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SPAG6通过NF-κB/TNF-α途径促进B-ALL细胞增殖和耐药
1
作者
潘施睿
罗洁
+4 位作者
罗菁
尹家秀
赵海秋
苏榕
刘林
《陆军军医大学学报》
CAS
2024年第24期2723-2735,共13页
目的探究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)对急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞增殖及耐药的相关作用机制。方法纳入2019年1月至2023年12月重庆医科大学附属第一医院血液内科收治的5...
目的探究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)对急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞增殖及耐药的相关作用机制。方法纳入2019年1月至2023年12月重庆医科大学附属第一医院血液内科收治的56例B-ALL患者和15例缺铁性贫血(iron-deficiency anemia,IDA)患者,将B-ALL患者作为实验组,IDA患者作为对照组。收集B-ALL患者骨髓组织并提取其骨髓单个核细胞,RT-qPCR检测SPAG6的mRNA表达情况并对B-ALL患者进行分层分析,分为新诊断病例组(New-diag)、完全缓解组(complete remission,CR)、微小残留病(minimal residual disease,MRD)阳性组(MRD+)和复发组(Relapse);使用慢病毒感染构建SPAG6基因过表达(SPAG6-OE)和敲低(SPAG6-KD)的B-ALL细胞系,CCK-8和基于甲基纤维素的集落形成实验检测各组细胞的存活、增殖和成集落潜能;CCK-8检测化疗药物柔红霉素(daunorubicin,DNR)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理后细胞存活率(可反映其药物敏感性和IC50);从TARGET数据库获取B-ALL患者的mRNA-seq图谱,通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探索与SPAG6相关的信号通路并进行实验验证;NF-κB激活剂PMA和抑制剂BAY-11-7082作用后,通过CCK-8检测细胞存活率以及对化疗药物的敏感性,Western blot检测通路相关蛋白NF-κB P65、p-NF-κB P65、TNF-α等的表达情况;构建小鼠异种移植瘤模型,-/+敲低SPAG6组腹腔注射生理盐水作为对照组,-/+敲低SPAG6组腹腔注射DNR作为实验组,免疫组化检测NF-κB信号通路在组织中的表达情况。结果B-ALL患者SPAG6 mRNA表达明显高于IDA组(P<0.05),同时与CR组比较,SPAG6高表达于MRD+组(P=0.001)和复发组(P=0.003)。对比不同SPAG6表达水平细胞对化疗药物的反应,CCK-8实验证实SPAG6促进B-ALL细胞增殖(P<0.05),并降低其对DNR和MTX的敏感性(P均<0.05);机制上,GSEA结果提示NF-κB通路在B-ALL富集,实验证实SPAG6通过激活NF-κB/TNF-α通路增强B-ALL细胞对化疗药物的耐药。在体内,敲低SPAG6明显减小小鼠移植瘤体积(P<0.05),并在联合DNR治疗组观察到肿瘤体积额外减小(P<0.05)。此外,免疫组化结果提示联合DNR治疗组NF-κB P65和p-IKBα水平降低。结论SPAG6通过NF-κB/TNF-α通路促进B-ALL细胞增殖,降低其化疗敏感性,提示SPAG6与B-ALL患者的治疗效果和预后密切相关。
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关键词
急性B淋巴细胞白血病
精子相关抗原6
细胞增殖
耐药
NF-κB/TNFα
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职称材料
题名
SPAG6通过NF-κB/TNF-α途径促进B-ALL细胞增殖和耐药
1
作者
潘施睿
罗洁
罗菁
尹家秀
赵海秋
苏榕
刘林
机构
重庆医科大学:附属第一医院血液内科
出处
《陆军军医大学学报》
CAS
2024年第24期2723-2735,共13页
基金
国家自然科学基金面上项目(82070130)。
文摘
目的探究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)对急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞增殖及耐药的相关作用机制。方法纳入2019年1月至2023年12月重庆医科大学附属第一医院血液内科收治的56例B-ALL患者和15例缺铁性贫血(iron-deficiency anemia,IDA)患者,将B-ALL患者作为实验组,IDA患者作为对照组。收集B-ALL患者骨髓组织并提取其骨髓单个核细胞,RT-qPCR检测SPAG6的mRNA表达情况并对B-ALL患者进行分层分析,分为新诊断病例组(New-diag)、完全缓解组(complete remission,CR)、微小残留病(minimal residual disease,MRD)阳性组(MRD+)和复发组(Relapse);使用慢病毒感染构建SPAG6基因过表达(SPAG6-OE)和敲低(SPAG6-KD)的B-ALL细胞系,CCK-8和基于甲基纤维素的集落形成实验检测各组细胞的存活、增殖和成集落潜能;CCK-8检测化疗药物柔红霉素(daunorubicin,DNR)和甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理后细胞存活率(可反映其药物敏感性和IC50);从TARGET数据库获取B-ALL患者的mRNA-seq图谱,通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探索与SPAG6相关的信号通路并进行实验验证;NF-κB激活剂PMA和抑制剂BAY-11-7082作用后,通过CCK-8检测细胞存活率以及对化疗药物的敏感性,Western blot检测通路相关蛋白NF-κB P65、p-NF-κB P65、TNF-α等的表达情况;构建小鼠异种移植瘤模型,-/+敲低SPAG6组腹腔注射生理盐水作为对照组,-/+敲低SPAG6组腹腔注射DNR作为实验组,免疫组化检测NF-κB信号通路在组织中的表达情况。结果B-ALL患者SPAG6 mRNA表达明显高于IDA组(P<0.05),同时与CR组比较,SPAG6高表达于MRD+组(P=0.001)和复发组(P=0.003)。对比不同SPAG6表达水平细胞对化疗药物的反应,CCK-8实验证实SPAG6促进B-ALL细胞增殖(P<0.05),并降低其对DNR和MTX的敏感性(P均<0.05);机制上,GSEA结果提示NF-κB通路在B-ALL富集,实验证实SPAG6通过激活NF-κB/TNF-α通路增强B-ALL细胞对化疗药物的耐药。在体内,敲低SPAG6明显减小小鼠移植瘤体积(P<0.05),并在联合DNR治疗组观察到肿瘤体积额外减小(P<0.05)。此外,免疫组化结果提示联合DNR治疗组NF-κB P65和p-IKBα水平降低。结论SPAG6通过NF-κB/TNF-α通路促进B-ALL细胞增殖,降低其化疗敏感性,提示SPAG6与B-ALL患者的治疗效果和预后密切相关。
关键词
急性B淋巴细胞白血病
精子相关抗原6
细胞增殖
耐药
NF-κB/TNFα
Keywords
B-cell acute lymphoblastic leukemia
SPAG6
cell proliferation
drug resistance
NF-κB/TNF-α
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
R730.23 [医药卫生—肿瘤]
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SPAG6通过NF-κB/TNF-α途径促进B-ALL细胞增殖和耐药
潘施睿
罗洁
罗菁
尹家秀
赵海秋
苏榕
刘林
《陆军军医大学学报》
CAS
2024
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职称材料
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