非NMDA受体参与双相呼气和吸气神经元电活动的调节

在新生大鼠延髓脑片上同步记录舌下神经根和双相呼气神经元 /吸气神经元单位的放电活动 ,并在灌流的改良Kreb′s液中先后加以非NMDA受体的激动剂KA和拮抗剂DNQX ,观察对神经元单位放电的影响 ,以进一步探讨非NMDA受体在对双相呼气神经元之间交互兴奋和吸气神经元兴奋性突触输入中的作用。结果表明 ,使用非NMDA受体激动剂KA以后 ,双相呼气神经元的放电频率和峰频率都明显增大 ,吸气神经元中期放电的频率和峰频率也显著增大 ,而早期和晚期放电的频率无明显改变 ;用相应拮抗剂以后 ,上述效应明显被抑制。结果提示 ,非NMDA受体参与了双相呼气神经元之间的交互兴奋作用 。

新生大鼠延髓脑片吸气神经元的分类和分布

目的 探讨新生大鼠延髓脑片上吸气神经元的类别及相应的分布情况。方法 制作新生大鼠离体延髓脑片，以舌下神经根放电活动作为呼吸活动的指标，同步记录吸气神经元单位的放电活动，并对照舌下神经放电的时相关系进行分类。结果 在延髓腹外侧区，共记录到吸气神经元245个，根据它们的放电特征可分为前吸气神经元、早吸气和晚吸气神经元3种亚型；它们在面神经核尾端和侧网状核之间沿疑核呈混杂分布，各亚型之间无明显的分布优势。结论 新生大鼠延髓脑片上存在多种具有不同放电形式的吸气神经元，它们在延髓内呈混杂分布，其中前吸气神经元总是在舌下神经吸气性放电之前发放并持续到吸气活动结束，可能在基本呼吸节律发生中起重要作用。

NMDA与非NMDA受体激动剂对新生大鼠延髓脑片呼吸节律性放电的作用

目的 :探讨N 甲基 D 天门冬氨酸 (NMDA)和非NMDA类受体在基本呼吸节律发生和调节中的可能作用。方法 :以改良的Kreb’s液灌流新生SD大鼠离体延髓脑片 ,记录与之相连的舌下神经的呼吸节律性放电活动 (respi ratoryrhythmicaldischargeactivity ,RRDA) ,在灌流中给予兴奋性氨基酸类递质及相应的拮抗剂 ,观察其对RRDA的影响。结果 :使用非NMDA受体激动剂海人酸 (KA)后 ,可见呼吸周期及呼气时间有所延长 ,NMDA受体激动剂NMDA对呼吸活动则没有明显影响 ;相应的拮抗剂 6 氰基 7 硝基喹恶啉土卫四 (DNQX)和 2 氨基磷酸戊酸 (AP5 )均可使放电频率和积分幅值明显降低 ,吸气时间显著缩短 ,但DNQX同时可致呼吸周期和呼气时间明显缩短。结论 :在哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中 ,NMDA类受体主要对呼吸活动的强度产生调节作用 ;而非NMDA类受体不仅可以影响呼吸的强度 。

N-甲基-D-天门冬氨酸和非N-甲基-D-天门冬氨酸类受体在新生大鼠延髓脑片呼吸节律性放电中的作用

目的 探讨Ｎ－基－Ｄ－天门冬氨酸（Ｎ-methyl-Ｄ-aspartate,ＮＭＤＡ）和非ＮＭＤＡ类受体在基本呼吸节律发生和调 节中的作用。方法 在新生ＳＤ大鼠离休延髓脑片上记录舌下神经的呼吸节律性放电活动，在改良的Krebs液中加入兴 奋性氨基酸类递质及相应的拮抗剂，观察其ＲＲＤＡ的影响。结果 使用非ＮＭＤＡ受体激动剂海人酸（Kainic acid.ＫＡ） 后，可见呼吸周期及呼气时间有所延长， ＮＭＤＡ受体激动剂对呼吸活动则没有明显影响（Ｐ＞０．１）；相应的拮抗剂６－氰基 －７－硝基喹恶啉土卫四（６，７-dinitroquinoxaline-2,3-dione,ＤＮＱＸ）和２－氨基磷酸戊酸（D-２-amino-5-phosphonopentanoic, ＡＰ5）均可使放电频率和积分幅值明显降低吸气时间显著缩短（Ｐ＜０.０１），ＤＮＱＸ同时可致呼吸周期和呼气时间明显缩短 （Ｐ＜０．０５）。结论 在哺乳动物基本呼吸节律的产生和调节中，ＮＭＤＡ类受体主要对呼吸活动的强度产生调节作用；而非 ＮＭＤＡ类受体不仅可以影响呼吸的强度，同时对呼吸的频率也发挥调节作用。

