鸭坦布苏病毒NS3蛋白的原核表达及其多克隆抗血清的制备

【目的】利用原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的NS3蛋白,并以此制备鼠抗NS3蛋白的多克隆抗血清。【方法】利用PCR扩增鸭坦布苏病毒CQW1株NS3基因片段,然后将其克隆到pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET-28a(+)-NS3。将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,筛选获得阳性重组菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot试验表明重组NS3蛋白在BL21细胞中成功表达,将重组NS3蛋白切胶纯化后免疫小鼠后收获抗血清。【结果】经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,多克隆抗血清可识别病毒感染细胞过程产生的NS3蛋白和真核表达的NS3蛋白,具有良好的反应性和特异性。【结论】成功制备的DTMUV NS3蛋白的鼠源多克隆血清,将为鸭坦布苏病毒的临床检测和NS3蛋白功能性研究奠定基础。