锯缘青蟹血细胞酚氧化酶活力及主要影响因子

研究了温度、pH、促进剂、抑制剂、菌体及免疫多糖对锯缘青蟹(Scylla serrata)血细胞裂解物(HLS)酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活力的影响。试验结果表明:锯缘青蟹PO的最适作用温度为25℃,最适pH值为7.8;SDS、Ca2+、Mg2+均可提高PO的活力,其中Ca2+和Mg2+的最佳反应浓度分别为50 mmol/L和150 mmol/L,SDS的最佳反应浓度为2.5 mg/mL;叠氮钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠、乙二胺四乙酸、Cu2+对PO活力有不同的抑制作用。发现拟态弧菌SS060818、气单胞菌Mr M0602、金黄色葡萄球菌ATCC25923、溶壁微球菌AS1.634对PO有激活作用,其中拟态弧菌和气单胞菌激活作用显著,金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌对PO有弱激活作用;肽聚糖、拟态弧菌脂多糖粗提物可显著提高PO活力,肽聚糖、脂多糖的最佳激活浓度分别为2.7mg/mL、0.5 mg/mL。

中草药免疫增强剂在甲壳动物病害防控中的应用

中草药免疫增强剂具有来源广泛、价格低廉、环境污染较低等优越性,近年来已较多地应用于甲壳类养殖动物的病害防控,产生了较好的效果。本文介绍了中草药免疫增强剂多糖、甙类、生物碱类、有机酸及挥发性油类等免疫活性成分和作用机理,以及在甲壳动物上的应用。总结和分析了中草药免疫增强剂在甲壳动物病害防控中的应用情况、评价指标及目前在研制和应用中存在的主要问题和发展趋势,以期为甲壳动物免疫增强剂的研究和应用提供参考。

嗜水气单胞菌BA-ELISA的建立及其在病原检测中的应用

从中华鳖中分离的嗜水气单胞菌致病株T0608经福尔马林灭活后,注射免疫新西兰兔,制备了高价免疫血清,血清的菌体凝集效价可达1/1 280;G蛋白亲和层析纯化兔IgG,将IgG用生物素标记,建立了生物素-亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法(BA-ELISA);其最低检出限为2.5×103cfu,相当于0.5 ng菌体蛋白,其检测灵敏度为ABC-ELISA(4.0×104cfu)和间接ELISA(4.0×104cfu)的16倍;特异性试验结果表明,本法与鱼类气单胞菌、拟态弧菌、海豚链球菌、大肠杆菌等无交叉反应。BA-ELISA可不经细菌培养直接检测人工感染48 h中华鳖的肝、肠道组织中的嗜水气单胞菌。用该方法对湖州市龟鳖养殖场的水样、中华鳖和巴西龟肝、肠道内容物进行检测,结果表明该方法可较好地应用于发病中华鳖的病原早期诊断及养殖中华鳖的病原检测。

五倍子、乌梅等45种中草药提取物对锯缘青蟹致病弧菌的抑菌作用研究

取五倍子、乌梅等45种中草药,分别采用水提取法和醇提取法制备提取液,除菌后滴加至Φ6mm空白药敏滤纸片上,制成试验用药敏纸片。测试了提取物对拟态弧菌SM060818、梅氏弧菌SM060813、霍利斯弧菌SM060913等3种分离自锯缘青蟹体外抑菌的效果。结果表明:所试验的45种中药提取物中,有28种中药提取物对试验弧菌表现有抑菌作用;其中五倍子、乌梅、秦皮、艾叶中药提取物抑菌作用较好,对3种菌株均有较好抑菌效果;天冬、白头翁、赤芍、金银花、黄精、黄柏、青蒿等11种中草药提取物仅对2种菌株有较好抑制作用,千里光、穿心莲等17种中药提取物对弧菌无抑制作用;大部分中药抑菌活性成份均为水溶性提取物,青蒿存在明显的醇溶性抑菌物质。测定了五倍子等9种中药提取物对致病弧菌的最低抑菌浓度(MIC),五倍子、乌梅和天冬3种药物对拟态弧菌和梅氏弧菌的MIC分别为0.172mg/mL、0.461mg/mL、1.042mg/mL,对霍利斯弧菌的MIC分别为0.086mg/mL、0.922mg/mL和1.042mg/mL,有较好的抑菌作用。

基于最大熵的越南语新闻事件元素抽取方法

越南与中国一水相依,是重要的政治、军事和经济合作邻国,然而针对越南语新闻事件元素的提取研究非常匮乏。本文针对越南语特点,提出一种基于最大熵模型的越南语新闻事件元素抽取方法。该方法针对越语句子结构和词汇语义的特点,采用最大熵算法,选取上下文、邻近触发词以及邻近实体作为特征,定义特征模版,训练获得越南语新闻事件模型,实现新闻事件元素抽取。抽取实验结果表明本文提出的方法抽取新闻事件元素的准确率达到80%以上。

