两种人乳腺珠蛋白基因亚型cDNA的克隆及其原核表达

目的克隆hMAM编码全长cDNA,建立hMAM蛋白原核表达系统及其纯化方法,为进一步研究hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定工作基础。方法自乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcDNA,构建pGEX-KG-hMAM表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达,鉴定表达产物的形式后建立目的蛋白的纯化方法。结果乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAMcDNA亚型:hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,二者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;GST-hMAM蛋白在本原核表达系统中以不溶性包涵体形式存在,通过改良的纯化方案可以获得纯化的复性蛋白。结论获得hMAMcDNA并发现一个新的hMAM突变体;hMAM可在pGEX-KG中与GST融合,实现高效表达;通过本法建立的改良的纯化流程,可获得纯度达96.5%的hMAM的两种融合蛋白,为进一步研究两种亚型hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定了工作基础。

人乳腺珠蛋白的研究进展

人乳腺珠蛋白 (hMAM)为乳腺组织特异性蛋白 ,是一种新的可能具有临床应用前景的乳腺癌标志物。近几年国内外研究者对hMAM在乳腺、淋巴结、外周血和骨髓中的表达及其与乳腺癌的关系做了大量工作 ,结果不尽相同 ,提出了不同的观点。

不同细菌中邻苯二酚2，3-双加氧酶基因的研究

芳烃类化合物是较强的致癌物质之一，对人体危害极大。邻苯二酚是许多芳烃类化合物代谢的中间产物。邻苯二酚2，3-双加氧酶(CatO2 ase)也叫变儿茶酚酶(MPC)，存在于一些能分解芳香族化合物的细菌中，它能催化苯环的邻位裂解，将无色或微棕色的邻苯二酚转变成黄色的2-羟粘糠酸半醛(HMS)，

人乳腺珠蛋白基因亚型的原核表达及纯化

目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270 bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功。

乳腺珠蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达及纯化研究

目的克隆乳腺珠蛋白(hum an m amm aglob in,hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。方法自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cDNA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论成功地纯化出hMAM重组蛋白。

人源性MIFcDNA的克隆及其原核高效表达的研究

目的 克隆人MIFcDNA并构建其高效原核表达载体,表达和纯化得到高纯度的可溶性hMIF蛋白。方法 经RT PCR从人乳腺癌细胞株MDA MB45 3中扩增到hMIFcDNA ,并克隆到原核表达载体pET11b中。测序验证后将其转入大肠杆菌BL2 1中表达,最后经离子交换和疏水层析法纯化hMIF蛋白。结果 克隆到的hMIFcDNA与Genebank已发表的序列完全一致,纯化得到的产物经Westernblotting鉴定证实为hMIF蛋白。结论 应用基因重组技术成功构建了pET11b/hMIF重组质粒,在大肠杆菌中实现了高效表达;纯化到高纯度的可溶性hMIF蛋白,为治疗性抗hMIF抗体的研究创造了条件。

妊娠妇女血清总胆汁酸及肝功能的检测

目的：探讨孕妇血清总胆汁酸(TBA)水平变化规律，以减少妊娠并发症。保证胎儿正常发育。方法：采用日立7150型全自动生化分析仪对322例不同孕期的妇女及非孕妇女进行血清TBA及常规肝功能项目对照检查。结果：孕妇血清TBA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)与对照组比较有差异性，但大多数仍在正常范围内；妊娠期肝内胆汁瘀积症(ICP)及中高度妊高征孕妇血清TBA显著增高。结论：孕妇血清TBA随妊娠时间增加而升高，它是ICP及妊高征肝损害早期诊断的一个敏感指标，因此孕妇血清TBA测定应作为一个常规检测项目。

生物信息网络资源在诊断分子生物学教学中的应用初探

在本科生教学过程中利用网络中的生物信息资源,结合第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室的科研方向和已有的条件,对学有余力的检验本科生,开设了"人乳腺球蛋白基因的克隆和序列测定"诊断分子生物学综合实验。通过此综合实验,使学员掌握了科研课题设计的基本理论和方法,为其将来的研究生阶段学习或相关的科研工作打下一定基础。

乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达

[目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(humanmammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序,用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达结果。[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40-hMAM表达成功。

鼠血细胞直方图分析

目的：探讨Wister大白鼠和BABL/c小白鼠血细胞正常参考数值。方法：应用全自动血细胞分析仪对性成熟Wister大白鼠和BABL/c小白鼠随机抽样进行血细胞参数和直方图分析。结果：Wister大白鼠和BABL/c小白鼠血细胞分布宽度(RDW)正常参考值分别为13．5％-27．2％、12．6％-20．4％，雌雄鼠之间无明显差异(P>0．05)；中间细胞(MID)正常参考值分别为9．7％-20．3％、6．8％-27．0％，雌性鼠高于雄性鼠，雌雄之间有显著性差异(P<0．01)；BABL/c小白鼠淋巴细胞(LYM)高于Wister大白鼠。结论：Wister大白鼠和BABL/c小白鼠血细胞直方图参数可为动物学实验、教学及科研提供参考数据。

高空吸纯氧和缺氧状态下对人体心肌酶的影响

目的：研究人体在高空吸纯氧及缺氧状态下对血清心肌酶及心率的影响。方法：将实验者分为吸纯氧组和缺氧组及对照组，前两组在5km高空吸纯氧或不吸氧，对照组不升空，分别测定血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBCH)和心率变化。结果：在5km高空，缺氧时CK增高明显(P<0．05)，血清心肌酶活性随吸纯氧时间延长有逐渐增高的趋势：吸纯氧时血清心肌酶活性随时间延长有逐渐增高的趋势，缺氧时心率随缺氧时间延长而逐渐加快。结论：长时间吸纯氧或缺氧都将对机体产生损害。

Ⅳ型胶原酶联免疫检测方法的改进

目的：建立一种敏感、特异、操作简单的血清Ⅳ型胶原蛋白(COLⅣ)测定方法，并可与肝炎标记物同步进行测定。方法：以免疫家兔制备抗人COLⅣ多抗包被微孔板，采用改良过碘酸钠法辣根过氧化物酶标记抗人COLⅣ单抗，改变各种稀释液成分及浓度，建立双抗夹心酶免疫测定法(ELISA)。结果：最低检测极限为30μg/L，平均回收率为102．75％，批内和批间变异系数分别为<6．0％和11．8％；测定50例健康人，其参考值为97．9μg／L。结论：此方法具有灵敏、准确、稳定、特异性较高、标本用量少、检验用时短，并可与乙型肝炎标志物同时检测的特点，易在临床推广使用。

盐析法快速抽提外周血DNA方法的改进

笔者对盐析法抽提外周血脱氧核糖核酸(DNA)方法进行了改进,从而使其操作方法更加简便、快捷,既可用于聚合酶链反应(PCR)扩增,也可用于限制性内切酶的消化反应等.

生物信息网络资源在本科生诊断分子生物学教学中的应用初探

目的：探讨在教学中如何利用互联网中丰富的生物信息网络资源，提高诊断分子生物学的教学效果和质量的方法。方法：检验本科生教学过程中利用网络生物资源，结合我室科研方向和已有的条件开设了“人乳腺球蛋白基因的克隆和序列测定”诊断分子生物学综合实验。结果：通过综合实验，参加学员初步掌握了互联网中重要核酸和蛋白质数据。结论：为培养和造就符合新世纪需要的新型医学检验人才做了有益的尝试。

以推拿为主治疗陈旧性腰椎间盘突出症

目的:为陈旧性腰椎间盘突出症(LDH)寻找较好的治疗方法和研究治疗机理.方法:LDH患者100例采取推拿“六法”加硬膜外给药的非手术治疗,分析近、远期治疗结果和血液生化指标及磁共振成像(MRI)的变化.结果:近期治愈率为88例(占 88.0%),有效率为95.0%;远期治愈率为22例(占73.3%),总有效率为86.6%;疗后外周血5-羟色胺(5-HT)明显降低,去甲肾上腺素(NE)含量也有下降,远期观察突出的椎间盘有不同程度缩小.结论:本法对LDH具有较好的治疗效果.

