PCR限制性内切酶法快速检测临床标本的分枝杆菌

对临床痰液１２０份，尿液２０份，胸水１０份及淋巴穿刺液１０份进行分枝杆菌限制性内切酶谱（ＰＲＡ）分析，阳性率分别为５０．８％，０％，３０％及２０％，分别中发现非结核分枝杆菌（ＮＴＭ）５株，其中非致病ＮＴＭ４株，取得了较好的结果。

PCR 扩增人型结核杆菌 DNA 及结核杆菌属 DNA 探针的制备

用多聚酶链反应(PCR)方法扩增人型、牛型结核杆菌基因组 DNA,获得特异的158 bpDNA 片段,而从另外十三种分枝杆菌未见到特异的扩增产物.回收158 bpDNA 片段作探针,它除与人型、牛型结核杆菌有特异的杂交信号外,与金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌及一些分枝杆菌皆没有杂交反应.结果表明,PCR 可用于检测结核杆菌基因组 DNA,扩增产物158 bp DNA 片段可作为探针用于检测人型、牛型结核杆菌并鉴别结核杆菌与其它分枝杆菌.

抽滤法培养结核分支杆菌的研究

本研究应用抽滤法将痰经胰酶-新洁乐灭处理后,加入装有四层滤纸的抽滤器孔内,在负压条件下将痰液中的分支杆菌阻留滤片上,再将其取下置改良罗氏培基内培养。本法较常规法痰液用量加大7～10倍,且细菌集中在滤片上生长,从而使痰分支杆菌培养阳性率提高50%左右。

聚合酶链反应扩增结核杆菌的临床应用

采用PCR技术扩增人型结核分枝杆菌特异的158 bp DNA片段靶基因,检测60例肺结核病人痰标本,结果表明,阳性率达58.3%,对照的常规培养法阳性率为11.7%。20例非结核病患者痰标本两种检测结果均为阴性.研究结果表明,PCR 扩增检测结核杆菌技术比常规检验方法快速敏感,且有较高的特异性。

光促HBV DNA生物素标记探针的制备

以 Bio—Psoralen(补骨脂素)为标记物与自备 HBVD—NA 在长波紫外灯下,光促形成单加成物,制备成 Bio—Psoralen HBVDNA 探针,并对43份可疑为乙肝患者的血清进行分子杂交检测,结果表明,Bi0—Psorlen HBV DNA 明显优于 ELISA 检出 HBeAg(P<0.01),而与32p HBVDN法无明显差异(P>0.05).

分枝杆菌属基因限制性内切酶谱分析

目的探讨基因限制性内切酶谱分析对分枝杆菌属检出的敏感性、特异性和准确性。并达到快速准确检出结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌属的目的。方法首先以分枝杆菌属公共分子量６５０００抗原蛋白的基因，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增编码其基因，此基因为各分枝杆菌所共有。扩增产物再分别经ＢｓｔＥⅡ和ＨａｅⅢ限制性内切酶酶切后的图型模式（ＰＲＡ），鉴定临床标本的结核分枝杆菌及非结核性分枝杆菌。结果ＰＲＡ法检测的灵敏度高。检出了２３株分枝杆菌标准菌株，得出特异的基因图谱。结核分枝杆菌复合体的酶切模式有其独特之处。并检测临床标本３２３份，其中痰标本２０６份，胸水４２份，尿液３５份。内切酶确诊结核分枝杆菌的阳性率分别为６７．９％，４８．０％，５．７％。结论对分枝杆菌采用限制性内切酶谱分析，检出结核和非结核分枝杆菌快速准确，并可提高阳性率，降低假阴性。

PCR技术应用于临床结核病的诊断研究

采用PCR(聚合酶链反应)技术,选择一对寡核苷酸引物,扩增的靶基因为克隆的PH_重组标准人型结核分枝杆菌2.4kb DNA。其基因片段是结核杆菌所特有,单一拷贝基因,与其他非典型分枝杆菌的基因无同源序列。研究结果表明:①扩增了人型和牛型结核杆菌标准株基因DNA 158bp 片段,而其他14种非典型分枝杆菌和金黄色葡萄球菌、脓杆菌 DNA 未扩增出相应产物.②10倍系列稀释人型结核菌 DNA,检测敏感性相当于10～50菌数/ml痰样。③60例临床肺结核病人痰样进行 PCR 技术检测和常规生物法测定比较,前者阳性率为58.3%,后者检测率11.70%。而20例非结核痰样用两种方法检测全为阴性。提示:PCR 技术诊断结核病快速、简易、特异、敏感、高效,是在基因水平上检测的一种新技术。