锯缘青蟹血清凝集素的特性和盐析提取研究

对锯缘青蟹（Scylla serrate）血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果显示：锯缘青蟹血清凝集素对人、兔、鼠、鸽子、中华鳖、鲫红细胞均有凝集作用，其中对小鼠红细胞凝集活性最强，血凝活性可达2^9；凝集素活性最适pH6．0～7．4；盐度对凝集活力有较大影响，NaCl浓度在0．4～0．5mol／L时基本失活；未纯化血清凝集素对Ca^2＋、Mg^2＋未表现出依赖性；凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺特异性抑制。对青蟹血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后。发现凝集素活性主要分布在25％饱和度硫酸铵沉淀区，该组分凝集比活比血清高27．44倍，SDS—PAGE结果表明主要蛋白带型为79ku、75ku、72ku。

锯缘青蟹凝集素的提取及单克隆抗体制备

凝集素是无脊椎动物非特异性免疫系统的重要组成成份，可凝集外来病原菌、进行非己识别、调理和介导血细胞吞噬。开展了锯缘青蟹血清凝集素的提取、单克隆抗体制备及凝集素定位研究，以N-乙酰基葡萄糖胺（N—Acetyl—D—glucosamine，GlcNac）为配基制备了Sepharose4B亲和层析柱，可选择性结合青蟹血清凝集素；青蟹血清通过亲和层析柱后，以0．45mol／LNaCl洗脱，得到有较高凝集活性的单一洗脱峰，该洗脱峰凝集素比活为血清凝集活性的32．6倍，SDS—PAGE显示存在87ku和79ku主要蛋白成分；以纯化青蟹凝集素免疫BALB／c小鼠，经细胞融合、单抗筛选获得BFS-2等7株可稳定分泌抗凝集素单抗的小鼠杂交瘤细胞株，单抗腹水的ELISA效价为1：10^4～1：10^5；单抗可特异性抑制青蟹凝集素的血凝，血凝抑制效价为1：32～1：64，亚型鉴定表明7株单抗均为kG1型，免疫印迹表明单抗可特异性结合87ku、79ku蛋白；采用凝集素单抗间接免疫荧光法进行了青蟹血淋巴细胞染色，结果显示凝集素主要分布于颗粒细胞的细胞质颗粒和透明细胞的细胞膜上。

血清伏立康唑候选参考方法的建立和性能评价

目的基于同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)技术建立检测血清伏立康唑的候选参考方法。方法以甲醇为沉淀剂,采用蛋白沉淀法(PPT)对样本进行前处理。以伏立康唑-2H3为内标,建立基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法。评估所建立方法的线性、定量限(LOQ)、检测限(LOD)、准确度、精密度、基质效应、稳定性。结果ID-LC-MS/MS测定血清伏立康唑的线性范围为0.2~16.0μg·mL^(-1),定量限为0.08μg·mL^(-1),检测限为0.016μg·mL^(-1)。加标回收率为97.26%~98.48%。批内变异系数(CV)<1%,批间CV<2%。相对基质效应为-1.87%~0.33%。样本分别经室温[(23±2)℃]放置4、8 h和-20℃反复冻融5次,经前处理后的样本在室温和自动进样器(8℃)分别放置4、8、12、24 h,回收率为95.63%~99.50%,检测结果稳定。相对扩展不确定度≤3.34%。结论建立了基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法,可用于该项目的检测标准化。

WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响

锯缘青蟹(Scylla serrata)俗称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹类。近年来,浙江、福建、广东等青蟹主要养殖地区出现了严重的青蟹病害。对浙江省养殖青蟹的发病原因和流行病学调查发现,白斑综合征病毒(White spotsyndrome virus,WSSV)与青蟹发病存在较大相关性。为进一步研究WSSV对青蟹的致病性和发病机理,作者采用白斑综合征病毒的除菌过滤液,以1∶10—1∶10000稀释度注射感染青蟹,结果表明1∶10、1∶100感染组的青蟹死亡率达100%,1∶1000感染组死亡率为66.7%,1∶10000感染组死亡率为38.9%。根据攻毒悬液的病毒浓度计算出WSSV对青蟹的LD50为1.19×106拷贝/只(7.93×103拷贝/g组织);取WSSV感染青蟹血淋巴进行PCR检测,攻毒死亡青蟹的WSSV检出率为100%,表明WSSV对青蟹有很强的致病力。分析病毒感染濒死蟹的血清酚氧化酶(PO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等主要酶指标,发现病毒感染青蟹的PO、POD和SOD活力明显低于对照组,而ALP、GPT和GOT的活力则明显高于对照组;用WSSV单克隆抗体对感染蟹进行免疫组化分析,发现WSSV主要侵染青蟹的鳃、甲壳下表皮、心脏、肠、胃等组织的上皮细胞,尤其以鳃上皮细胞损害最为严重。

