电压门控钠离子通道表达对宫颈癌细胞增殖侵袭转移作用的研究

目的:探讨电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)在宫颈癌细胞中的表达、分布及其对该细胞增殖、侵袭能力的影响。方法:用Western blot了解VGSCs在不同宫颈癌细胞株中表达水平,采用免疫荧光检测VGSCs蛋白在细胞中的定位。分别用MTT法和Matrigel法检测VGSCs对宫颈癌细胞的增生和侵袭作用。以半定量RT-PCR和RNAi方法确认宫颈癌细胞中VGSC表达亚型及其功能。结果:在检测的4种宫颈癌细胞株中,ME180细胞表达较高水平VGSCs蛋白,其存在于细胞膜和细胞质中。VGSCs抑制剂-河豚毒素(TTX)对ME180细胞增生无影响(P>0.05),但呈浓度依赖性抑制细胞的Matrigel侵袭(P<0.05)。在ME180细胞中检测到Nav 1.2、Nav 1.6和Nav 1.7三种VGSCs亚型,其中Nav 1.6 mRNA占总mRNA的78%,RNAi抑制Nav 1.6mRNA表达后可降低细胞侵袭达52%(P<0.05)。结论:VCSCs在宫颈癌ME180细胞株高表达,Nav 1.6为其主要表达亚型,增加了体外癌细胞的侵袭转移。

表皮生长因子促进电压门控钠通道Nav1.5表达及人乳腺癌细胞的侵袭

目的探讨表皮生长因子(EGF)是否调节乳腺癌MDA-MB-231细胞电压门控钠通道(VGSC)Nav1.5亚型基因的表达及其可能的信号分子传导途径。方法用Matrigel侵袭、免疫荧光定位、实时荧光定量RT-PCR(RFQ-PCR)和Western blot等方法,分别检测或探讨EGFR和Nav1.5蛋白在细胞中的表达和定位、EGF和Nav1.5对细胞侵袭的作用、EGF对Nav1.5 mRNA和蛋白水平的影响以及PI3K在EGF增加侵袭中的作用。结果 MDA-MB-231细胞高表达EGF受体和Nav1.5蛋白,EGF增加细胞的侵袭达51.0%±2.6%,VGSC抑制剂Tetrodotoxin(TTX)10μmol/L阻滞EGF诱导的细胞侵袭(P<0.05);EGF增加Nav1.5 mRNA水平为(128±4)倍(P<0.05),Nav1.5蛋白水平有39%±4%上升(P<0.05)。PI3K抑制剂Wortmannin抑制EGF诱导的Nav1.5 mRNA和蛋白水平的增加,亦抑制EGF诱导的细胞侵袭。结论 EGF上调乳腺癌MDA-MB-231细胞VGSC Nav1.5亚型mRNA和蛋白的表达,促使乳腺癌细胞的侵袭,PI3K参与EGF诱导的Nav1.5的表达和细胞的侵袭。

电压门控钠离子通道与恶性肿瘤的转移

电压门控钠离子通道(VGSC)是可兴奋组织中动作电位的关键离子通道,具有重要的生理功能。近年来国内外研究发现,VGSC在转移的前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等细胞中表达,其增加了癌细胞的运动和侵袭,促使了癌症的转移,其还将被作为治疗靶点而进行药物开发和临床应用。

RNAi干扰电压门控钠通道scn8a基因对人宫颈癌SiHa细胞侵袭转移的影响

目的研究scn8a基因(编码Nav1.6亚型钠离子通道蛋白)对人宫颈癌SiHa细胞增生、迁移和侵袭能力的影响。方法采用小干扰RNA技术(small interfering RNA,siRNA)下调人宫颈癌SiHa细胞scn8a基因表达,使用半定量RT-PCR和Westernblotting方法分别检测siRNA转染细胞后scn8a mRNA和Nav1.6蛋白变化,噻唑蓝比色法检测其对SiHa细胞的增生影响,采用划痕实验、Matrigel侵袭实验观察其对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 siRNA转染SiHa细胞48 h后,scn8a mRNA和Nav1.6蛋白水平分别降低62.7%(P<0.05)和65.8%(P<0.05),针对scn8a基因的siRNA对SiHa细胞的增生无影响(P>0.05),但可有效抑制细胞迁移达55.6%(P<0.05)和侵袭达36.9%(P<0.05)。结论针对scn8a的siRNA干扰了电压门控钠通道在宫颈癌SiHa细胞中表达,其对细胞增生无影响,但抑制了细胞的迁移和侵袭能力。

