鸡马立克氏病三价疫苗的安全性及免疫效力研究

将MD三价疫苗以25 000 PFU/只的剂量颈部皮下接种1日龄SPF雏鸡,结果表明,疫苗的接种不影响鸡体重的增加;不引起鸡法氏囊、脾脏等组织器官发生MD组织病理学变化,对鸡安全无毒性。用SPF鸡评价MD三价疫苗的免疫效力,三批疫苗对RB1B超强毒株攻击的平均保护效力为95.99%,而且无论是用RB1B超强毒株还是用BJMDV-1血毒攻击,MD三价疫苗的保护效力明显高于HVT+SB1二价疫苗及HVT冻干苗,好于CVI988疫苗;接种MD三价疫苗的4个品系的商品鸡群,抗RB1B超强毒株攻毒的平均保护效力为94.60%;在模拟MD强毒自然传染的试验中,MD三价疫苗的保护效力达到95.65%。上述效力试验的结果说明:MD三价疫苗的免疫接种可使鸡形成抗MD强毒攻击的坚强免疫力。

抗体的生物工程

抗体的生物工程是指以生物技术为手段将动物淋巴细胞产生的抗体基因人为地使其在非淋巴细胞中有效表达的综合性技术。近年来,抗体的表达和分泌已不只局限于淋巴细胞和骨髓杂交瘤细胞,而且已经在酵母、哺乳动物的非淋巴细胞和大肠杆菌乃至植物中获得功能性的表达、分泌和组装,形成一门新型的跨学科技术。目前这一领域的研究十分活跃。特别值得一提的是抗体在植物中有效表达的实现。

鸡马立克氏病三价活疫苗剂量配比和免疫剂量的研究

用马立克氏病病毒BJMDV-1株分别攻击由CVI988/B5、HCV2/B5和FC126/B5毒株组成的,剂量配比不相同的马立克氏病(MD)三价活疫苗免疫的鸡群,结果表明MD三价活疫苗中CVI988/B5、HCV2/B5及FC126/B5毒株的合适配比为2:1:2。按照此剂量配比制备的MD三价活疫苗,用RB1B超强毒株进行攻毒,当RB1B攻毒对照组MD阳性率为85.71%时,MD三价活疫苗的半数保护剂量(PD50)均数为111PFU/只,95%置信区间为585～53PFU/只的范围内,并确定MD三价活疫苗的免疫剂量为2500PFU/只。用该剂量对鸡进行MD三价活疫苗免疫,可使鸡体产生抗RB1B超强毒株攻击的坚强免疫力。

鸡马立克氏病疫苗荧光抗体染色阳性细胞数与蚀斑数线性回归(FAC^+ PR)方法的建立及应用

为解决鸡马立克氏病(MD)疫苗,尤其是MD多价疫苗在生产中疫苗配制环节上的盲目性,本试验建立了MDCVI988/Rispens/B5疫苗荧光抗体染色阳性细胞数(FAC+/mL)与疫苗蚀斑数(PFU/mL)两个数量化指标的线性关系(FAC+PR)。统计学检验证明,在此双变量下所建立的线性回归能客观反映该疫苗FAC+细胞数与疫苗PFU数之间的相互关系。将FAC+PR方法运用于MD疫苗的实验室制备,结果理论PFU/mL与实际PFU/mL的平均误差仅为5.4%。由此可见,采用这种方法可有效、准确估计出疫苗毒液中的PFU含量,并可以此为标准进行疫苗的配制。

磺胺类衍生物对肉鸡生长代谢的影响

将3种不同剂量(12、16、20mg/kg配合料)磺胺类衍生物(简称G98)添加到基础日粮中,通过调动肉鸡内源性激素代谢促进肉鸡生长。研究结果表明,7～52日龄肉鸡,试验各组与对照组相比,体增重、采食量、饲料转化率以及胸肌粗蛋白均不同程度提高;胸肌粗脂肪均下降;与生长有关的内源性激素水平也相应改善;屠宰测定中相关指标发生改变。结果表明,采用G9816mg/kg配合料饲喂肉鸡,生长代谢的效应最好。

