SELDI-TOF-MS技术对胃炎诊断的应用

目的采用蛋白质剖析技术同时解析和分析多种蛋白质,从而找出更好的生物标记物,用于检测胃炎。方法用SELDI-TOF-MS技术及配套蛋白质芯片检测30例慢性胃炎和64例非胃炎疾病患者的血清蛋白质指纹图谱,建立诊断模型。结果2个蛋白质峰[5084和8691质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型鉴别慢性胃炎和健康志愿者,灵敏度为96.66%(29/30),特异性为93.55%(29/31)。2个蛋白质峰(5910和6440m/z)组合的诊断模型鉴别胃炎和胃癌患者的灵敏度为96.6%(29/30),特异性为90.9%(30/33)。结论SELDI-TOF-MS在慢性胃炎的诊断尤其是早期诊断及候选标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步深入研究。

男性不育患者精浆中差异表达蛋白的筛选与鉴定

目的:初步探讨蛋白质组技术在精浆研究中的应用,建立男性少精、无精症患者及健康者精浆双向凝胶电泳图谱;筛查并鉴定三者间的差异表达蛋白质。方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)分离少精症、无精症患者和健康者精浆总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D Elite软件分析,从中选取差异表达蛋白质,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质。结果:获得分辨率较好的精浆双向凝胶电泳图谱;得到5个在少精症、无精症患者与健康者精浆中差异有显著性的蛋白质斑点,进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为Serpin B6(Placental thrombin inhibitor)(Cytoplasmic antiproteinase)(CAP)(Protease inhibitor6)(PI-6)、Septin-1(LARP)(Serologically defined breast cancer antigen NY-BR-24)、Kallikrein-6 precursor(Protease M)(Neurosin)(Zyme)(SP59)、Hemoglobin beta chain、Beta-defensin 108 precursor(Beta-defensin 8)(DEFB-8)。结论:在少精症、无精症患者与健康者精浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与少精、无精相关的精浆标志物。

乙肝患者前S1抗原与HBV-M及HBV-DNA检测的关系

目的探讨前S1抗原与乙肝标志物(HBV-M)及HBV-DNA之间的关系,进而分析前S1抗原的检测在判断乙肝病毒复制中的作用。方法检测360例乙型肝炎患者血清中前S1抗原、HBV-M、HBV-DNA,对其结果进行比较分析。结果前S1抗原能够较好地反映乙肝病毒复制情况,对病情的预后及疗效判断具有指导意义。结论前S1抗原与HBV-DNA、HBeAg阳性呈高度正相关,在防治中应引起重视。

慢性肾功能不全患者血清四种细胞外基质分子测定及其意义

目的检测肾功能不全患者血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)和Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)水平变化,并探讨其临床意义。方法采用放射免疫法测定30例氮质血症患者(A组)、30例尿毒症患者(B组)及35例正常人(C组)血清中HA、LN、PCⅢ、C-Ⅳ及肌酐(Cr)浓度,并分组进行两两比较和相关性分析。结果A组的HA、LN、PCⅢ及Cr水平与C组相比差别有显著性意义(均P<0.01),而C-Ⅳ的差别却无显著性意义(P>0.05);B组的HA、LN、PCⅢ、C-Ⅳ及Cr水平与A组相比差别有显著性意义(均P<0.01)。在所有患者人群中,四项指标与Cr均呈正相关(均P<0.05)。B组血清HA值与LN、PCIII,LN与C-Ⅳ呈正相关均P<0.05LN与PCIII,HA与C-Ⅳ,PCIII与C-Ⅳ之间无相关性(均P>0.05)。结论HA、LN、PCⅢ和C-Ⅳ四种细胞外基质成份血清水平变化与肾功能损害程度有关,有一定的临床应用价值。尿毒症患者细胞外基质四种成份血清水平之间的变化并非完全一致。

微粒子酶免法检测HBV感染者血清学标志物的结果分析

目的探讨不同年龄组HBV感染者的感染情况及雅倍微粒子酶免法(MEIA法)试剂同国产ELISA法试剂的评价。方法MEIA法、ELISA法。结果HBV感染者各年龄组HBsAg与CORE含量无显著性差异(P>0.05),而HBeAg的含量有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。ELISA法试剂检测乙肝标志物同MEIA法试剂相比的结果符合率以HBsAg、Anti-HBs为最佳,而CORE、Anti-HBe符合率偏低。结论HBV感染者不同年龄组HBeAg含量有显著性差异,HBsAg与CORE最无显著差异;MEIA法试剂检测乙肝标志物优于ELISA法试剂。

