微波消解ICP-MS法测定西藏冬虫夏草中的微量元素

目的:分析和比较22个西藏不同地区冬虫夏草样品中的微量元素含量。方法:采用浓硝酸-双氧水消解冬虫夏草样品,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定样品中钾、钠、钙、镁、铝、铁、铜、锌、锰、铬、镉、铅等12种微量元素。结果:对人体有益的钾、钠、钙、镁、铝、铁等元素含量均较为丰富,其中钾元素含量最为丰富;有9个样品的铅含量不同程度地超出了药用植物及制剂进出口绿色行业标准的限量标准。结论:不同冬虫夏草样品中的微量元素含量存在不同程度的差异,研究结果为西藏不同地区冬虫夏草的质量评价和控制提供参考。

白木香内生真菌的分离及分子鉴定

对采自广东省信宜市的白木香进行了内生真菌分离培养,共获得50个菌株,通过rDNA中内转录间隔区(ITS)序列鉴定其为20个种,其中确定至种名的有7属8种,仅确定至属名的有8种,不能确定种属的有4种,其中A20菌株(Fimetariella rabenhorstii)为国内首次报道。刺盘孢菌(Colletotrichum)共分离到17株,占分离总数的34%,为白木香优势种群;镰刀菌(Fusarium)共分离到11株,是结香部位的优势种群。白木香内生真菌分布部位的专一性不明显,茎中分离的数量及种类最多,叶中最少;5年龄内生真菌的多样性较好,10月龄的多样性较低。

白木香内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选研究

白木香[Aquilavia sinensis(Lour.)Gilg]是我国特有的珍稀濒危药用植物。对已分离得到的白木香内生真菌的发酵液提取物的抗肿瘤抗菌活性进行了筛选。结果表明,对肿瘤细胞SF-268增殖的抑制率在90%以上的菌株有6株,占总菌株数的31.6%。其中有16株对金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性,占总菌株数的84.2%,有9株表现较强的抑菌活性。另外有1株对白色念珠菌表现较强的抑菌活性;有2株对黑曲霉表现一定的抑菌活性。所有菌株对大肠埃希菌都没有表现明显的抑菌活性。

南方红豆杉内生真菌的分离鉴定及其细胞毒活性研究

采用平板培养法对采自广东省的南方红豆杉进行内生真菌的分离,并通过形态学和分子生物学方法进行分类鉴定;共分离鉴定内生真菌22株,主要为刺盘孢属(Colletotrichum)、球座菌属(Guignardia)、座腔菌属(Botryosphaeria)、节菱孢属(Arthrinium)、炭角菌属(Xylaria)、毛壳菌属(Chaetomium)、交链孢属(Alternaria)、拟茎点霉属(Phomopsis)、长蠕孢属(Helminthosporium)等属。还采用MTT法测定了这些内生真菌发酵粗提物的细胞毒活性,活性研究发现有6个菌株的粗提物在作用浓度为100μg/mL时,对至少1种受试肿瘤细胞株的抑制率在50%以上,其中菌株A223和A240对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率在90%以上。表明南方红豆杉内生真菌多样性丰富,有些菌株具有良好的细胞毒活性,值得进一步深入研究。

深海真菌Penicillium herquei FS83次生代谢产物研究

利用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱、薄层层析以及高效液相色谱法等色谱技术从深海真菌Penicillium herquei FS83的液体发酵产物中分离得到5个化合物,通过波谱数据分析结合文献对照,分别鉴定为peniherin A(1)、sclerodin(2)、对羟基苯乙酸甲酯(3)、对羟基苯乙酮(4)、(R)-甲羟戊酸内酯(5)。其中化合物1为新化合物,化合物2为首次从该属真菌中分离得到。生物活性实验显示,化合物1无明显细胞毒活性及抑菌活性。

毛蜂窝菌提取物体外抗肿瘤活性的研究

以人肺癌细胞NCI-H460、中枢神经系统癌细胞SF-268及乳腺癌细胞MCF-7为供试细胞株,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法对毛蜂窝菌(Hexagona apiaria)野生子实体、栽培子实体、培养废料、发酵菌丝体的醇提物和发酵液乙酸乙酯萃取物、发酵液水相部分等各提取物进行了体外抗肿瘤活性研究。结果表明,毛蜂窝菌发酵液乙酸乙酯萃取物对三种肿瘤细胞株都有较明显的抑制作用,抑制率达80%以上;其它提取物也有一定的抑制作用,但抑制率在40%以下。