过氧亚硝酸阴离子(ONOO^-)引起小动脉反应性下降

目的探讨过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)在调节小动脉反应性中的可能作用以及相关机制。方法用180～220g雄性SD大鼠分成20μm、50μm、100μmONOO-滴流组 ,对照组分别使用50μmONOO -分解体以及Kreb's液滴流。用Kreb's液在灌流前将ONOO-稀释成所需的终浓度并观察ONOO-对A3 级小动脉反应性的影响 ,以能够引起A 3 级动脉血流停滞的去甲肾上脉素(NE)溶液的最低浓度(取负对数)表示血管的反应性(数值的大小与血管反应性的高低成正相关)。结果20μm组ONOO-滴流10、20min时与Kreb's液比较有显著差异(P<0.05) ,滴流40min时有非常显著差异(P<0.01)。50μm和100μmONOO-滴流10、20、40min与Kreb's液比较均有非常显著差异(P<0.01)。结论ONOO-能够明显降低小动脉对NE的反应性 。

复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外溶栓的作用

目的:研究复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外溶栓的作用。方法:用动-静脉旁路血栓形成法和体外恒温自然溶解法,测定复方血栓通滴丸对大鼠体内血栓形成和体外血凝块溶解作用的影响。结果:复方血栓通滴丸各剂量组对体外血凝块有显著的溶解作用,对体内血栓形成有明显的抑制作用。结论:复方血栓通滴丸具有显著抑制体内血栓形成和溶解血栓的作用。

SOD与NaHCO_3对重症失血性休克低血管反应性的影响

目的 探讨超氧化物岐化酶(SOD)和NaHCO3治疗重症失血性休克低血管反应性的效果。方法 将28只重症失血性休克SD大鼠随机均分为SOD组、NaHCO3组、SOD+NaHCO33个治疗组以及1个对照组，分别观察用药后各组大鼠的血管反应性、血压、微动脉血流量和24h存活率。结果 休克2h后，各组动物微血管对去甲肾上腺素(NE)的反应性显著减低，NE阈值比失血前提高24-27倍。复苏治疗2h后，3个治疗组血管反应性都有回升，其中以SOD+NaHCO3组效果最显著，NE阈值下降至失血前的4．7倍。此外，给SOD+NaHCO3后再给多巴胺的升压效应最为显著，是对照组的1．9倍，且在回输血液后动物血压稳定在13.33kPa以上；治疗2h后，微动脉血流量是对照组的2．54倍，动物存活时间比对照组延长2．9倍。结论 SOD和NaHCO3对重症失血性休克大鼠的血管低反应性有恢复作用；先给SOD+NaHCO3再给升压药物(多巴胺)可明显稳定提升动物血压，并提高动物存活率，提示SOD+碱可能是治疗重症失血性休克低血管反应性的一种新的治疗方法。

KCNE2对Kv4.3通道功能的调节作用

目的研究KCNE2对人类心肌细胞瞬间外向钾电流的主要α亚基-Kv4.3功能的调节。方法通过基因转染技术将Kv4.3或Kv4.3与KCNE2cDNA转入COS-7细胞株,采用膜片钳全细胞记录方式记录通道电流。结果KCNE2对Kv4.3功能有明显调控作用:减小Kv4.3通道电流密度;Kv4.3单独表达组通道电流密度为375.13±112.87pA/pF(n=11),KCNE2与Kv4.3共表达组电流密度为152.96±33.71pA/pF(n=16);减慢Kv4.3通道激活和衰减,在+60mV电压刺激下通道激活达峰值的时间由4.82±0.32ms(n=11)延长至20.41±2.13ms(n=16),P<0.05;通道电压依赖性失活发生正向移位,半数失活电压由-53.62±1.24mV(n=8)移至-46.58±1.6mV(n=10);通道从失活中恢复的速度加快,恢复时间常数由193.43±17.98ms缩短137.71±18.29ms,(n=7,P<0.05)。结论KCNE2可能作为人类心肌细胞膜Kv4.3钾离子通道一个重要的辅助亚基-β亚基参与Ito通道功能的调节。