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞活化的研究

目的 :探讨HBV感染不同的临床结果以及HBV -DNA的复制与其外周血中淋巴细胞活化状况的关系。方法 :应用流式细胞技术检测187例乙型肝炎患者及16例健康对照外周血中淋巴细胞的活化 ,同时利用实时荧光定量PCR测定其体内HBV -DNA载量。结果 :以HLA -DR作为各T淋巴细胞的活化指标 ,急性肝炎恢复期和慢性肝炎患者活化的CD3+、CD4+和CD8+淋巴细胞明显高于健康对照和慢性病携带者 (P<0.05或P<0.01)。而在慢性肝炎中。病程越严重 ,其外周血淋巴细胞的活化率亦越高。但乙型肝炎患者体内的病毒载量与其外周血淋巴细胞的活化无明显相关性 (P>0.5)。结论 :乙型肝炎患者所致的肝细胞损坏以及其体内病毒的清除与机体的免疫状况明显相关 ,但体内乙型肝炎病毒的复制与机体的免疫功能有关。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因型别研究

目的研究大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb各亚型的流行情况。方法对氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性的菌株进行DNA序列测定,测得序列与已在美国国立生物信息中心(NCBI)登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族序列比对,确定型别。结果6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠埃希菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

乙型肝炎病毒相关性肝癌患者的比较蛋白质组学研究

筛选并鉴定了乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝癌的血清差异表达蛋白.采用蛋白芯片及表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对正常人与乙型肝炎病毒相关性肝癌患者术前血清分别进行检测,共发现了44个差异蛋白,其中21个上调,23个下调.通过高效液相色谱技术分离纯化其中表达差异最明显的蛋白,并进行质谱鉴定.通过蛋白功能结果分析表明,这些蛋白的差异表达可能与乙型肝炎病毒相关性肝癌的发生机制密切相关.

应用SELDI-TOF-MS技术建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型

目的:建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型．方法:用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得新发肝癌、肝硬化患者和正常人血清的蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立肝癌的筛选模型．结果:肝癌患者与健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白(4477,8943,5181, 8617,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,肝癌患者与肝硬化患者血清蛋白质指纹图谱之间2个标志蛋白(4477,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白(4097 Da)在肝癌患者血清中低表达．SELDI-TOF-MS技术的特异性(60／60,100％);敏感度(18／20,90％)．分析系统筛选出4477,8943,13 761,4097 Da标志蛋白建立的肝癌诊断模型．结论:建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分肝癌与非肝癌患者,SELDI-TOF-MS在肝癌的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有一定价值．

SELDI-TOF-MS技术在肝癌诊断中的临床应用性研究

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选肝癌患者血清标志蛋白,探讨作为临床诊断指标的最佳标志蛋白组合模式。方法对40例肝癌、20例肝硬化和60例健康志愿者的血清进行分析,并反复分析寻找合理运算规则以确定能够区分肝癌和健康志愿者与肝硬化患者的蛋白组学图谱。结果肝癌、肝硬化患者与健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白在肝癌患者血清中低表达。其中2个蛋白质峰[8943 Da和4477 Da质荷比(m/z)]组合构建的诊断模型Ⅰ鉴别肝癌和健康志愿者,灵敏度为90％(36/40),特异性为100％(60/60)。3个蛋白质峰(4477Da、13761Da和4097Da m/z)组合的诊断模型Ⅱ鉴别肝癌组与肝硬化组的灵敏度为85％(34/40),特异性为90％(18/20)。结论SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感度远远高于目前所采用的某一单独的标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究肝癌的蛋白质组学改变及其临床应用可能具有重要意义。

慢性阴道炎患者生殖道解脲脲原体和沙眼衣原体感染分析

目的通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测慢性阴道炎患者阴道内解脲脲原体(Uu)和沙眼衣原体(Ct)感染状况,用以指导临床正确治疗。方法应用荧光定量聚合酶链反应对380例慢性阴道炎患者的阴道分泌物进行解脲脲原体和沙眼衣原体PCR检测。结果解脲脲原体阳性率为42.9%,其阳性标本的平均拷贝数为3.4×105copies/ml,沙眼衣原体阳性率为16.6%,其阳性标本的平均拷贝数为5.8×104copies/ml,解脲脲原体和沙眼衣原体合并感染的阳性率为12.6%。结论PCR技术具有简便、快捷、准确的优点,是目前快速诊断慢性阴道炎患者Uu、Ct感染状况的可靠诊断方法之一。

