海篷子籽油制备共轭亚油酸及其组分分析

研究海篷子籽油中亚油酸转化制备共轭亚油酸的工艺条件。以海篷子籽油为原料,KOH为催化剂,乙二醇为溶剂,碱异构法转化共轭亚油酸。采用Box-Behnken试验设计,优选海篷子籽油共轭亚油酸的最佳制备技术条件。结果表明海篷子籽油是制备共轭亚油酸的良好原料,所得产品中共轭亚油酸质量分数达87%以上,共轭亚油酸两种活性异构体9c,11t-CLA和10t,12c-CLA质量分数达68%以上。用海篷子籽油制备共轭亚油酸最适条件为:反应温度在180℃,反应时间3.9 h,溶剂用量为油质量的2倍,催化剂用量为籽油质量的25%。本研究所优选的工艺条件可使籽油中亚油酸转化率高达94.6%,所制得的海篷子共轭亚油酸产品的各项理化指标接近食用油标准,工艺条件实际可行,制备的共轭亚油酸产品安全无毒,有望开发成一种高附加值的保健食用油。

miR-155对缺血性脑卒中小鼠内皮祖细胞功能的调节作用

目的探讨mi R-155对缺血性脑卒中小鼠内皮祖细胞(EPCs)功能的影响。方法线栓法建立C57BL6小鼠右侧大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,48 h后提取小鼠EPCs,q RT-PCR检测mi R-155表达;慢病毒感染法沉默EPCs中mi R-155,采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,血管形成检测试剂盒检测细胞血管形成能力。结果与假手术组相比,MCAO组EPCs增殖、迁移及血管形成能力显著减弱,mi R-155表达明显上调;敲减MCAO组EPCs中mi R-155后,EPCs增殖、迁移以及血管形成能力显著增强。结论 mi R-155在缺血性脑卒中小鼠EPCs中异常表达,其缺失促进EPCs增殖、迁移及血管形成。

细胞饥饿及TNF-α干预后内皮细胞膜微粒对人脑微血管内皮细胞的影响

目的探讨饥饿及TNF-α刺激条件下,内皮细胞膜微粒(EMVs)对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)增殖、迁移及血管生成功能的影响。方法体外培养HBMECs,分为PBS组、饥饿组、TNF-α组。于饥饿24 h后提取饥饿后产生的EMVs(s HB-MVs),于TNF-α刺激24 h后提取TNF-α刺激下产生的EMVs(αHB-MVs)。将s HB-MVs与αHB-MVs按照1×108个/m L、每孔10μL分别与饥饿组及TNF-α组HBMECs共培养,PBS组给予10μL PBS处理。采用MTT法测定各组HBMECs增殖能力,倒置显微镜下测定HBMECs迁移距离,观察血管形成数。结果饥饿组增殖能力高于PBS组(P<0.01),TNF-α组HBMECs增殖能力低于PBS组(P<0.01)。饥饿组迁移距离长于PBS组(P<0.05),TNF-α组迁移距离短于PBS组(P<0.01)。饥饿组血管生成数多于PBS组(P<0.01),TNF-α组血管生成数少于PBS组(P<0.01)。结论饥饿刺激下产生的EMVs可促进HBMECs增殖、迁移及血管生成功能,TNF-α刺激下产生的EMVs可抑制HBMECs增殖、迁移及血管生成功能。

末水残次坛紫菜的营养成分及多糖组成分析

为有效利用残次(即末水)坛紫菜资源,采用化学和光谱分析等方法对残次坛紫菜的主要营养成分及多糖组成进行分析。结果表明:与盛产的三水坛紫菜比较,残次坛紫菜粗蛋白(35.30%)、粗脂肪(0.51%)和粗纤维(5.11%)的含量明显增加,而总糖(34.57%)和多糖(20.67%)含量均显著减少,灰分(10.37%)含量变化不大,矿物元素K/Na值为6.3;残次坛紫菜热水提取多糖为单一组分(分子质量28.54kD),其主要由半乳糖(83.12%)、3,6-内醚半乳糖(15.71%)和硫酸基(10.61%)组成。残次坛紫菜是一种高蛋白、高膳食纤维、低脂肪、低热能天然营养保健食品。