大鼠肠系膜细动脉血管平滑肌大电导钙激活钾通道的特性

目的探讨肠系膜细动脉血管平滑肌细胞膜上大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel, BKCa)的电生理特性及其与张力调节的可能机制。方法木瓜酶、胶原酶两步消化法急性分离大鼠肠系膜细动脉血管平滑肌细胞,膜片钳的内面向外式记录法记录BKCa。结果(1)在浴槽液和电极液均为高钾的条件下,BKCa通道的单通道电导为(221±6)pS,反转电位为-0.12 mV;(2)BKCa通道的电流幅度无细胞内钙依赖性,而开放概率(NPo)则同时具有电压依赖性和细胞内钙依赖性。在细胞内钙浓度为0.1 μmol/L时, 使NPo增加e倍的电压增加为(13±1)mV, 达到最大开放概率一半的电压(V1/2)为(22±2)mV;(3)在细胞内钙浓度为1 μmol/L时,可记录到通道长时间的关闭和失活现象,这种现象称为钙依赖性失活。结论肠系膜细动脉血管平滑肌细胞膜上的BKCa具有大电导、高钾选择性、强电压依赖性和高度的细胞内钙敏感性。BKCa高度的钙敏感性可能与血管平滑肌病理情况下的代偿调节有关。

KCNE2的两种突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的调节

Mink相关蛋白1(MiRP1)是由KCNE基因家族成员KCNE2编码的具有一个跨膜结构的小分子蛋白质,发生在KCNE2上的相关突变能够引起遗传性长QT间期综合症(long QT syndrome,LQT6),但其机制不明.以往的工作表明,MiRP1调节瞬间外向钾电流(transient outward current,Ito)的功能,对维持心电稳定性具有重要的调节作用.在哺乳细胞系COS-7表达系统利用膜片钳全细胞记录方式,研究了两种LQT6相关的突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的影响,从MiRP1对Ito功能调控的改变探讨LQT6引起心律失常的电生理机制.结果表明,KCNE2与Kv4.3共表达后对通道功能具有明显的调控作用,使通道的激活和失活明显减慢,电压依赖性失活发生正向移位,同时加快Kv4.3通道从失活中的恢复.I57T与Kv4.3共表达的通道,门控动力学以及通道的恢复特性更接近Kv4.3单独表达的通道,表现为丧失KCNE2的功能——"loss of function",而V65M的作用则与之刚好相反,对Kv4.3门控动力学和恢复特性的调节较KCNE2更强,同时,使通道电流密度明显降低,表现为增强KCNE2的功能——"gain of function".由此推论,KCNE2对Ito功能有重要的调节作用,发生在KCNE2基因上的突变,无论是增强(V65M)还是减弱(I57T)KCNE2的功能都可能通过改变Ito在心脏电稳定性中的贡献,从而使心脏在某些条件下发生心律失常.

呼气神经元在新生大鼠延髓脑片的分类和分布

目的:探讨新生大鼠延髓脑片上呼气神经元的类别及相应的分布情况.方法:制作新生大鼠离体延髓脑片,以舌下神经根放电活动作为呼吸活动的指标,同步记录呼气神经元单位的放电活动,并对照舌下神经放电的时相关系对神经元进行分类.结果:在延髓腹外侧区,共记录到呼气神经元81个,根据它们的放电特征可分为双相呼气神经元(22个)、全呼气(24个)和晚呼气神经元(35个)3种亚型;它们在面神经核尾端和侧网状核之间沿疑核呈混杂分布,各亚型之间无明显的分布优势.结论:新生大鼠延髓脑片上存在3种具有不同放电形式的呼气神经元,它们在延髓内成混杂分布,其中双相呼气神经元总是在舌下神经吸气性放电,与成年动物延髓内的前吸气神经元活动比较类似,可能在基本呼吸节律发生中起重要作用.