SELDI-TOF-MS技术在临床诊断中的应用

表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laserdesorption/inionation-time of flightmass spectra,SELDI-TOF-MS)为蛋白质组学研究提供了最为有效的技术平台。它将芯片技术和飞行时间质谱技术相结合,整合样品分离、纯化及检测分析为一体,实现了快速、高效、高通量检测,是在分子水平上诊断疾病的非常重要的工具。

应用SELDI-TOF-MS技术分析少精子症患者精浆中的差异表达蛋白

目的：用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析少精子症患者和正常对照组精浆蛋白质指纹图谱的变化，建立能鉴别少精子症患者和正常对照组精浆标志物的诊断模型。方法：收集33例少精子症和31例正常对照的精浆，用CM10（弱阳离子交换芯片）蛋白质芯片和SELDI-TOF-MS检测蛋白质指纹图谱的表达。用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理，建立区分少精子症患者与正常对照组精浆中蛋白质指纹图谱差异表达模型，并用此模型对33例少精子症患者及31例正常对照组进行盲法交叉验证。结果：在相对分子质量2000～20000范围内，共检测到185种有差异的蛋白峰，其中23种有统计学意义（P〈0．05）。建立了由3种差异蛋白质组成的少精子症诊断模型，其敏感性为90．9％（30／33），特异性为93．5％（29／31），双盲法验证结果其敏感性为87．9％（29／33），特异性为90．3％（28／31）。结论：用SELDI-TOF-MS技术初步建立的区分少精子症与正常对照精浆蛋白质差异表达模型可以区别少精子症和正常对照。

产ESBLs大肠杆菌的耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠杆菌的耐药性,尤其要了解产ESBLs大肠杆菌氨基糖苷类的耐药性及其修饰酶基因流行情况。方法2006年1～12月我院分离的大肠杆菌用VITEK-32GNI+鉴定,K-B法检测对氨基糖苷类、β-内酰氨类等18种抗菌药物的耐药性,并对其中17株产ESBLs大肠杆菌用聚合酶连反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ。结果产ESBLs大肠杆菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢唑啉、头孢匹肟、头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、头孢西丁、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、复方新诺明的耐药率分别为100%、100%、41.6%、100%、69.5%、30.5%、98.2%、81.0%、81.0%、79.6%、79.2%、34.4%、12.5%、7.1%、7.9%、5.4%、81.0%、,未见亚安培南耐药株,产ESBLs检出率为46.4%。其中17株产ESBLs大肠杆菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为52.9%(9/17)、100%(17/17)和100%(17/17)。氨基糖苷类酰基转移酶基因检出率以aac(3)-Ⅱ最高,占94.1%,aac(6′)-Ⅰb次之,占35.3%,ant(3″-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ较低,分别占11.8%和5.9%,其中1株表型耐药,但未检出以上基因。6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠杆菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠杆菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠杆菌多重耐药更为突出。氨基糖苷糖苷类修饰酶基因以aac(3)-Ⅱ最高,aac(6′)-Ⅰb次之,ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ较低,aac(3)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ未检出。大肠杆菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

采用SELDI-TOF质谱技术分析胃癌患者血清蛋白质谱的变化

目的:利用蛋白质芯片和生物信息学方法从胃癌患者血清中筛选标志蛋白质。方法:采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和Q10蛋白芯片对30例胃癌患者、30例胃炎患者、20例术后胃癌患者和40例健康者血清的蛋白质指纹图谱进行了检测,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用CIPHERGEN公司的Biomarker wizard和Biomarker Patterns System软件分析。结果:胃癌患者与健康者血清蛋白质指纹图谱相比有18个显著差异蛋白质,其中8个蛋白质在患者血清中高表达,10个蛋白质在患者血清中低表达。三个蛋白质(5907Da、5080Da、8691Da)组合构建诊断模型可鉴别胃癌与健康者。胃癌患者与胃炎患者血清蛋白质指纹图谱相比有13个显著差异蛋白质,其中7个蛋白质在胃癌患者血清中高表达,6个蛋白质在胃癌患者血清中低表达。二个蛋白质(5907Da、6436Da)组合构建诊断模型可鉴别胃癌与胃炎患者。结论:实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可以从血清中筛选出胃癌相关的标志蛋白质,可见蛋白质芯片技术对于发现和筛选血清中的胃癌标志蛋白质及疗效判断是一种有效、快速的工具。

