果糖-1,6-二磷酸酶1抑制肝癌细胞株HepG2的自噬及增殖

目的构建果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)重组腺病毒,并探究FBP1对肝癌细胞(HepG2)自噬及增殖的影响。方法PCR扩增FBP1cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAdTrack-TO4,构建重组腺病毒质粒pAdTrack-FBP1,将重组腺病毒质粒用Lipofectamine3000转染至HEK293细胞中,包装、扩增获得高滴度重组腺病毒AdFBP1。用重组腺病毒AdFBP1感染HepG2细胞,同时设置Mock组和AdGFP组。通过Westernblot技术和激光共聚焦技术观察FBP1对肝癌细胞自噬水平的影响,进一步通过克隆形成实验和MTS实验观察FBP1对肝癌细胞增殖能力的影响。组间均数比较采用t检验、单因素方差分析。结果成功构建高滴度重组腺病毒FBP1。Westernblot和激光共聚焦检测结果显示,与AdGFP组相比,AdFBP1组自噬水平明显降低。Westernblot结果表明,AdGFP组的LC3Ⅱ蛋白相对表达水平为1.10±0.10,AdFBP1组的为0.30±0.01,F=90.36,P<0.01。激光共聚焦结果表明,AdGFP组肝癌细胞的平均自噬体数量为(28.33±1.53)个,AdFBP1组的为(12.33±1.53)个,F=97.40,P<0.01。另外,克隆形成实验和MTS实验结果显示,与AdGFP组相比,AdFBP1组肝癌细胞的增殖明显受到抑制。克隆形成实验结果表明,AdGFP组的细胞克隆为(65.66±2.57)个,AdFBP1组的细胞克隆为(34.00±2.00)个,F=141.50,P<0.01。MTS实验结果表明,AdGFP组96h的吸光度值为39.13±2.21,AdFBP1组在96h的吸光度值为30.61±3.33,F=7.80,P<0.05。结论FBP1抑制肝癌细胞HepG2的自噬及增殖。

葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基通过诱导细胞周期阻滞抑制肝癌细胞增殖

目的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)重组腺病毒,探究G6PC对肝癌细胞增殖及细胞周期调控的影响。方法构建重组腺病毒AdG6PC,将Huh7细胞及SK-Hep1细胞设为Mock组、AdGFP组、AdG6PC组。采用细胞增殖实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增殖的影响,transwell实验及划痕实验观察其对肝癌细胞侵袭和迁移的影响,细胞周期流式分析过表达G6PC对肝癌细胞增殖周期的影响,蛋白质印迹法检测过表达G6PC对肝癌细胞周期蛋白表达的影响。结果成功构建重组腺病毒AdG6PC。Huh7细胞及SK-Hep1细胞增殖实验示AdG6PC组增殖细胞数明显低于其他2组(P<0.05),克隆形成实验显示AdG6PC组的克隆数明显少于其他2组(P<0.05),说明肝癌细胞中过表达G6PC可明显抑制肝癌细胞的增殖能力;transwell实验结果表明细胞AdG6PC组细胞迁移数明显少于其他2组(P<0.05),划痕实验结果显示AdG6PC组划痕修复率明显低于其他2组(P<0.05),说明过表达G6PC可明显抑制肝癌细胞侵袭和迁移。细胞周期流式分析表明,过表达G6PC显著抑制huh7细胞的G1/S期的转变。蛋白质印迹法结果示过表达G6PC可下调细胞增殖周期相关蛋白的表达。结论G6PC通过抑制肝癌细胞周期G1/S期转换及相关周期蛋白的表达抑制肝癌细胞增殖,同时G6PC也可抑制肝癌细胞迁移。