龙须菜多糖硫酸化对免疫活性的影响

分别采用改良的氯磺酸-吡啶法和HCl-甲醇法对龙须菜多糖进行硫酸化修饰与脱硫处理,探讨不同硫酸基含量的天然多糖、硫酸化多糖和脱硫多糖对由环磷酰胺引起的免疫力低下小鼠免疫功能的影响。结果表明:与模型组比较,天然多糖对提高小鼠的脾脏指数(P<0.05)、巨噬细胞的吞噬活性(P<0.05)、脾细胞增殖转化能力(P<0.05)、NK细胞杀伤活性(P<0.01)等作用最强,其次是硫酸化多糖,而脱硫多糖作用最弱;这3种多糖都能显著促进免疫抑制小鼠的溶血素和溶血空斑的形成(P<0.01),其中天然多糖和硫酸化多糖优于脱硫多糖。显示龙须菜多糖能显著提高免疫力低下小鼠的免疫功能,但多糖中硫酸基含量与免疫作用非线性关系,增加或脱除天然多糖硫酸基其免疫活性均下降,尤其是脱除硫酸基后免疫活性显著降低。

MicroRNA125a对缺血性脑卒中小鼠内皮祖细胞功能的调节作用

目的探讨microRNA125a对缺血性脑卒中小鼠内皮祖细胞(EPC)功能的调节作用。方法成年C57BL6小鼠60只随机分为大脑中动脉闭塞(MCAO)组和对照组,每组30只。MCAO组小鼠线栓法建立小鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,对照组仅分离血管,不插入线栓。提取对照组与MCAO组小鼠EPC,实时定量反转录聚合酶链反应检测EPC中microRNA125a的表达;慢病毒感染法过表达EPC中microRNA125a(MCAO-过表达microRNA125a组);采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测EPC增殖能力,划痕实验检测EPC迁移能力,血管形成试剂盒检测EPC血管形成能力。结果 MicroRNA125a在MCAO组小鼠EPC中的表达显著低于对照组(P<0.01),MCAO组小鼠EPC的增殖、迁移及血管形成能力显著低于对照组(P<0.05),而MCAO-过表达microRNA125a组小鼠EPC的增殖、迁移及血管形成能力与MCAO组和对照组比较显著增强(P<0.05)。结论MicroRNA125a在缺血性脑卒中小鼠EPC中低表达;MicroRNA125a参与调控EPC的增殖、迁移及血管形成的生理功能,为应用EPC治疗缺血性脑卒中提供新方向。

衰老对内皮细胞膜微粒及内皮细胞功能的影响

目的探讨衰老对内皮细胞膜微粒（EMVs）及内皮细胞功能的影响。方法年轻（yEMVs）和年老EMVs（aEMVs）分别来源于年轻（3-5代）、年老（25-28代）人脑微血管内皮细胞（HBMECs）。年轻与老年HBMECs与yEMVs或aEMVs共培养,检测miR-34a表达、细胞增殖、血管生成能力及活性氧、一氧化氮水平。结果老年HBMECs释放的EMVs中miR-34a表达明显高于年轻HBMECs。aEMVs增加HBMECs表达miR-34a及活性氧生成,但抑制细胞增殖、血管生成及一氧化氮产生;yEMVs则有相反作用。结论衰老引起内皮细胞释放不同EMVs,影响内皮细胞功能,并且可能与EMVs所携带的miR-34a有关。

miR-126对缺血性脑卒中小鼠内皮祖细胞血管形成能力的影响

目的研究mi R-126对缺血性脑卒中小鼠内皮祖细胞(EPCs)血管形成能力的调节作用及机制。方法 10只C57BL6小鼠随机分为右侧大脑中动脉梗塞(MCAO)模型组和假手术组。小鼠骨髓中提取EPCs,血管形成试剂盒检测血管形成能力,q RT-PCR检测mi R-126表达,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)蛋白表达。结果与假手术组相比,MCAO小鼠EPCs血管形成能力及mi R-126、PI3K/Akt表达显著降低(P<0.01或0.05)。在MCAO组EPCs中过表达mi R-126后,血管形成能力及PI3K/Akt表达明显增加(P<0.01),而PI3K抑制剂处理减弱血管形成能力(P<0.01)。结论mi R-126在缺血性脑卒中小鼠EPCs中表达下调,其高表达可通过PI3K/Akt信号通路提高EPCs血管形成能力。