荚膜A型多杀性巴氏杆菌引起牛纤维素性化脓性肺炎:病原引起疾病因果关系的确定

2006年底本研究室在牛群中发现了病因不明的牛纤维素性化脓性肺炎疫情,该疫情已蔓延至中国的多个养牛地区,本研究室从发病牛肺脏中分离得到荚膜A型多杀性巴氏杆菌。为确定该菌与牛纤维素性化脓性肺炎的病原-疾病因果关系,本研究从病原流行病学调查、病原对实验动物的致病性与免疫保护性以及病原回归本动物致病特征3个方面,对其进行验证性研究。调查结果显示,在2008年~2014年采集的88份发病牛肺脏样品中,荚膜A型多杀性巴氏杆菌的PCR阳性率高达86.36%,而且PCR阳性样品中该菌的分离率高达90.79%。将现地分离株接种小鼠进行动物实验,结果显示,该菌具有高度致死性,而且灭活菌体接种小鼠对活菌攻击呈现良好的免疫保护性。动物回归试验结果显示,健康犊牛接种该分离菌株后出现与自然感染病例相似的纤维素性化脓性肺炎,免疫组化试验显示该菌株分布于病变肺组织、并从中重新分离出接种的病原菌。上述研究结果符合病原微生物鉴定的科赫法则,因此确定荚膜A型多杀性巴氏杆菌是引起牛纤维素性化脓性肺炎的病原。荚膜A型多杀性巴氏杆菌与牛纤维素性化脓性肺炎病原-疾病因果关系的确立,为该新发疫情防控技术的研究提供了参考依据、奠定了实验基础。

牛多杀性巴氏杆菌病二价灭活疫苗的研究

为了防控A型多杀性巴氏杆菌(Pm)引起的牛纤维素性化脓性肺炎以及B型Pm引起的牛出血性败血症,本研究制备了牛Pm病二价灭活疫苗(A型Pm-TJ株+B型C45-2株),并将疫苗分别以0.3 m L和4 m L接种小鼠和兔后,所有接种动物均健活;分别以单剂量(2 m L)、单剂量重复、超剂量(4 m L)接种肉牛和奶牛后,接种牛均无不良反应,而且接种疫苗对肉牛增重和奶牛产奶量均无影响,表明疫苗安全性良好。以不同的免疫剂量接种牛后,分别采用A型和B型Pm强毒菌液对免疫牛进行攻击,结果显示,疫苗能够对攻毒牛产生良好的免疫保护,并且疫苗的免疫效力呈现剂量依赖性,最小免疫剂量为1 m L (对A、B型Pm攻毒牛的保护率分别达到75%与100%)。此外,犊牛接种疫苗10个月后攻毒,对A、B型菌攻毒牛的保护率仍分别能够达到75%与100%,表明该疫苗的免疫持续期至少可达10个月。综上所述,该牛Pm二价灭活疫苗能够有效预防牛纤维素性化脓性肺炎和牛出血性败血症,该疫苗的推广应用将对我国牛Pm病的防控发挥关键性作用。

牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌免疫攻毒模型的建立

牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pm)是典型的条件致病菌,为建立该病原菌的免疫攻毒模型,本研究采用不同代次、不同剂量的Pm-TJ株接种实验动物小鼠和本动物牛,测定其对小鼠的最小致死剂量以及对牛的最小感染剂量;在此基础上,将制备的全菌体灭活疫苗分别免疫小鼠和牛,通过攻毒保护试验评价该疫苗对动物的免疫原性。攻毒试验结果显示,Pm-TJ株对小鼠高度致死,最小致死剂量为10 cfu,而且不同代次细菌的毒力无显著差异,表明其在体外传代过程中毒力保持稳定;能够引起Pm-TJ株接种牛典型的纤维素性化脓性肺炎,而且接种牛的发病率呈现剂量依赖性,最小感染剂量为2.5×10~8 cfu。免疫后攻毒试验结果显示,将含有1×10~7 cfu灭活菌体的疫苗接种小鼠,其能够抵抗致死剂量细菌的攻击;用含有7.5×10~9 cfu灭活菌体的疫苗接种犊牛,用两倍最小感染剂量细菌攻击,免疫牛能够获得有效保护。本研究利用实验动物小鼠和本动物牛建立了牛荚膜A型Pm的免疫攻毒模型,并表明该全菌体灭活疫苗具有良好的免疫原性,这些研究结果为Pm疫苗的研发奠定了实验基础。

HCLV在PK-15细胞中的滴度和12nt的变化

在PK-15细胞上连续传代获得的HCLV,从第1～25代病毒的测序结果一致,同源性为100%。从第26代开始在12-nt(ttttttctttttt)插入处出现变化,第26、27代在69位碱基C的左右各多插入了一个T;第28、29代在碱基C的右侧多插入了2个T;第30、31代在C的左侧多插入了6个T,碱基C也变成了T;第32、33代在C的右侧缺失了2个T,碱基C也缺失;第34代在C的左侧缺失了5个T,在C的右侧缺失了5个T,碱基C也缺失,并且在第86位由原来的A变成G,第92位由原来的T变成C。将HCLV1～34代病毒接种24孔板中长满单层的PK-15细胞,于接种后72h进行荧光抗体检查,比较不同代次HCLV在PK-15细胞上增殖的差异。结果发现,从28代开始病毒滴度有所下降。

采用潮汐式生物反应器进行ST细胞培养的研究

ST细胞为一种广泛使用的兽用疫苗生产传代细胞,该研究利用一种新型的潮汐式生物反应器Bellocell进行了ST细胞的培养试验。通过3L转瓶培养扩增ST细胞,消化分散后以1.07×108个细胞接种对潮葡汐萄式糖反的应消器耗逐Be日llo增ce快ll?,为-5维00持,培细养胞7的天正,每常天生监长测,4细8h胞之数后量需、p要H每和天葡更萄换糖新值的的培变养化基。。试在验1期～间6天细的胞培养期间,观察到细胞每日增长倍数在1.2～2.4倍之间,接种后第6天细胞数量达到峰值3.17×109个,是接种之初的30倍。细胞数量达到109时,显微镜观察载体上的ST细胞,呈梭形、大小均一,台盼蓝染色结果证实细胞存活。试验成功实现了ST细胞的高密度培养,为以ST细胞为生产基质的兽用疫苗生产提供了一条简便快捷的途径。

精英解读人才的N种命题——中国畜牧兽医学会2005年学术年会《人才与就业论坛》嘉宾精彩发言欣赏

主持人：大家都知道，陈院士学问做得好，请他谈谈人才的成长。

表达猪瘟兔化疫苗株E0蛋白的PK-15细胞系构建

将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后,连接到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中,利用Lipofectami-neTM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO 3种细胞,直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察,在3种细胞中都可以观察到绿色荧光,而且在转染后的24、48、72 h 3个时间点上,观察到的荧光细胞数量逐渐增多,在72 h时荧光细胞的数量在3种细胞中都达到最多,总的来看,在PK-15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现,重组质粒的荧光主要分布在胞浆内,而且细胞核周围的荧光较强,胞核与胞浆的界限明显,尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染3种细胞后,都可以观察到绿色荧光,但是整个细胞中是均匀出现荧光的。经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测,PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0表达,单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。