钙激活钾通道在重症失血性休克血管反应性下降中的作用

目的探讨大电导钙激活钾通道(largeconductancecalci um_activatedpotassiumchannel,BKCa)在重症失血性休克中的变化及其特异性阻断剂charybodotoxin(CTX)对休克血管反应性的恢复作用。方法1.复制大鼠重症失血性休克模型 ,分离一侧股静脉用以测量血压和放血 ;2.酶法分离出单个肠系膜A2、A3血管平滑肌细胞 ;3.应用膜片钳的细胞贴附式记录法记录休克组及假手术组大电导钙激活钾通道电流变化 ,并用 pClamp7.0软件对所记录通道的相关数据进行分析和处理 ;4.整体动物静脉给药比较观察生理盐水和CTX对休克动物平均动脉压(MAP)的影响及对去甲肾上腺素(NE)升压作用的影响 ,并计算对比休克动物24h存活率和平均存活时间的变化。结果大鼠重症失血性休克后BKCa 异常激活 ,在高钾细胞外液中 ,单通道电导由对照组的(131±4)pS(n=52)增加为休克时的(172±6)pS(n=38,P<0.01) ;通道的开放概率(Po)在膜电位为20、40和60mV时 ,比正常组增加 ,但没有显著意义(P>0.05) ,而随着膜电位的增加 ,休克组开放概率的增加速率明显大于对照组(使Po增加e倍的电压增幅由14mV降为11mV) ,当膜电位去极化为80和100mV时 ,Po分别由对照组的(15.5±2.8) %和(19.6±3.8) %增加为休克组的(21.2±2.6) %(P<0.05)和(30.3±3.4) %(P<0.01)。

平滑肌大电导钙激活钾通道在重症失血性休克细胞膜超极化中的作用

目的 探讨失血性休克后大鼠肠系膜细动脉血管平滑肌细胞膜电位和大电导钙激活钾通道 (BKCa)的变化。 方法 (1)将Wistar大鼠分为假手术组和休克组。复制失血性休克模型 ,假手术组只做手术 ,不放血 ;(2 )急性分离大鼠肠系膜A2、A3动脉 ,链霉蛋白酶法急性分离血管平滑肌细胞 ;(3)用膜片钳的细胞贴附式和内面向外式记录法记录假手术组和休克组细胞膜电位和通道的变化。 结果 (1)失血性休克 2h后血管平滑肌细胞膜电位由正常的 - 4 1mV变化为- 6 5mV ;(2 )休克后BKCa开放概率增加 ,反转电位明显改变 ,而单通道电导没有变化。 结论 失血性休克后血管平滑肌细胞膜超极化 ,BKCa活动增加可能是导致膜超极化的主要原因。

肾上腺素能受体在脑胶质瘤发生和发展中作用的研究进展

脑胶质瘤是侵袭能力极强的恶性肿瘤,目前治疗策略主要是手术治疗辅助放射治疗、化学治疗和免疫治疗等多种治疗,但疗效有限。肾上腺素能受体(adrenergic receptor, AR)是体内一种重要的应激激素受体,AR通过激活下游不同信号转导通路广泛参与调节多种肿瘤的发生与发展进程。最近研究显示,AR在脑胶质瘤细胞以及组织中表达失调,在脑胶质瘤的发生、侵袭和转移等一系列生物学行为中发挥着重要作用。本文对近年来AR在脑胶质瘤发生和发展中的研究进展进行综述,为以AR为靶点的脑胶质瘤的预防和治疗提供理论依据。

临界期双酚A暴露对中枢神经系统神经细胞的影响

双酚A(bisphenol A,BPA)是一种代表性的环境雌激素,其广泛使用所造成的严重危害越来越引起人们的关注。双酚A主要通过结合雌激素受体来干扰内源性雌激素的正常生理功能。大量研究结果表明,大脑发育关键期双酚A暴露不仅会影响神经干细胞的增殖,还会对其树突发育造成不可逆的危害;同时,在一定程度上影响少突胶质细胞、星型胶质细胞等神经胶质细胞的发育及功能。因此,深入探究临界期双酚A暴露对神经系统的影响及其具体的分子机制十分必要。