血管紧张素转换酶2在神经系统疾病治疗中的研究进展

神经系统疾病病因复杂,有些甚至尚不清楚发病机制,诊治难度大。血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在机体的心脏、肾脏、胃肠道和大脑中均有表达并参与机体的各项调控。近年来,ACE2在神经系统疾病中的作用也受到越来越多的关注。与此同时,ACE2也被报道与缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)、阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)和SARS-CoV-2颅内感染的发生、发展密切相关。因此,本文将对ACE2与IS、AD和SARS-CoV-2颅内感染的关系及调控机制的进展予以综述,以揭示ACE2作为神经系统疾病诊治的潜在可能性。

高表达miR-132-3p间充质干细胞外泌体对缺氧/复氧受损脑微血管内皮细胞功能的改善作用

目的研究高表达miR-132-3p间充质干细胞(MSCs)释放的外泌体(EXs)对缺氧/复氧(H/R)受损内皮细胞功能的作用。方法原代培养从C57BL/6小鼠骨髓中提取的MSCs,采用装载miR-132-3p载体的慢病毒感染MSCs获得MSC^(miR-132-3p),同时采用装载有scramble序列的对照慢病毒感染MSCs获得MSC^(NC)。分离提取MSC^(NC)及MSC^(miR-132-3p)释放的EXs,分别获得MSC-EXs及MSC-EXs^(miR-132-3p)。将所得EXs与H/R受损小鼠脑微血管内皮细胞(bend3)共培养,根据培养条件将细胞分为正常培养组(细胞正常培养)、H/R组(制作H/R模型)、MSC-EXs处理组(MSC-EXs共培养)、MSC-EXs^(miR-132-3p)处理组(MSC-EXs^(miR-132-3p)共培养)、MSC-EXs^(miR-132-3p)+LY294002组[细胞与MSC-EXs^(miR-132-3p)共培养前加入磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)信号通路阻断剂LY294002(20μmol/L)处理]。实时荧光定量聚合酶链反应检测MSCs、MSC-EXs及bend3细胞中miR-132-3p的表达。血管形成试剂盒检测bend3细胞血管形成能力,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测bend3细胞增殖能力,划痕实验检测bend3细胞迁移能力,hochest33258染色显示细胞的凋亡,Western blot检测蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果与H/R组相比,MSC-EXs处理组显著改善H/R诱导下bend3细胞受损的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平[H/R组分别为(3±1)条、0. 275±0. 020、(147±8)μm和0. 89±0. 12; MSC-EXs处理组分别为(8±3)条、0. 358±0. 030、(218±10)μm和1. 37±0. 25,均P <0. 01],细胞凋亡明显减少[(47±2)%比(63±2)%,均P <0. 01]。与MSC-EXs处理组比较,MSC-EXs^(miR-132-3p)处理组bend3细胞的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平增加[分别为(14±3)条、0. 444±0. 050、(357±10)μm和1. 67±0. 23,均P <0. 01],细胞凋亡明显减少[(34±1)%,P <0. 01]。与MSC-EXs^(miR-132-3p)处理组比较,MSC-EXs^(miR-132-3p)+LY294002组细胞的增殖、迁移、血管形成能力及Akt磷酸化水平明显减少[分别为(5±2)条、0. 304±0. 050、(175±8)μm和0. 95±0. 11,均P <0. 01]。结论高表达miR-132-3p的MSC-EXs能够通过激活PI3K/Akt信号通路改善H/R诱导受损脑血管内皮细胞多种生理功能。

Rab27a基因与外泌体的研究进展

Rab27a基因可通过其编码的蛋白参与T淋巴细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞、胰腺β细胞及造血细胞等的颗粒分泌、运输及胞吐作用,参与白化病、癌症、糖尿病、炎症、血栓形成等疾病的发生发展。另外,Rab27a对外泌体的分泌调控作用也备受关注。本文就Rab27a基因调节外泌体的分泌及其基因修饰的外泌体在治疗炎症损伤、血栓形成及肿瘤等疾病方面的研究现状进行综述。

miR-125a对人脑微血管内皮细胞功能的调节作用

目的探讨miR-125a寸人脑微血管内皮细胞(HBMECs)功能的影响。方法体外培养HBMECs,慢病毒感染法沉默HBMEC中miR-125a,qRT-PCR检测HBMECs中miR-125a表达。在正常条件及低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激条件下,采用MTT法检测HBMEC细胞增殖能力,血管形成检测试剂盒检测细胞血管形成,分别采用衰老试剂盒和流式细胞仪检测细胞的衰老及凋亡。结果在正常及ox-LDL处理条件下,miR-125a敲除均能抑制HBMEC细胞增殖及血管形成能力,促进细胞衰老及凋亡。结论 miR-125a调控生理及病理条件下HBMECs多种功能。