现代民商法在我国经济中的价值体现

随着我国经济的不断发展,为了能够更好地适应当前市场的发展模式,我国建立了相关的法律,民商法是保障市场经济正常运行的法律基础,民商法与市场自我调节同时进行,两者相辅相成、相互促进,这样才能保证我国市场经济顺利发展做出处理好各种复杂的市场关系。现代民商法是我国市场经济发展的基础法律,由此可见,民商法对于我国经济发展具有着至关重要的价值,基于此,本文现代民商法出发,简单介绍民商法的核心和理念,探究现代民商法在我国经济中的价值体现,从而更好的发挥民商法在我国经济中的调节作用。

论我国庭前调解工作的必要性及其实施

随着我国司法改革的不断深入,现行的民事诉讼调解方式,无论在自愿原则上,还是工作效率上日益暴露出它的局限性。实行庭前调解有利于减少当事人的诉累、化解社会矛盾,实现案件与诉讼程序的优化组合,体现司法公正,提高办案效率。目前我国大部分地区对庭前调解不够重视,庭前调解工作开展不尽如人意,完善庭前调解的重要性日渐凸显。

猪乙型脑炎传代细胞活疫苗保护剂的效力试验

为了提高活疫苗的稳定性,便于活疫苗的保存和运输,本试验将猪乙型脑炎病毒分别与耐热冻干保护剂和传统冻干保护剂进行配比、冻干,制备活疫苗,分别将疫苗置2~8℃保存,定期测定其病毒含量,同时进行25℃、37℃耐老化试验和小鼠免疫原性试验。结果显示,疫苗在2~8℃条件下保存24个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降超过3.0 Log PFU/mL;25℃常温保存2个月,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.0 Log PFU/mL,而使用传统冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降约2.0 Log PFU/mL;37℃保存10 d,使用耐热冻干保护剂制备的疫苗病毒含量下降不超过1.5 Log PFU/mL,使用传统冻干保护剂制备的疫苗下降超过1.5 Log PFU/mL。使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗和使用传统冻干保护剂制备的活疫苗对小鼠的免疫原性相当,半数有效剂量分别为10^(-3.12)/0.1 mL和10^(-3.11)/0.1 mL。试验结果表明,耐热冻干保护剂对病毒的保护效力明显优于传统冻干保护剂,具有良好的热稳定性,使用耐热冻干保护剂制备的活疫苗具有良好的免疫原性。

猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定

从临床表现有体温升高、呕吐、血样腹泻、脱水等症状的疑似猫泛自细胞减少症感染的病例采取粪样28份。从粪便样品中成功分离获得了7株猫泛白细胞减少症病毒（FPV）：JX-1、JX-2、JX-3、JX-4、JX-5、JX6和JX-7；应用F81细胞增毒，盲传至3代时在F81细胞上产生细胞病变（脱落、变形、游离等）；核酸型鉴定证明，FPV毒株的代谢可被5-IUDR所抑制，其核酸属于DNA型；所分离的病毒培养物能凝集猪的红细胞（凝集效价达2^4～2^8），并能被标准FPV阳性血清所抑制；电镜观察病毒粒子外观呈圆形或六边形，直径20-30nm；该病毒耐酸、耐热、耐乙醚；动物致病性试验，经口感染分离细胞培养毒1ml，试验组幼猫第7d发病，采集病猫粪样做HA试验为阳性反应，做HI试验，其凝集猪红细胞的能力被抑制。

折叠箱内铰链铸钢件的材质研制与生产

折叠箱内铰链是折叠箱中较关键的部件,一直采用钢板割焊生产,材料利用率低,工序多,成本高。为提高生产效率,降低成本,折叠箱生产厂家决定采用铸造方法生产。根据内铰链的工况要求,需开发出一种低成本、高屈服强度的焊接结构钢生产内铰链。参照焊接结构钢化学成分的要求,设计较低的贵重金属Cr、Mo、Cu含量,并通过870℃油淬及580℃的回火热处理,材料达到了折叠箱内铰链铸钢件的要求,即焊接性能好,屈服强度≥390MPa,而且有较好的韧性。生产加工后的内铰链铸件产品完全满足使用要求,内铰链的生产完全可以由铸件生产代替钢板割焊生产。