水产常用抗菌药物对锯缘青蟹酚氧化酶的影响

研究了喹诺酮类等17种常见抗菌药物对青蟹酚氧化酶的影响。试验结果表明,药物质量浓度为500μg/ml时,所有抗菌药物对青蟹酚氧化酶（PO）均有明显抑制作用;药物质量浓度为5~10μg/ml时（常规使用剂量）,庆大霉素、卡那霉素和丁胺卡那霉素等5种药物的PO抑制率为10%~25%;诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星等6种药物的PO抑制率为5%~10%,抑制作用较弱;恩诺沙星和红霉素等4种药物的PO抑制率均小于5%,对青蟹PO无明显影响;低剂量阿维菌素和氟苯尼考对青蟹有免疫促进作用。

三门青蟹浅海笼养和越冬养殖试验

三门青蟹分类上属甲壳纲（Crustacea），十足目（Decapoda），短尾亚目（Brachyura），梭子蟹科（Portunidae），青蟹属（Scyllaserrata），原称为锯缘青蟹（Scyllasermta）。近年来国内学者根据形态特征和线粒体DNA的序列分析结果，认为应属于拟穴青蟹（Scyllaparamamosain），分布于我国浙江、福建、台湾、广东、广西和海南沿岸水域及日本、印度、东南亚、澳大利亚、南非等海域，是我国东南沿海重要的海洋经济蟹类之一。三门具有“青蟹之乡”的美誉，目前青蟹养殖模式主要为围塘养殖，该模式养殖密度较低，产量不高，养殖环境很易受投饵过度、药物使用、夏季高温的影响，出现水体缺氧、底质恶化等养殖环境恶化，造成青蟹发病和严重死亡。

青蟹、台湾草虾及贝类生态防病套养技术及效益分析

浙江省三门县地处中国＂黄金海岸线＂中段三门湾畔,是浙江省海水养殖重点县,在青蟹养殖方面有悠久历史,青蟹、脊尾白虾、缢蛏等主要养殖品种的养殖和混养有悠久历史,其他对虾品种的养殖和混养研究较少。台湾草虾又称斑节对虾（Penaeus monodon）、草虾、花对虾、大虎虾等,是对虾属中最大型种,备受消费者青睐。台湾草虾体长约12~20cm,属广盐性虾类,最适盐度为20~30,可适应的盐度范围为5~45,适宜温度为18~35℃,

射击运动员比赛中的心理状态与对策研究

射击运动员在比赛过程中的行为受其心理变化的制约,这将对比赛结果产生重要影响。本文就射击运动员在比赛中常见的心理变化进行分析,并提出了相应的对策措施。

南美白对虾与虱目鱼生态混养模式的建立和应用

三门县地处中国＂黄金海岸线＂中段三门湾畔,是浙江省养殖重点县。近年来,南美白对虾在三门县养殖迅速发展,目前南美白对虾养殖方式主要以集约化单养为主,单位养殖面积放养密度高,饲料投放强度大,容易出现养殖池富营养化等情况,使得南美白对虾病害逐渐加剧,极大影响了南美白对虾的健康水平和养殖效益,南美白对虾养殖产业的发展也受到制约。因此需要寻找一种能有效改善养殖池富营养化又对南美白对虾无影响的套养品种,以改善南美白对虾的健康状况。

全血免疫抑制剂ID-LC-MS/MS候选参考方法的建立和性能评价

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)检测全血免疫抑制剂(他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A)的候选参考方法,并评价其性能。方法采用蛋白沉淀法(PPT)对全血样本进行前处理,采用ID-LC-MS/MS定量检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A。对建立的候选参考方法的分析性能(线性、定量限、基质效应、精密度和正确度等)进行评估。结果ID-LC-MS/MS检测他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的总检测时间为4.5 min;环孢素A的线性范围为10~500 ng/mL,定量限为10 ng/mL;他克莫司、西罗莫司和依维莫司的线性范围均为1~50 ng/mL,定量限均为1 ng/mL。4种免疫抑制剂的相对基质效应范围均≤8.64%,批内、批间变异系数(CV)均≤5%,加标回收率为98.84%~100.99%。他克莫司的扩展测量不确定度≤7.91%(k=2)、西罗莫司≤7.97%(k=2),依维莫司≤7.14%(k=2),环孢素A≤7.91%(k=2)。结论成功建立了ID-LC-MS/MS检测全血他克莫司、西罗莫司、依维莫司和环孢素A的候选参考方法,可用于相关项目的量值溯源和标准化。

