黏着斑激酶相关非激酶在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义

目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(facol adhesion kinase-ralated nonkinase,FRNK)在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义。方法:利用Western-blot及反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测10例瘢痕疙瘩及10例相应周围正常皮肤组织中FRNK蛋白及m RNA表达水平并进行统计学分析。结果:瘢痕疙瘩组织中的FRNK蛋白表达明显低于正常皮肤(0.12±0.06比0.32±0.04),差异有统计学意义(P<0.01);瘢痕疙瘩组织中FRNK m RNA表达明显低于正常皮肤(0.27±0.03比1.10±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:FRNK蛋白及m RNA在瘢痕疙瘩组织中低表达,导致其对成纤维细胞凋亡作用减弱,对瘢痕疙瘩的形成可能起重要作用,通过调节FRNK的表达,有望为瘢痕的治疗提供新的靶点。

RNA干扰敲低GSK-3β对瘢痕疙瘩形成影响的体外研究

目的:利用RNA干扰技术探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFB)的抑制效果。方法:将针对人GSK-3β基因设计合成的3对特异性小干扰RNA(siRNA)分别转染体外培养的人KFB,通过RT-PCR和Western blot筛选出干扰人KFB GSK-3β基因表达的最佳siRNA,进而转染人KFB,并用RT-PCR和Western blot检测GSK-3β及相关蛋白的m RNA和蛋白表达。结果:1434序列具有最佳的GSK-3βm RNA和蛋白抑制效率。转染GSK-3βsiRNA后,KFB的β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p-GSK-3β和Wnt2的蛋白水平下降,KFB活力下降,且随着培养时间的延长,细胞生长受抑制程度增大,细胞倍增时间明显延迟。结论:转染靶向GSK-3β的siRNA可有效降低该基因在KFB内的表达,从而抑制了瘢痕疙瘩生长,具有潜在的治疗前景。

卷曲蛋白受体小干扰RNA对瘢痕疙瘩形成影响的体外研究

目的 :探讨RNA干扰技术(RNAi)靶向抑制卷曲蛋白(Frizzled)受体对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)的抑制作用。方法:将针对人Frizzled受体基因设计合成的3对特异性小干扰RNA(si RNA)分别转染体外培养的人KFB,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)和western blot筛选出干扰人KFB Frizzled受体基因表达的最佳si RNA,进而转染人KFB,并采用q PCR及western blot检测Frizzled受体及相关基因和蛋白表达;采用细胞增殖检测试剂(CCK)-8检测细胞增殖情况。结果:si RNA303具有最佳的Frizzled受体m RNA和蛋白质抑制效率,Frizzled受体si RNA转染后,KFB的Frizzled受体、Wnt2、糖原合酶激酶(GSK)3β和D型细胞周期蛋白(cyclin D)1 m RNA及蛋白表达均下降。p-GSK3β蛋白表达下降,KFB生长受抑制程度增大,增殖减慢,且随着培养时间的延长,细胞倍增时间明显延迟。结论:转染靶向Frizzled受体的si RNA可有效敲低该基因在KFB内的表达,从而抑制成纤维细胞增殖。

VEGF、Smad在不同形态瘢痕组织形成过程中的表达及对比研究

目的分析VEGF、Smad在不同形态瘢痕组织形成过程中的表达差异。方法选取2017年1月至2018年4月间福建医科大学附属第二医院收治的瘢痕疙瘩25例、正常瘢痕16例作为研究对象,并以10例正常者皮肤为健康对照组;检测受试者血中VEGF、Smad蛋白水平及组织中VEGF、Smad蛋白和mRNA表达水平。结果入组时三组血清中VEGF及Smad蛋白水平存在明显差异,其中瘢痕疙瘩组最高,健康对照组最低,且差异有统计学意义(P<0.05)。随着治疗时间的延长,正常瘢痕组及瘢痕疙瘩组患者血中VEGF及Smad蛋白表达水平明显降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。同时三组研究对象组织中VEGF及Smad蛋白及mRNA水平有明显差异,其中瘢痕疙瘩组最高,健康对照组最低,差异有统计学意义(P<0.05),随着治疗时间延长正常瘢痕组及瘢痕疙瘩组组织中VEGF及Smad蛋白及mRNA水平明显降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论正常瘢痕组组织中及血中VEGF、Smad水平均明显低于瘢痕疙瘩组,且随着瘢痕疙瘩患者病情好转其瘢痕组织及血中VEGF、Smad水平均明显降低。