几种药用真菌粗多糖降血糖作用研究

以四氧嘧啶糖尿病小鼠为动物模型,对虫草属(Cordyceps)、针层孔菌属(Phellinus)和灵芝属(Ganoderma)的几种药用真菌粗多糖降血糖作用进行研究。试验结果表明,戴氏虫草(C.taii)与勿忘虫草(C.memorabilis)菌丝体粗多糖降血糖效果较好,其高低两个剂量组(1g/kg和0.5g/kg)的血糖和模型对照组比较都表现极显著差异;赤芝(G.lucidum)和蛹虫草(C.militaris)子实体粗多糖降血糖作用稍差,与模型对照组相比,其高剂量组降血糖作用表现极显著差异,低剂量组的降血糖作用表现显著差异;针层孔菌(P.sp)菌丝体粗多糖的降血糖作用较弱,使用低剂量时血糖和模型对照组比较无差异,高剂量时血糖和模型对照组比较有显著差异。

海洋真菌汤姆青霉FS77的抗菌活性研究

目的:研究海洋真菌汤姆青霉Penicillium thomii FS77发酵提取物对细菌和植物病原真菌的抗菌活性,为进一步开发抗菌活性物质奠定基础。方法:采用滤纸片法、生长速率法分别测定海洋真菌汤姆青霉FS77的发酵液和菌丝体提取物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli)和植物病原真菌链格孢(Alternaria alternata)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)的抑制作用;采用连续稀释法测定这2种提取物对供试菌株的最低抑制浓度。结果:汤姆青霉FS77提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌具有抑菌活性,其中发酵液和菌丝体提取物对枯草芽孢杆菌的抑制效果最好,抑菌圈直径均为14.35、10.67 mm,最低抑菌浓度分别为1.56 mg/mL;对植物病原真菌链格孢、胶孢炭疽菌也有较好的抑制效果,抑制率均达50%以上,最低抑菌浓度均为3.12mg/mL。结论:海洋真菌汤姆青霉FS77具有潜在的应用价值,其抗菌活性物质值得进一步深入研究。

戴氏虫草活性成分分析及其对小鼠免疫功能的影响

分别采用苯酚硫酸法、高效液相色谱法(HPLC)测定了野生戴氏虫草的多糖、腺苷、甘露醇的含量;利用NIH小鼠进行碳廓清试验、免疫器官重量和迟发型超敏反应试验,通过急性毒性试验确定戴氏虫草水提液小鼠LD50。试验结果表明,野生戴氏虫草的多糖、腺苷及甘露醇含量分别为36.20 mg/g、0.27 mg/g和80.20 mg/g;戴氏虫草水提液能提高非特异性免疫功能,提高受环磷酰胺抑制的小鼠免疫器官重量和细胞免疫功能,其小鼠经口LD50>69.42 g/kg。

广藿香内生真菌露湿漆斑菌菌丝体化学成分研究

目的：研究药用植物广藿香内生真菌露湿漆斑菌（ Myrothecium roridum）菌丝体的化学成分。方法采用正相硅胶柱层析、C18反相硅胶柱层析、sephadex LH-20凝胶柱层析以及薄层层析等色谱方法进行分离纯化，通过波谱数据分析结合文献对照对化合物结构进行鉴定。结果从广藿香内生真菌露湿漆斑菌菌丝体中分离并鉴定出5个化合物，分别为啤酒甾醇（1）、麦角甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、吡咯烷酮（3）、大黄酚（4）、尿嘧啶核苷（5）。结论化合物1~4均为首次从该属真菌中分离得到。

毛蜂窝菌的栽培技术研究

毛蜂窝菌是一种珍贵的药用真菌,自然资源十分稀有。本文对生长于龙眼树枯枝上的毛蜂窝菌进行了菌株的分离纯化,并通过人工栽培技术首次成功获得了毛蜂窝菌的子实体,为今后开发利用毛蜂窝菌奠定了基础。

药用真菌多糖含量测定方法研究

本文以待测溶液替代双蒸水作为对照,摸索了同一种简单的多糖含量测定方法,此方法既能避免繁琐、耗时的脱色工艺,又能消除药用真菌色素对吸光度的影响。

共培养及搔菌对虫草子实体产量的影响

探讨虫草属(Cordyceps s.l.)不同种类共培养及搔菌处理对子实体产量的影响。结果表明:只与一种虫草菌共培养时,蛹虫草(C.militaris)子实体产量不受影响;连州虫草(C.lianzhouensis)子实体产量受到古尼虫草(C.gunnii)的促进、受蛹虫草的抑制。刮去一半菌丝,蛹虫草子实体产量比不处理时提高45.6%,差异极显著。