杨梅烧酒香气物质和重金属含量的分析

采用液-液萃取法萃取杨梅烧酒中的香气成分,用气相色谱-质谱联用(GC-MS)仪进行分析检测;采用原子吸收分光光度法,分析杨梅酒中的铁、锰、铜、锌、铅、镁重金属元素。结果表明,杨梅烧酒共检出22种香气成分,主要呈香化合物有酸类、酯类及醇类,主要香气成分为乙酸、己酸乙酯、己酸、苯乙醇、丁酸、丁酸乙酯;在杨梅烧酒中分别检测出6种重金属的含量为:Fe 0.93 mg/kg,Cu 0.07 mg/kg,Mn 1.24 mg/kg,Zn 0.41 mg/kg,Mg 21.96 mg/kg,Pb 0.15 mg/kg。而用于浸泡杨梅的酒中6种重金属含量为:Fe 0.12 mg/kg,Cu 0.02 mg/kg,Mn未检出,Zn 0.01 mg/kg,Mg 2.21 mg/kg,Pb 0.13 mg/kg。结果表明,重金属有从杨梅向酒中迁移的倾向。

关于提高中职旅游服务与管理专业学生语言表达能力的策略

中职旅游服务与管理专业就业方向是旅游服务、酒店服务等行业,这些行业要求毕业生有较强的语言交流沟通能力以及文案写作能力,对语言表达能力要求较高。语言表达能力的高低影响中职旅游服务与管理专业学生就业。但是中职旅游服务与管理专业学生语言表达能力不容乐观,大部分中职生文化基础比较薄弱,并且中职学校有重技能轻文化的现象。由于语文教学方法陈旧、语文教学课时不足、语文教学服务专业意识薄弱等原因,这些学生即使经过三年的中职学习,语言表达能力仍然进步不大。针对中职旅游服务与管理专业的学生语言表达能力较为薄弱的原因,开展利用语文教学提升他们的语言表达能力的研究,对提高该专业学生的综合素质以及就业竞争力有较大意义。

关于射击运动员选材问题的研究

射击是一项具有静力性质的运动，运动员受一些重要因素的影响，分析好这些因素对于选拔出优秀的射击运动员十分重要。本文就从射击运动员的选材问题八题。通过对影响射击运动员选材因素的深入分析，归纳出射击运动员选材好的方法与标准，希望能为国家培养出优秀的射击后备人才。

超高效液相色谱快速检测万古霉素浓度方法的建立和性能评价

目的建立一种基于超高效液相色谱(UPLC)技术快速测定血清万古霉素浓度的方法并评价其性能。方法以去甲万古霉素为内标,以0.3 mol/L硫酸锌水溶液为蛋白沉淀剂,对血清样本进行前处理。色谱柱为Phenomenex Kinetex C18柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),流速为0.5 mL/min,检测波长为220 nm,柱温40℃。流动相A为25 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH值为2.5),流动相B为乙腈,进行梯度洗脱,并对方法的线性、准确度(加标回收率)、精密度、携带污染率、定量限和检测限等分析性能进行评价。分别采用UPLC和高效液相色谱(HPLC)测定50例患者血清万古霉素浓度,并对测定结果进行方法学比对和评价。结果UPLC测定万古霉素的线性范围为2.0~99.6μg/mL,定量限和检测限分别为1.0和0.1μg/mL。低、中、高浓度样本的平均批内变异系数(CV)分别为3.28%、2.21%、2.59%,批间CV分别为5.73%、2.75%、0.82%。低浓度(2.0μg/mL)、中浓度(19.9μg/mL)、高浓度(79.6μg/mL)加标样本的平均加标回收率分别为104.06%、99.80%、100.19%。中浓度样本的携带污染率为0.57%,高浓度样本的携带污染率为0.19%。UPLC和HPLC测定患者血清万古霉素浓度具有良好的相关性(r=0.9919)。结论建立了基于UPLC技术的万古霉素血药浓度监测方法,该方法的重现性好、快速、简便、灵敏度高、准确度高,适用于临床常规万古霉素药物浓度监测。

南美白对虾设施化养殖水处理技术

本文通过南美白对虾设施化养殖水处理技术,实现＂低能耗、低排放、低污染＂。通过一系列的技术措施保持养殖水质的稳定,实施生态防病。整个养殖过程实现无公害养殖,产品绿色环保和无药物残留,生产出优质无公害产品,从而提高水产品品质、保障食品安全。