血清蛋白质谱模型对肝癌诊断的应用

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)从肝癌患者血清中筛选标志蛋白,找出最佳的标志蛋白组合模式作为临床诊断指标。方法蛋白组学图谱通过表面增强激光解吸电离飞行时间质谱产生。对20例肝癌患者和60例健康志愿者、20例肝硬化的血清蛋白质谱进行反复分析寻找合理运算规则以确定能区分肝癌和健康志愿者与肝硬化患者的蛋白组学图谱。结果发现肝癌患者和肝硬化患者、健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白在肝癌患者血清中低表达。分析系统筛选出4477Da、8943Da、13761Da、4097Da标志蛋白建立起一个肝癌的诊断模型。结论SELDI-TOF-MS技术的特异性及敏感度远远高于目前所采用的某一单独的标志物的血清学诊断,其结果对进一步研究肝癌的蛋白质组学改变及其临床应用可能具有重要意义。

应用激光解吸电离飞行时间质谱技术筛选无精子症患者精浆差异蛋白

目的:用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析无精子症和正常人精浆蛋白指纹图谱的变化,建立能鉴别无精子症和正常人精浆标志物的诊断模型。方法:收集33例无精子症和31例正常人的精浆,用H50(疏水芯片)蛋白质芯片和SELDI-TOF-MS检测蛋白质质谱的表达。用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理,建立区分无精子症和正常人精浆中蛋白质谱差异表达模型。结果:在分子量2000～20000范围内,共检测到78个有差异的蛋白峰,其中12个差异有显著性(P<0.01),建立了由3个差异蛋白组成的无精子症诊断模型,其诊断灵敏度为96.9%(32/33),特异性为96.7%(30/31)。结论:用SELDI-TOF-MS技术初步建立的区分无精子症和正常人的精浆蛋白差异表达模型可以区别无精子症和正常人,可能为无精子症的诊断提供新的手段。

蛋白芯片技术筛选无精症患者精浆中标志蛋白质

目的:利用蛋白质芯片和生物信息学方法从无精症患者精浆中筛选标志蛋白质。方法:采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和IMAC3蛋白质芯片对30例无精症患者精浆和57例健康人精浆的蛋白质谱图进行了检测,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用CI-PHERGEN公司的Biomarkerwizard和BiomarkerPatternsSystem软件分析。结果:无精症患者与正常人精浆蛋白质谱相比有16个显著差异蛋白质,其中6个蛋白质在患者精浆中高表达,10个蛋白质在患者精浆中低表达。BiomarkerPatternsSystem软件用16个显著差异蛋白质中的3个标志分子建立无精症诊断的分类树模型。检测灵敏度为86.7%(26/30)、特异性为96.5%(55/57)。结论:实验证明利用蛋白质组学和生物信息学方法可以从精浆中筛选出无精症相关的标志蛋白质,而且蛋白质芯片技术对于发现和筛选精浆中的无精症标志蛋白质是一种有效、快速的工具。

应用SELDI技术检测反义寡核苷酸作用前后胃癌细胞培养液中的差异蛋白

目的:利用针对人端粒酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸(ASODN)和正义寡核苷酸(NODN)作用于人胃癌细胞SGC7901,比较ASODN和NODN作用后细胞培养液蛋白的变化。方法:利用SELDI技术检测差异蛋白的表达变化。对照组为未加任何处理因素的SGC7901细胞。结果:SELDI技术检测发现,ASODN作用组有31个差异蛋白分子低表达,10个差异蛋白分子高表达。NODN作用组有25个差异蛋白分子低表达,16个差异蛋白分子高表达。所有差异蛋白分子量均<10000KDa。ASODN作用组中有6个低表达蛋白在NODN作用组高表达,分子量分别为4180.7KDa、4825KDa、7925.2KDa、8138KDa、8605.1KDa、8935.3KDa。结论:ASODN和NODN作用SGC7901细胞后细胞培养液中所表达的差异蛋白十分相似。

器械乙型肝炎表面抗原检测假阳性反应的实验研究

目的 找出造成器械标本乙型肝炎表面抗原 (HBs Ag)检测假阳性反应的因素。方法 在加与不加中和剂的情况下 ,分别采集器械标本进行 HBs Ag检测 ,以及直接抽取消毒剂标本进行 HBs Ag检测 ,观察结果。结果 对器械标本进行 HBs Ag检测存在假阳性反应。结论 消毒剂本身对检测存在干扰现象。