人类免疫缺陷病毒感染者及艾滋病患者免疫功能与病毒载量之间的关系

目的探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者和艾滋病(AIDS)患者机体的免疫功能与病毒载量的关系、以此判断疾病的进展,评价抗病毒治疗效果和评估预后情况。方法对226例已确诊的HIV感染血样进行CD4+T淋巴细胞绝对计数、CD4/CD8比值和血浆病毒载量的检测。结果226例HIV感染者或AIDS患者体内CD4+T淋巴细胞绝对数与病毒载量的对数值呈负相关,变化趋势相反,但与CD4/CD8比值呈正相关。结论CD4+T淋巴细胞绝对数是HIV感染者或AIDS患者免疫系统中的"金指标",流式细胞术单平台法是检测CD4+T淋巴细胞绝对数的标准方法,病毒载量则主要是衡量AIDS患者药物疗效必不可少的方法之一。

推拿六法治疗腰椎间盘突出症

目的：为陈旧性腰椎间盘突出症（ＬＤＨ）寻找较好的治疗方法并研究治疗机理。方法：１００例ＬＤＨ患者采取推拿六法加硬膜外给药的非手术治疗，分析近、远期的治疗结果和血液生化指标及磁共振成像（ＭＲＩ）的变化。结果：近期治愈８８例（占８８．０％），有效率为９５．０％；远期治愈２２例（占７３．３％），总有效率为８６．６％；治疗后外周血５－羟色胺（５－ＨＴ）明显降低，去甲肾上腺素（ＮＥ）含量也有下降，远期观察突出的椎间盘有不同程度缩小。结论：本法对ＬＤＨ具有较好的治疗效果。

肝纤维化早期定量诊断方法研究

目的：建立一种敏感、特异、操作简单的血清Ⅳ型胶原蛋白（ＣＯＬⅣ）测定方法，并可与肝炎标记物同步进行测定。方法：以免疫家兔制备抗人ＣＯＬⅣ多抗包被微孔板，采用改良过碘酸钠法辣根过氧化物酶标记抗人ＣＯＬⅣ单抗，改变各种稀释液成分及浓度，建立双抗夹心酶免疫测定法（ＥＬＩＳＡ）。结果：最低检测极限为 ３０μｇ／Ｌ，平均回收率为１０２．７５％，批内和批间变异系数分别为＜６．０％和１１．８％；测定５０例健康人，其参考值为９７．９μｇ／Ｌ，测定２７例肝纤维化病人血清平均值为２５４．８２μｇ／Ｌ。结论：此方法具有灵敏、准确、稳定、特异性较高、标本用量少、检验用时短，并可与乙型肝炎标志物同时检测的特点，易在临床推广使用。

重症监护病房感染的病原菌分析

目的回顾性了解重症监护病房(ICU)感染的病原菌分布特点及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供参考依据。方法对我院住ICU病人标本分离所得病原菌进行统计分析。结果296例阳性标本中革兰阴性杆菌199株占67.3%,其中肠杆菌科155株(52.4%)居首位,假单胞菌属28株(9.5%),不动杆菌16株(5.4%);革兰阳性球菌64株占21.6%,其中金黄色葡萄球菌33株(11.1%)居首位,肠球菌23株(7.8%),凝固酶阴性葡萄球菌7株(2.4%);各类真菌33株占11.1%。标本来源以痰为主(87.2%)。结论ICU感染的病原菌主要为革兰阴性菌,主要引起肺部感染,对其病原菌的监测与分析十分必要,可指导临床合理用药。