白木香内生真菌Fusarium sp.A2固体发酵产物的化学成分研究

目的研究分离白木香内生真菌镰刀菌Fusarium sp.A2的次级代谢产物。方法采用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱等方法进行分离纯化,并通过NMR、MS等波谱方法进行结构鉴定。结果从固体发酵提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为5,4＇-二羟基-7-甲氧基黄酮（1）、木犀草素-7,4＇-二甲醚（2）、5-羟基-7,4＇-二甲氧基黄酮（3）、5-羟基-7,3＇,4＇-三甲氧基黄酮（4）、6-甲氧基-2-（2-苯乙基）色酮（5）、6-甲氧基-2-[2-（3＇-甲氧基苯乙基）]色酮（6）、β-谷甾醇（7）。结论化合物1~6均为首次从该属真菌中分离得到,其中化合物5~6为沉香的特征性成分。

黑茶砖茶中两种产生“金花”的曲霉菌

"金花"是曲霉属Aspergillus真菌在黑茶后发酵过程中,在砖茶内部形成的黄色闭囊壳。从广西和湖南产的黑茶砖茶中分离获得2株"金花菌",均能在培养基上形成闭囊壳。根据分离菌株的培养特征和微观形态特征及β-微管蛋白基因(Ben A)、钙调蛋白基因(Ca M)及RNA聚合酶Ⅱ基因(RPB2)的系统发育分析,参照Hubka最新的曲霉属曲霉组Aspergillus section Aspergillus分类系统,将分离菌株分别鉴定为假灰绿曲霉A.pseudoglaucus及冠突曲霉A.cristatus。另外,通过扫描电镜对这2株"金花菌"进行了形态观察,并记录了菌株A672闭囊壳的发育过程。在广西产砖茶中分离鉴定出的"金花菌"假灰绿曲霉为国内首次报道。通过比较,将过去湖南产砖茶中广泛报道的"金花菌"冠突散囊菌修订为冠突曲霉A.cristatus。黑茶茶砖中"金花菌"的分离与鉴定对于黑茶品种的鉴别和质量评价具有重要指导意义。

人工沉香中白木香酸与浸出物含量的相关性

目的：建立高效液相色谱法测定人工沉香中白木香酸含量的方法,研究其白木香酸与浸出物含量之间的相关性。方法：按2015年版《中国药典》一部进行醇溶性浸出物的含量测定;采用CNW Athena C18-WP色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液（40∶60）,流速1.0 m L·min^-1,检测波长217 nm,柱温35℃。结果：白木香酸线性范围0.24-24 mg·L^-1（r=0.999 7）,精密度（RSD）0.4%,24 h内稳定性RSD 0.9%,白木香酸的平均质量分数为27.86μg·g^-1,平均回收率96.4%,RSD 2.8%。结论：高效液相法可准确测定人工沉香中白木香酸的含量,所选结香方式中综合法的白木香酸平均含量最高,且白木香酸的含量随着浸出物含量的增加而增加,结合白木香酸与浸出物含量的相关性,可为人工沉香的质量评价提供依据。

天然沉香中白木香酸含量的高效液相色谱法测定

目的建立天然沉香中白木香酸含量的分析方法,研究白木香酸与浸出物含量(%)之间的相关性。方法按《中国药典》(2010年版)一部进行醇溶性浸出物的含量测定和理化鉴别。高效液相色谱法采用CNW Athena C_(18)-WP柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)磷酸水溶液(40∶60)为流动相,流速1.0ml·min^(-1),检测波长217nm,柱温35℃。结果白木香酸在2.000~80.00μg·ml^(-1)(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为96.1%,RSD为3.0%(n=6)。在理化鉴别和浸出物含量合格的情况下,天然沉香中白木香酸与浸出物含量之间呈正比关系。结论高效液相色谱法可准确测定天然沉香中白木香酸的含量,结合白木香酸与浸出物含量之间的相关性,为天然沉香的质量评价提供依据。

深红虫草高产卵孢菌素的培养基筛选及发酵条件优化

本研究以提高深红虫草Cordyceps cardinalis C033次级代谢产物卵孢菌素的产量为目标,对其产卵孢菌素的培养基进行筛选,并利用单因素和正交试验对深红虫草产卵孢菌素的发酵条件进行了优化。结果表明,深红虫草产卵孢菌素的最适发酵培养基为马铃薯‐蛋白胨‐葡萄糖培养基,最佳发酵参数为:发酵时间6d,培养基初始p H 7.0,接种量6%,培养温度24℃,每500m L锥形瓶装液量100m L,摇瓶转速120r/min。用最佳培养基进行发酵条件优化后获得卵孢菌素448.70μg/m L,产量是优化前的10.14倍。该研究结果为菌株C033在农业害虫防治上的应用奠定了基础。