液基细胞学、阴道镜下活检及LEEP术联合对宫颈上皮内瘤变诊治的临床价值

目的:探讨液基细胞学、阴道镜下活检与LEEP术在诊治宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)中的价值。方法:回顾性分析近3年来,在我院妇科门诊行LEEP手术的CIN患者560例,对比研究液基细胞学检查(thinprep cytology test,TCT)、阴道镜下活检及LEEP术后病理结果的差异及符合情况。结果:细胞学与阴道镜活检结果符合率LSIL 30.8%(45/146),HSIL 84.2%(133/158)。TCT检查HSIL病理符合率高于LSIL,差异具有统计学意义(P<0.05)。TCT检查结果为ASC-H活检病理CINII和CINⅢ的比率高于ASCUS患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。阴道镜下活检病理与LEEP术后标本病理符合率:总符合率为57.9%,CINⅠ符合率为42.1%,CINⅡ为61.5%,CINⅢ为73.7%。CIN级别越高,符合率随之升高,其有统计学意义(P<0.05)。结论:LEEP术是一种能够准确诊断CIN病变的较好方法,其弥补了液基细胞学与阴道镜下活检的局限性和盲目性,三者联合使宫颈癌前病变的诊断和治疗更加完善,减少漏诊、误诊率。

血管内皮生长因子C上调电压门控钠通道Nav1.6表达促进宫颈癌细胞的侵袭

目的:探讨血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)促进宫颈癌ME180细胞的侵袭和转移是否涉及电压门控钠通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)Nav1.6亚型的表达及其他可能的信号转导分子。方法:应用RT-PCR和免疫荧光定位的方法分别检测VEGF-C受体3(亦称Flt-4)和Nav1.6mRNA及其蛋白在ME180细胞中的表达和定位,Transwell法检测VEGF-C和Nav1.6对细胞侵袭的作用,实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测VEGF-C对Nav1.6mRNA和蛋白表达的影响及信号转导分子p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在其中的作用。结果:ME180细胞表达Flt-4和Nav1.6mRNA,Flt-4和Nav1.6蛋白主要定位于细胞膜。50和100ng/L VEGF-C可分别增加细胞的侵袭指数[(27.2±5.2)%和(49.1±6.1)%],与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);VGSC抑制剂TTX(tetrodotoxin)可有效阻断VEGF-C促进的细胞侵袭作用(P<0.05)。VEGF-C可上调ME180细胞Nav1.6mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05)。p38MAPK抑制剂PD169316可抑制VEGF-C促进的Nav1.6mRNA和蛋白的表达水平及细胞侵袭作用。结论:VEGF-C通过上调VGSC Nav1.6亚型的表达促进宫颈癌ME180细胞侵袭,而且p38MAPK参与了VEGF-C诱导的Nav1.6表达和细胞侵袭。

多药耐药基因在滋养细胞肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的 探索MDR 1(multidrugresistance)基因在滋养细胞肿瘤组织及正常组织中的表达情况及与化疗、临床期别等关系。方法 运用RT PCR方法对 2 1例恶性滋养细胞肿瘤及 5 0例正常绒毛、胎盘的多药耐药基因表达进行检测分析 ,同时用免疫组化方法对 6例绒毛、胎盘和 12例化疗后恶性滋养细胞肿瘤糖蛋白的存在状态进行探讨。结果 正常绒毛、胎盘MDR 1mRNA阳性表达率分别为 2 4 0 % (6 /2 5 )、32 0 % (8/2 5 ) ,两者无明显差异性 (P >0 0 5 ) ;未化疗病人无MDR 1基因阳性表达 ,化疗后病人 33% (4/12 )MDR 1mRNA阳性 ;阳性率与临床期别有关 ,Ⅰ期阳性率为 0 ,Ⅱ期阳性率为 1/5 ,Ⅲ期阳性率为 3/10 ;糖蛋白在细胞滋养细胞、合体滋养细胞及过渡型细胞中的分布无明显差别。结论 滋养细胞肿瘤MDR 1基因表达的变化 ,为化疗方案的调整提供了理论依据。