嗜酸性筋膜炎1例报道

引起肢体硬化的疾病并不多,其中系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是最为周知的病因,还有一个疾病也会出现肢体硬化的表现——嗜酸性筋膜炎(eosinophilic fasciitis,EF)。EF 比SSc 更为少见,两者存在诸多不同之处。笔者报道1 例男性EF 患者,同时将之与SSc 进行对比鉴别,以期引起更多临床医生对这个疾病的认识,因为延误治疗不仅加重肢体的硬化,还会引起关节挛缩甚至可能致残。

大量食用普通豆腐对衰老模型小鼠学习记忆能力的影响

目的研究大量食用普通豆腐对小鼠学习记忆能力的影响。方法将30只健康小鼠随机分为空白对照组、模型组和豆腐大、中、小剂量组,每组各6只。给予小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖建立衰老模型。普通豆腐各剂量组通过喂食给予相应剂量的豆腐。5周后利用Morris水迷宫仪观察小鼠空间学习记忆能力,并通过HE染色法观察各组海马组织形态结构变化。结果模型组与空白对照组相比学习记忆能力明显下降(P<0.05);与模型组相比,普通豆腐大剂量组小鼠穿越站台的次数明显增加(P<0.05),而中小剂量组穿越站台的次数无明显变化。结论大剂量食用普通豆腐对D-半乳糖所致衰老模型小鼠的记忆功能具有一定的改善作用。

黏着斑激酶相关非激酶对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的观察黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响及其对下游黏着斑激酶（FAK）-细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导通路、Ⅰ型胶原α1链（COL1A1）和Ⅲ型胶原d1链（COL3A1）表达的影响。方法于体外培养瘢痕疙瘩和正常皮肤的成纤维细胞，Western blot及反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测正常皮肤和瘢痕疙瘩中FRNK蛋白及mRNA表达水平；在脂质体介导下用含FRNK基因的质粒转染瘢痕疙瘩成纤维细胞，用Western blot检测FRNK、FAK、磷酸化FAK（p-FAK）、ERKl／ERK2、磷酸化ERKl（p-ERKl）、磷酸化ERK2（p-ERK2）的蛋白表达；用RT-PCR方法检测FAK、ERK、COL1A1、COL3A1的mRNA表达；用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡。结果瘢痕疙瘩成纤维细胞中的FRNK蛋白表达明显低于正常皮肤（0．14±0．08比0．33±0．06），差异有统计学意义（P〈0．05）；瘢痕疙瘩成纤维细胞中FRNKmRNA表达明显低于正常皮肤（0．30±0．04比1．04±0．06），差异有统计学意义（P〈0．05）；瘢痕疙瘩成纤维细胞于转染FRNK 48h后，FRNK蛋白表达量达到最高，72h后下降。与空质粒组比较，转染FRNK组的FAK、ERK蛋白及mRNA水平均下降，p-FAK、p-ERK的表达水平也均下降（P〈0．05）；转染FRNK组与空质粒组比较，COL1A1、COL3A1mRNA的表达水平均下降（0．23±0．10比0．85±0．24，0．60±0．02比1．06±0．10，P〈0．01），而空质粒组与对照组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）；转染FRNK组细胞凋亡率明显高于对照组、空质粒组[（36．63±4．89）％比（14．70±0．70）％比（13．20±0．80）％，P〈0．05]，而对照组、空质粒组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论（1）瘢痕疙瘩组织中FRNK蛋白的低表达导致其对成纤维细胞凋亡作用减弱；（2）瘢痕疙瘩中FRNK可能通过抑制FAK磷酸化或下调FAK活性，从而抑制FAK—ERK信号通路转导来促进细胞凋亡；（3）瘢痕疙瘩中FRNK促进成纤维细胞凋亡，可能导致胶原的生成下降。通过调节FRNK的表达，可能促进瘢痕组织中成纤维细胞的凋亡，胶原生成下降，有望为瘢痕的治疗提供新的靶点。