Snail1/IGF-1信号通路介导高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT

目的:观察高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E中锌指转录因子Snail1和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的表达变化,并初步探讨Snail1与IGF-1在糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease,DKD)上皮-间充质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)过程中的关系。方法:高糖培养大鼠近端肾小管上皮细胞系NRK-52E 72 h后,给予Snail1 siRNA和IGF-1 siRNA处理,分为高糖组、non-targeting(NT)siRNA组、Snail1 RNAi组和IGF-1 RNAi组,并设置对照组。于转染后48和72 h两个时点收获细胞。分别用实时荧光定量PCR检测细胞Snail1、IGF-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的mRNA表达,用免疫荧光方法检测各蛋白的表达。结果:高糖诱导NRK-52E细胞E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),FN的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01);同时,Snail1和IGF-1的mRNA和蛋白表达也明显升高(P<0.01)。Snail1 RNAi组与高糖组比较,细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),FN、Snail1和IGF-1的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),Snail1的mRNA表达减少62.8%。与高糖组比较,IGF-1 RNAi组细胞IGF-1的mRNA表达减少61.1%,E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01),FN的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01)。NT组E-cadherin、FN、Snail1及IGF-1的mRNA和蛋白表达与高糖组比较差异无统计学显著性。Pearson相关性分析显示,NRK-52E细胞中Snail1与IGF-1蛋白的表达呈显著正相关(r=0.852,P<0.01)。结论:Snail1及IGF-1的mRNA和蛋白在高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT过程中表达升高,且沉默Snail1基因,IGF-1表达随之减少,提示Snail1/IGF-1可能促进DKD时肾小管上皮细胞EMT。

高糖诱导肾小管上皮细胞发生上皮-间质转化过程中Snail 1对IGF-1表达的影响

目的研究锌指转录因子1(Snail 1)对高糖诱导的发生上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)表达的影响,探讨糖尿病肾脏病发生机制及Snail 1与自分泌IGF-1的相关性。方法大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E),分组如下:对照组、高糖组、高糖+NT组、高糖+siRNA组。分别于培养48 h、72 h收获细胞。用免疫荧光、原位杂交等方法检测细胞Snail 1、IGF-1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)mRNA及蛋白的表达。结果与对照组相比,高糖组细胞IGF-1、Snail 1和FN的mRNA及蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。E-cadherin的mRNA及蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组相比,高糖+siRNA组细胞IGF-1、Snail 1和FN的mRNA及蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),E-cadherin的mRNA及蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组相比,高糖+NT组IGF-1、Snail 1、E-cadherin和FN的mRNA及蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman's相关性分析显示,NRK-52E细胞中Snail 1与IGF-1蛋白的表达呈正相关(r=0.936,P<0.05)。结论高糖诱导肾小管上皮细胞发生EMT的过程中Snail 1可能通过调节IGF-1促进糖尿病肾脏病肾脏纤维化。

褪黑素通过HIF-1α/VEGF信号通路减轻急性肾损伤的研究

目的 探讨脂多糖（LPS）诱导的急性肾损伤中低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及褪黑素（Mel）对其表达的影响。方法 选取3~5周龄的30只Sprague-Dawley（SD）大鼠作为研究对象,随机分为对照组（n=10）、LPS组（n=10,静脉注射500μg/kg LPS）、Mel＋LPS组（n=10,注射LPS之前15 min给予Mel）。48 h后采用TBA法检测肾组织的丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,分别用RT-q PCR和免疫组化检测HIF-1α、VEGF m RNA和蛋白表达水平。结果 LPS组肾小管上皮细胞肿胀、肾间质水肿,有炎细胞浸润;Mel＋LPS组的上述表现明显减轻。LPS组血清BUN和Scr含量[（35.56±1.83）mmol/L和（46.23±2.87）μmol/L]显著高于对照组[（12.69±0.97）mmol/L和（16.73±1.26）μmol/L]以及Mel＋LPS组[（23.17±1.33）mmol/L和（35.67±2.25）μmol/L]（P〈0.05）。LPS组小鼠肾组织的MDA水平[（697.45±43.13）nmol/（mg·prot）]与对照组[（354.35±28.12）nmol/（mg·prot）]比较急剧增高（P〈0.05）,Mel＋LPS组的MDA[（455.37±30.79）nmol/（mg·prot）]与LPS组比较则明显降低（P〈0.05）。LPS组小鼠肾组织的SOD水平[（3.75±0.23）U/（mg·prot）]与对照组[（2.93±0.29）U/（mg·prot）]比较急剧降低（P〈0.05）,Mel＋LPS组的SOD水平[（3.20±0.27）U/（mg·prot）]与LPS组比较明显增高（P〈0.05）。LPS组小鼠肾组织的HIF-1α、VEGF m RNA和蛋白水平与对照组相比急剧增高（P〈0.05）,Mel＋LPS组与LPS组比较明显降低（P〈0.05）。结论 Mel通过抑制MDA的产生和上调SOD的活性,调控HIF-1α和VEGF的表达,起到了保护LPS诱导的急性肾损伤（AKI）肾脏功能的作用。