循环细胞膜囊泡中的组织因子在血栓形成中的作用及机制

组织因子(TF)是外源性凝血级联反应的触发因子,在血栓形成中发挥重要的作用。TF主要存在于非血管细胞中,正常情况下在血液中的含量微少不致触发凝血,但在病理状态下则可以大量表达于内皮细胞和单核细胞中。最近,不少学者发现循环细胞膜囊泡(MV)表面富含TF,以其数量多、移行速度快等特性在血栓形成及相关疾病中占据重要的作用。本综述将阐述和总结循环细胞膜囊泡中TF的作用及机制,探讨其在血栓形成及相应疾病中的作用,推测其可能成为评估血栓性疾病发生发展及严重程度的新生物学标志物,有望为相应疾病提供新的治疗靶标。

miR-155低表达内皮祖细胞对缺血性脑卒中小鼠血管再生的影响

目的探讨miR-155低表达内皮祖细胞(EPCs)对缺血性脑卒中小鼠血管再生的影响。方法以线栓法建立C57BL6小鼠右侧大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,提取分离小鼠循环血液及骨髓中EPCs,用流式细胞仪检测循环EPCs水平,qRT-PCR检测循环EPCs中miR-155的表达;体外培养EPCs,以慢病毒感染法沉默EPCs中的miR-155,以MTT法检测EPCs活性;通过尾静脉注射向脑卒中小鼠体内输注EPCs,检测脑微血管密度(CD31+)及用多普勒血流灌注仪检测脑血流灌注。结果与正常小鼠相比,缺血脑卒中小鼠循环EPCs水平显著下降(P<0.01),同时EPCs中miR-155表达水平显著升高(P<0.01);敲减EPCs中的miR-155,可显著增加EPCs的增殖活性(P<0.01);输注miR-155低表达EPCs后,脑缺血区微血管密度显著增加(P<0.01),并增加了缺血区脑血流灌注(P<0.01)。结论缺血性脑卒中病理条件下,EPCs中miR-155表达水平异常。输注miR-155低表达EPCs可以通过增加缺血区血管生成及脑血流灌注改善缺血性脑卒中小鼠缺血损伤。

miR503在缺血性脑卒中患者外周血中的表达

目的通过检测缺血性脑卒中患者与正常对照组外周血中miR503的表达水平,探讨其与缺血性脑卒中的相关性及作为诊疗分子标记的可能性。方法纳入55名缺血性脑卒中患者以及48名健康对照组,收集外周血,提取总miRNA,采用QRT-PCR法检测miR503的表达水平。比较两组外周血中miR503表达水平的差异,进一步在不同病程及中国缺血性卒中分型(CISS)分组中进行比较。结果脑梗死患者外周血中miR503表达水平较健康对照组明显增高(P<0.01);急性期组miR503表达水平显著增加(P<0.01)。根据CISS亚型分组分析比较,大动脉粥样硬化组及心源性卒中组的miR503表达水平明显增高(P<0.01)。结论 miR503在缺血性脑卒中患者外周血中表达异常,明显增高,提示miR503可能与缺血性脑卒中相关。

细胞外泌体及其内容物在缺血性脑卒中中的研究新进展

细胞外泌体能通过传递携带的功能内含物(核糖核酸、蛋白质、脂质体)调控受体细胞功能。在中枢神经系统中,细胞外泌体及其携带的内容物参与维持脑组织微环境稳态及促进脑损伤修复。近年来研究发现脑组织细胞(血管内皮细胞、神经细胞、胶质细胞和干细胞等)外泌体及其携带的内含物通过影响血管和神经功能,以及作为标识物在脑血管疾病尤其是缺血性脑卒中的治疗中发挥重要作用。本综述将阐述细胞外泌体及其携带的内容物在缺血性脑卒中中的研究现状及最新进展,有望为缺血性脑卒中提供新的治疗方案。

