红木树种檀香紫檀组培快繁体系的建立

【目的】探究檀香紫檀植株高效、稳定的离体再生技术,为其苗木的规模化生产提供参考依据。【方法】以檀香紫檀种子为外植体,以MS培养基为基本培养基,添加不同浓度琼脂、蔗糖、IBA、IAA和6-BA进行无菌播种、诱导萌芽、增殖和生根培养,建立檀香紫檀组培快繁体系。【结果】檀香紫檀种子以0.1%HgCl2溶液消毒8 min的萌发率最高,为31.7%;微茎段芽萌发、生长及分化效果随培养基中IBA浓度提高而增强,当IBA浓度为0.3 mg/L时微茎段腋芽诱导率最高,为94.5%,且生长状况最佳,但与添加0.2 mg/L IBA的处理无显著差异(P>0.05);IBA促进微茎段愈伤组织发育和增殖的作用强于6-BA,二者配合使用的协同作用更明显,以培养基添加0.3 mg/L IBA和3.0 mg/L 6-BA对愈伤组织发育和芽梢增殖的效果最佳,增殖系数为2.8;接种在含1.0 mg/L IBA、0.25 mg/L IAA、0.05 mg/L 6-BA的生根培养基,微茎段生根率最高,为65.2%,且苗木生长发育最佳。【结论】以种子为外植体,通过无菌播种、微茎段增殖和生根培养可获得大量优质组培苗,是实现檀香紫檀工厂化育苗的理想途径。

火焰原子吸收光谱法测定奶类食品中铜锌铁锰

对火焰原子吸收光谱法（FAAS）测定乳品中铜、锌、铁、锰的条件进行了试验和优化。对方法的干扰因素,准确度和精密度也作了试验。乳品试样用HNO3-HClO4混合酸消化处理。所得溶液蒸发至近干,用稀硝酸（1＋99）溶解盐类,溶液经定容后供作FAAS测定。对4元素的测定时,吸光度与浓度之间呈良好线性关系,所求得的线性回归方程及其相关系数可作佐证。应用所提出的方法测定了3种不同的乳制品中的铜、锌、铁及锰,测定值的RSD值均小于3.5%,回收率在93.0%～103.0%之间。

不同栽培条件下麦优1号杂种小麦的优势表现

１９９０～１９９２年用本院粮作所新育成的高产半矮秆杂种小麦麦优１号并以生产上推广的优良品种扬麦５号作对照，研究了不同播种密度、播种期、施肥水平和年度间的优势表现。结果表明，不同栽培条件下杂种超标优势不同，具有Ｒｈｔ３矮秆显性基因的半矮秆杂种小麦麦优１号产量超标优势主要来自每穗粒数的增加和较强的抗倒性。根据杂种小麦不同栽培条件下产量形成过程中的优势变化特征，提出了亩产４００ｋｇ以上的优化高产配套技术途径，并指出扬麦５号属中产稳产型，麦优１号杂种小麦属高产稳产型，是各有千秋的优良品种（组合）。

液晶膜红外热成像的再研究

本工作是在过去研究液晶膜红外热成像工作的基础上改进了膜结构并对成像规律进行了较深入地研究,并认为自己研制的新型膜(液晶微晶膜)与市售的液晶微胶囊膜都可用于红外热成像.

恶性肿瘤合并深静脉血栓形成6例临床分析

深静脉血栓形成(deep venous thrombosis,DCT)与肺血栓栓塞症(pulmonary thrombeombolism,PTE)是静脉血栓栓塞症(venouns thromboembolism,VTE)的二种重要的临床表现形式,发病危险因素较多,其中恶性肿瘤是主要的危险因素之一,如能及时正确诊断并治疗DVT,则可显著减少PTE的发生率.……

2012年福建省尤溪县医院儿科门诊抗菌药物使用分析

目的:了解福建省尤溪县医院儿科门诊抗菌药物的使用情况,评价其使用合理性。方法:随机抽取该院2012年儿科门诊处方共7 281张,对其中的抗菌药物使用情况进行调查分析,分别统计抗菌药物处方数、给药途径、使用频率、联合使用等情况。结果:抗菌药物处方占统计处方的65.4%,药物使用以头孢菌素类、克林霉素类、青霉素类为主。在含抗菌药物的处方中,单独使用抗菌药物者占82.3%,二联使用抗菌药物者占17.7%,无三联用药情况;与抗病毒药物合用的总比例达51.9%。结论:该院儿科门诊抗菌药物应用基本合理,但还存在一些不足之处有待改进。