冬凌草甲素介导Notch信号通路对多发性骨髓瘤细胞生长水平、凋亡率及异常转化情况研究

目的探究冬凌草甲素介导Notch信号通路对多发性骨髓瘤细胞生长水平、凋亡率及异常转化情况。方法选取U266细胞、RPMI8226细胞和KAS-6/1细胞,采用CCK8法检测细胞生长水平,采用酶标仪492 nm处检测光密度检测物厚度D值测定细胞的生长抑制率,随后采用流式细胞仪检测RPMI8226细胞和U266细胞的凋亡情况,最后对所检测细胞进行异常转化的观察。结果研究组U266细胞、RPMI8226细胞和KAS-6/1细胞的生长水平均明显低于对照组(P<0.05)。研究组干预后Notch 1-siRNA与核因子κB(NF-κB)-siRNA表达水平变化明显优于对照组(P<0.05)。研究组RPMI8226细胞、U266细胞凋亡率明显优于对照组(P<0.05)。研究组异常转染、异常克隆、异常增生的发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论冬凌草甲素能够明显抑制多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞、KAS-6/1细胞体外生长,有效激活Notch信号通路调节诱导肿瘤细胞凋亡过程,值得临床推广应用。

高尿酸血症与痛风患者并发肾结石的影响因素

目的收集高尿酸血症及痛风患者的临床资料及生化结果,分析高尿酸血症及痛风患者并发肾结石的危险因素。方法收集安徽省立医院门诊和住院及体检中心的痛风患者82例及高尿酸血症患者178例进行对照研究,所有患者统一问卷调查,收集一般资料及实验室检查数据,均进行双肾、输尿管、膀胱B超;采用组间对照及二元Logistic回归方法进行统计学分析。结果痛风组与高尿酸血症组肾结石发生率分别为36.6%和27.5%,两组比较差异无统计学差异(P>0.05)。痛风并发肾结石组相比痛风无肾结石组身高更高、体质量更重、病程更长、低密度脂蛋白(LDL)较高(P<0.05)。Logistic回归分析显示:病程>9年[OR=23.493,95%CI(2.824~195.421),P=0.003]、LDL≥4.1 mmol/L[OR=10.160,95%CI(1.218~84.747),P=0.032]是痛风患者发生肾结石的危险因素;痛风并发肾结石组相比高尿酸血症并发肾结石组有吸烟史、饮酒史的比例更高(P<0.05);所有高尿酸血症患者并发结石组相比高尿酸血症无肾结石组的体质量更重,BMI更高,舒张压更高(P<0.05)。结论高尿酸血症与痛风患者均有较高的肾结石发生率。病程>9年、LDL≥4.1 mmol/L是痛风患者肾结石发病的独立危险因素。高体质量及高体质量指数的痛风/高尿酸血症患者更应注意进行泌尿系结石的筛查以利于早期发现肾结石并及时治疗。

高尿酸背景下P2X7R的Arg 307>Gln位点基因型的功能研究

目的通过建立稳定表达嘌呤受体P2X配体门控离子通道7(P2X7R)的野生型或突变体型人急性白血病单核细胞株(THP-1)源性单核细胞系,分析高尿酸背景下P2X7R的Arg 307>Gln SNP基因型的功能改变。方法慢病毒转染THP-1细胞,建立稳定表达野生型、突变体型Arg 307>Gln和空病毒型的THP-1细胞系,设置野生型、突变体型Arg 307>Gln和空病毒型3型,每型分3组,分别加入尿酸单钠盐(MSU)(M组)、MSU+三磷酸腺苷(ATP)(MA组)、空白对照组(C组)。丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)分别刺激3组细胞,离心撤去PMA;M组、MA组中加入MSU孵育,之后MA组中加入ATP孵育;分别收集3组细胞上清液和细胞。ELISA法检测3组上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达水平,qRT-PCR检测3组细胞IL-1β、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3 (NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白含半胱氨酸天冬氨酸-1蛋白酶结构域(ASC)和Caspase-1 mRNA表达水平。结果单纯加入MSU晶体后,野生型、突变体型Arg 307>Gln和空病毒型3者之间均无差异(P>0.05)。加入ATP孵育后,野生型中IL-1β和NLRP3水平均高于突变体型Arg 307>Gln,差异有统计学意义(P<0.05)。而ATP-P2X7R-IL-1β信号通路上ASC和Caspase-1 mRNA水平在野生型和突变体型2者之间无差异(P>0.05)。结论在高尿酸背景下,突变体型Arg 307>Gln使P2X7R功能明显下调,IL-1β和NLRP3表达水平均降低。Caspase-1、ASC可能分别在激活通路过程中被降解。

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的探究冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法通过细胞培养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10~50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10~50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Bax比例,调节细胞凋亡有关。

IRE1信号通路在热诱导睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激IRE1信号通路在急性热应激诱导睾丸生殖细胞凋亡中的作用。方法 24只成年ICR雄性小鼠,随机分为4组。将热处理组小鼠身体的下1/3部分(包括阴囊、后腿和尾巴)浸于43℃恒温水浴中15 min,于热处理后0.5、2和6 h取睾丸组织。将对照组小鼠下腹部浸入22℃水浴15 min,6 h后取睾丸组。采用TUNEL法检测睾丸组织生殖细胞凋亡;用半定量RT-PCR技术检测u XBP-1/s XBP-1 mRNA表达;用Western blot检测睾丸总蛋白p-JNK表达。结果单次热应激能够明显诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡。与对照组相比,热处理能够明显降低睾丸组织u XBP-1/s XBP-1 mRNA的比值,以热处理后0.5和2 h最为显著,而随着时间的延长,又逐渐恢复正常。热应激明显诱导睾丸JNK(另一个IRE1的下游分子)磷酸化水平。结论单次热处理能激活睾丸组织内质网应激IRE1通路,在早期可能激活IRE1-XBP-1通路保护睾丸组织对抗热应激,而后期可能通过激活IRE1-JNK通路诱导睾丸生殖细胞凋亡。