缺血性脑卒中外周血miRNA125a-5p的表达水平

目的通过检测缺血性性脑卒中患者与正常对照组患者外周血中mi RNA125a-5p的表达水平,探讨其与与疾病发生的相关性及作为分子标记的可能性。方法该病例对照研究纳入30例有缺血性脑卒中的病例受试者以及26例对照受试者。收集外周血,提取总mi RNA,用QRT-PCR法检测mi R125a-5p表达水平。比较两组外周血中mi R125a-5p表达水平的差异。进一步按照病程、严重程度及OCSP亚型分组进行分析比较。结果脑梗死患者外周血中的mi R125a-5p表达水平较正常对照组外周血的mi R125a-5p明显下降(P<0.001);4个病程中,急性期组mi R125a-5p的表达水平显著降低(P<0.05);从严重程度分析,轻型组中mi R125a-5p的表达水平显著降低(P<0.05);根据OCSP亚型分组分析比较,TACI组的mi R125a-5p明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);PACI组和LACI组mi R125a-5p的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mi R125a-5p在缺血性脑卒中患者外周血中表达异常,明显下降,提示mi R125a-5p可能与缺血性脑卒中相关。

富含miR-132-3p的神经干细胞释放的外泌体激活MEK1/2/-ERK1/2通路改善缺氧无糖诱导的脑微血管内皮细胞损伤

目的研究富含微小核糖核酸(miR)-132-3p的神经干细胞(NSC)释放的外泌体(EX)对缺氧且无糖(OGD)损伤的内皮细胞功能的保护作用。方法利用SPF级C57BL/6新生小鼠20只,原代培养NSC,采用装载miR-132-3p的慢病毒感染NSC获得NSC^(miR-132-3p),同时采用装载Scramble序列的慢病毒感染NSC获得NSC^(NC)。提取NSC^(NC)和NSC^(miR-132-3p)释放的EX,分别获得NSC-EX和NSC-EX^(miR-132-3p)。将EX与OGD受损小鼠脑微血管内皮细胞(mBMEC)共培养,采用血管形成检测试剂盒、CCK8试剂盒、划痕实验、流式细胞技术、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和Western blotting分别检测mBMEC血管形成能力、增殖能力、迁移能力、凋亡、miR-132-3p表达和磷酸化细胞外调节激酶(pERK1/2)水平;丝裂原活化的细胞外信号调节激酶1/2(MEK1/2)通路抑制剂(PD0325901)处理检测MEK1/2-ERK1/2通路对NSC-EX^(miR-132-3p)功能的调控作用。采用Student’st检验法比较上述各指标的组间差异。结果NSC-EX处理显著增加OGD诱导下mBMEC细胞的增殖能力(0.34±0.04vs0.23±0.04)、迁移能力[(238.45±18.72)μmvs(175.38±12.53)μm]、血管形成能力[(9±2)条vs(3±1)条]及ERK1/2磷酸化水平(0.27±0.02vs0.07±0.01),减少细胞凋亡[(22.5±3.1)%vs(35.7±4.7)%],差异均具有统计学意义(t=2.98,P=0.042;t=4.92,P=0.008;t=4.65,P=0.011;t=16.09,P=0.001;t=6.05,P=0.004)。与NSC-EX处理相比,NSC-EX^(miR-132-3p)处理更有效增加mBMEC细胞的增殖能力(0.45±0.06vs0.34±0.04)、迁移能力[(346.51±19.28)μmvs(238.45±18.72)μm]、血管形成能力[(15±3)条vs(9±2)条]、miR-132-3p表达(5.76±0.58vs2.85±0.39)和ERK1/2磷酸化水平(0.47±0.03vs0.27±0.02),减少细胞凋亡[(15.8±2.9)%vs(22.5±3.1)%],差异均具有统计学意义(t=2.97,P=0.041;t=6.27,P=0.003;t=3.05,P=0.038;t=7.16,P=0.002;t=9.69,P=0.001;t=3.06,P=0.04)。PD0325901处理降低NSC-EX^(miR-132-3p)对细胞增殖能力(0.28±0.03vs0.45±0.06)、迁移能力[(193.21±18.93)μmvs(346.51±19.28)μm]、血管形成能力[(6±2)条vs(15±3)条]、凋亡[(29.4±3.4)%vs(15.8±2.9)%]和ERK1/2磷酸化水平(0.16±0.01vs0.47±0.03)的作用效果,差异均具有统计学意义(t=5.05,P=0.007;t=9.23,P=0.005;t=4.67,P=0.009;t=5.82,P=0.004;t=17.14,P=0.001)。结论miR-132-p通过激活MEK1/2-ERK1/2信号通路显著增强NSC-EX对OGD损伤的mBMEC功能的保护作用。