狐狸大肠杆菌病的诊断

2018年4月在抚宁区某狐狸养殖场发生一起传染病,发病狐狸临床症状主要表现为精神沉郁,少食或不食,被毛粗乱无光泽,脱水,肛门周围被稀便污染,排灰白色或黄绿色的粪便,有的粪便含有黏液或血液。病理剖检主要表现为肝脏肿大,有坏死灶。脾脏肿大,肺脏出血,肾脏肿大,表面有出血点。胸腺出血,肠道卡他性炎症。根据临床症状观察、病理解剖、生化试验、16srRNA扩增等一系列手段诊断出该养殖场狐狸患的是大肠杆菌病。

两电平逆变器特定谐波消除的实时求解算法

开关角度的实时求解是特定谐波消除技术应用于工程实际的难点所在。本文提出了一种适用于微控制器的两电平逆变器消谐方程组实时求解算法。该算法分为离线转化和在线求解两个阶段。离线转化阶段,使用对称多项式和Groebner基理论将消谐方程组等价转化为一元高阶方程和线性方程组,并将此线性方程组存入微控制器;在线求解阶段根据输入调制比,求出线性方程组的数值解,并以此为系数构造一元高阶方程,使用Sturm定理隔离出一元高阶方程各个实根所在的区间,进而对每个区间使用弦截法求出所包含的精确实根。与传统数值法相比,此算法在STM32F407中的计算效率提高20倍。基于本文所提出的实时求解算法搭建了两电平逆变器实验平台进行验证,实验结果证明了此算法的有效性。

一例奶牛卵巢囊肿病的诊断

卵巢囊肿是一种繁殖障碍性疾病．严重影响着奶牛的繁殖性能。近年来，随着我国奶牛养殖业的迅猛发展，奶牛的繁殖障碍性疾病的发生也越来越严重。根据有关研究，我国每年因繁殖障碍而淘汰的奶牛数占总淘汰数60％-80％，造成巨大的经济损失。现将一例发生在本区的奶牛卵巢囊肿病的诊断与治疗介绍如下。

蟾毒灵诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的蛋白组学研究

目的:该文通过考察蟾毒灵(bufalin)处理人宫颈癌HeLa细胞株后对细胞蛋白质表达谱的影响,寻找蟾毒灵在HeLa细胞中的可能作用靶点。方法:通过MTT检测细胞活性确定蟾毒灵的IC50,并通过流式细胞术和Hoechst 33342染色检测蟾毒灵诱导细胞凋亡。应用蛋白质组学技术寻找差异表达蛋白点并进行鉴定,用Western blotting试验进行确认。结果:蟾毒灵具有较强的细胞毒作用,IC50(154±21.5)nmol.L-1,可以诱导HeLa细胞发生凋亡。蛋白组学的结果显示蟾毒灵处理组与对照组相比有11个差异表达蛋白,其中9个蛋白点发生了下调;2个蛋白发生了上调。这些蛋白可能是蟾毒灵在HeLa细胞中的作用靶点。Western blotting分析显示heat shock protein 27,vimentin,HNRPK在蟾毒灵处理后的表达调节结果与双向电泳的结果吻合。结论:蟾毒灵可以诱导人宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,其凋亡诱导作用可能是多个靶点蛋白共同参与的结果。

人蛋白酶体亚基PSMB1的重组表达、纯化及在蛋白酶体抑制剂体外筛选中的应用

蛋白酶体是真核细胞中的一类多亚基蛋白酶复合物,它在胞内蛋白质降解的泛素-蛋白酶体通路中起关键作用。重组表达蛋白酶体的活性亚基可以用于在体外筛选、寻找具有蛋白酶体抑制剂作用的化合物。将人蛋白酶体催化亚基(PSMB1)cDNA的编码区(全长726 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pET28a-PSMB1,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过1 mmol/L IPTG,20℃过夜诱导,获得相对分子量约为27 kDa的重组蛋白,采用IMAC亲和层析柱纯化重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度超过95%。重组蛋白酶解后经NanoLC-MS/MS鉴定表明所表达的融合蛋白氨基酸序列完全正确。在体外BIAcore分析中,重组蛋白表现出对不同化合物的选择性结合能力,其中与蛋白酶体抑制剂雷公藤红素的结合较强,10μmol/L的雷公藤红素与重组蛋白的结合达到27 RU,并且具有良好的浓度依赖型。本研究建立了表达、纯化人蛋白酶体催化亚基PSMB1的方法,并应用于具有蛋白酶体抑制活性化合物的体外筛选。

坝上长尾鸡胚胎期肌纤维生长发育规律的研究

为了研究坝上长尾鸡胚胎期肌纤维的生长发育规律,试验选取孵化至第6~21天的鸡胚胸肌和腿肌制作石蜡切片,显微镜下测定不同时期肌纤维直径和肌纤维密度,对比胸肌、腿肌的发育程度,并取第1,7,14日龄雏鸡胸肌、腿肌制作涂片观察肌节发育情况。结果表明：从孵化的第6胚龄开始,成肌细胞逐渐融合成肌纤维;从孵化的第14胚龄开始,胸肌和腿肌肌纤维直径逐渐增加,肌纤维密度逐渐降低,腿肌发育更快;而对比观察1,7,14日龄雏鸡的胸肌、腿肌涂片发现,肌组织发育过程中的肌纤维数目不变,主要表现为肌节长度增长和直径变大,其腿肌发育比胸肌快。

犬细小病毒VP2主要抗原表位基因的密码子优化及原核表达

为了制备大量廉价的可溶性犬细小病毒（CPV）VP2蛋白抗原,试验截选了VP2抗原表位集中的基因片段VP2-70进行密码子优化及合成,将合成基因克隆到pET-32a（＋）载体中,构建原核表达载体pET-32-VP2-70,转化BL21（DE3）工程菌,IPTG诱导表达后进行Ni-NTA亲和层析纯化,Western-blot检测验证其生物学活性。结果表明：试验构建的VP2-70表达载体能够介导VP2-70融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,表达量高出野生型VP2-70融合蛋白16 mg/L;Western-blot检测显示,该蛋白具有很好的免疫反应原性,可为CPV亚单位疫苗和免疫学诊断方法的研究提供候选抗原。