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小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用(英文) 被引量:8
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作者 邱昕 潘纪安 +2 位作者 陈宇 张苏明 郭德银 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期801-805,共5页
目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法该研究将设计好的一对寡核甘酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带两个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFP-APP重组质粒。利用EGFP作为报... 目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法该研究将设计好的一对寡核甘酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带两个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFP-APP重组质粒。利用EGFP作为报告基因,在COS-7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFP-APP的重组质粒来观察沉默效应。结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。 展开更多
关键词 淀粉样前体蛋白 增强型绿色荧光蛋白 小干扰RNA 人淀粉样前体蛋白基因
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细胞内表达的小干扰RNA靶向丙肝病毒5′保守区的研究 被引量:3
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作者 吴叔文 方骢 +2 位作者 潘纪安 田波 郭德银 《中国病毒学》 CSCD 2003年第6期515-518,T001,共5页
将丙型肝炎病毒(HCV)基因组的5′非编码区(5′UTR)插入到报告基因绿色荧光蛋白(eGFP)和荧光素酶(luciferase)的上游,并构建基于Ⅲ型启动子的表达载体,这种载体能产生针对HCV 5′UTR的小干扰RNA。然后将含有HCV 5′UTR的eGFP/luciferase... 将丙型肝炎病毒(HCV)基因组的5′非编码区(5′UTR)插入到报告基因绿色荧光蛋白(eGFP)和荧光素酶(luciferase)的上游,并构建基于Ⅲ型启动子的表达载体,这种载体能产生针对HCV 5′UTR的小干扰RNA。然后将含有HCV 5′UTR的eGFP/luciferase和能产生小干扰RNA的质粒共转染入Hela细胞,通过测定细胞发出的荧光和化学发光强弱来观测抑制效果。实验结果表明,与HCV 5′UTR特异性小干扰RNA表达质粒共转染的细胞无论从定性还是从定量上所测得的荧光和化学发光强度都明显低于阴性对照,且细胞密度经核染色与对照组无明显区别。这揭示了小干扰RNA确实能引起HCV特异基因如5′UTR的沉默,且转染进去的小干扰RNA表达质粒对细胞没有毒害作用。这一工作是通过载体直接在细胞内表达小干扰RNA(siRNA)而不是化学合成的,可以使小干扰RNA在细胞内得到稳定表达,因此本研究设计的siRNA表达载体不仅可以有效沉默HCV 5′UTR,而且该系统可以灵敏地筛选更有效的针对HCV的siRNA,因而这一结果为研究利用RNA干扰进行基因治疗HCV感染做了初步探索。 展开更多
关键词 细胞内表达 靶向 丙肝病毒 小干扰RNA RNA干扰
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RNA干扰对阿尔茨海默病家族性瑞典型APP突变的沉默作用邱
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作者 邱昕 潘纪安 +3 位作者 陈宇 张玮莹 杨华静 张苏明 《神经科学通报》 CSCD 2005年第3期219-223,共5页
目的诱导小干涉RNA (small interference RNA, siRNA )对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用。方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸,构建成内源性表达相应siRNA的质粒,与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-... 目的诱导小干涉RNA (small interference RNA, siRNA )对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用。方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸,构建成内源性表达相应siRNA的质粒,与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-7细胞,利用GFP报告基因来间接观察siRNA对APPswe的沉默作用。结果siRNA可有效地下调突变型APP,相比APPwt而言,针对突变型APP的siRNA对APPswe的沉默作用更强。结论针对APPswe的siRNA可有效地沉默APPswe基因,并有一定的等位基因特异性。因此,针对APPswe的siRNA将在阿尔茨海默病治疗研究领域扮演重要角色。 展开更多
关键词 RNA干扰 阿尔茨海默病 家族性 瑞典型 APP突变 沉默作用 SIRNA AD
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人淀粉样前体蛋白基因与绿色荧光蛋白融合基因筛选系统的建立
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作者 邱昕 潘纪安 +2 位作者 陈宇 张苏明 郭德银 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2005年第5期287-291,共5页
目的构建携带人淀粉样前体蛋白(APP)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体,以利于初步筛选对APPmRNA水平作用的药物。方法将pEGFP质粒和携带野生型APP695亚型的pXCJL经HindⅢ酶切,连接,PCR初筛,酶切鉴定,进一步经测序证实。携带野生型人类APP... 目的构建携带人淀粉样前体蛋白(APP)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体,以利于初步筛选对APPmRNA水平作用的药物。方法将pEGFP质粒和携带野生型APP695亚型的pXCJL经HindⅢ酶切,连接,PCR初筛,酶切鉴定,进一步经测序证实。携带野生型人类APP751亚型cDNA的pCDNA3.1质粒用XbaⅠ酶切,Klenow酶填平,再用HindⅢ酶切,回收APP751片段;质粒EGFP用SmaⅠ和HindⅢ酶切,将目的基因APP751片段与EGFP载体片段连接生成重组质粒,酶切鉴定,测序证实。构建好的重组质粒转染COS-7细胞,观察EGFP的表达情况。结果APP695和APP751重组质粒上的EGFP在COS-7细胞内得以表达。结论构建的APP-EGFP融合基因重组质粒,有助于方便、快速地初筛出作用于APP mRNA水平的药物。 展开更多
关键词 淀粉样前体蛋白 增强型绿色荧光蛋白 ALZHEIMER病
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Induction of Silencing Effect of Swedish Mutant Amyloid Precursor Protein by RNA interference
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作者 邱昕 陈国华 +2 位作者 潘纪安 陈宇 张苏明 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2006年第4期399-401,共3页
Summary: Over-expression of APP and Swedish mutation could cause some familial early onset AD. In this study, a primary screening was conducted of effective small interference RNAs (siRNAs) targeted wild type APP ... Summary: Over-expression of APP and Swedish mutation could cause some familial early onset AD. In this study, a primary screening was conducted of effective small interference RNAs (siRNAs) targeted wild type APP (APPwt) and Swedish mutant APP (APPswe). One siRNA targeting APPwt and the other siRNA targeting APPswe were designed, All these siRNAs were endogenously expressed by siRNAs expressing plasmids, COS-7 cells were transiently co-transfected with APP-GFP recombinant plasmids and siRNA expression vector, The silencing effect of each siRNA was quantitatively assessed by the level of expression of green fluorescent protein (GFP). It was found that the siRNAs silenced APPwt and APPswe to different degrees, siRNA directed against APPswe was more effective in suppressing the expression of fusion gene of APPswe than that of APPwt. The silencing effect of siRNA directed against APPswe indicating allele-specific silencing property of the siRNAs. Therefore, siRNAs directed against APP play an important role both in the therapeutic study of Alzheimer disease and functional exploration ofAPP gene. 展开更多
关键词 amyloid precursor protein small interference RNA wild type APP Swedish mutant APP
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小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用
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作者 邱昕 潘纪安 +1 位作者 陈宇 张苏明 《卒中与神经疾病》 2005年第4期220-223,226,共5页
目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法将设计好的一对寡核苷酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带2个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFPAPP重组质粒;利用EGFP作为报告基因,在C... 目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法将设计好的一对寡核苷酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带2个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFPAPP重组质粒;利用EGFP作为报告基因,在COS7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFPAPP重组质粒来观察沉默效应。结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。 展开更多
关键词 淀粉样前体蛋白 增强型绿色荧光蛋白 小干扰RNA
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