火鸡源性成分实时聚合酶链式反应检测方法ISO标准研制

选择火鸡染色体Z DNA序列的特异片段作为检测靶序列,建立了实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,该方法种间特异性和种内一致性良好。将靶序列克隆到pUC57质粒中,通过对不同稀释浓度的质粒样品进行real-time PCR测试,该方法绝对检测限为5拷贝/PCR反应。组织国际协同实验对方法进行验证,方法的假阳性率、假阴性率均为0%,绝对检测限为5拷贝/PCR反应。根据对各实验室不同稀释浓度的质粒样品的定性测试结果对方法进行分析,结果表明,实验室间标准偏差为0.30,低于最大允许值1;在检出概率为95%的情况下,方法的绝对检测限为3.2拷贝/PCR反应,低于最大允许值20拷贝/PCR反应。将该方法提交国际标准化组织(International Organization for Standardization,ISO),经过标准不同的制订阶段投票、征求意见,正式上升为ISO标准(ISO/TS20224-8:2022)。

转基因抗草甘膦油菜籽中FMV 35S启动子的检测研究

对 FMV3 5 S和 FMV3 4S、Ca MV3 5 S启动子的 DNA序列进行了同源性分析 ,并设计引物对转基因抗草甘膦油菜籽中转入的 FMV3 5 S启动子进行了检测 .从 7船进口加拿大油菜籽检出 FMV3 5 S启动子基因 .

转基因抗草丁膦油菜籽检测方法研究

应用PCR技术 ,测试抗草丁膦杂交油菜籽中转入的外源抗草丁膦除草剂基因 (BAR)、雄性不育基因 (BARNASE)和恢复基因 (BARSTAR) ,通过对PCR产物进行克隆和测序 ,建立了检测转基因抗草丁膦油菜籽的技术和方法。

进口肉骨粉中牛成分检测研究

根据 18S核糖体基因保守序列设计引物 ,对牛骨粉、鱼粉、牛肉、羊肉、猪肉、鸡肉、鸭肉、鱼肉的DNA样品进行PCR扩增 ,均得到 13 7bp的扩增片段 ;根据牛线粒体的特异基因片段设计引物 ,对上述材料DNA样品进行PCR扩增 ,结果只在牛肉和牛骨粉中出现 2 71bp的扩增。本实验建立了从进口肉骨粉中检测牛成分的PCR方法 ,检测灵敏度达到牛成分含量为 0 .1% (W/W )的水平。用建立起来的方法对进口肉骨粉、鱼粉和饲料添加剂进行了检测 ,结果在 5批肉骨粉中检测出含有可能导致疯牛病的牛成分。

进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆中CP4-EPSPS基因的检测比较研究

由于国际上对转基因产品的安全性存在较大争议 ,因此对没有加施标签予以声明的情况下大量进入中国市场的转基因产品进行检测就显得十分迫切且意义重大。本研究以进口转基因抗草甘膦油菜籽和大豆为材料 ,通过比较分析外源的CP4 EPSPS基因的核苷酸序列和表达的氨基酸序列 ,设计出两对不同的引物 ,采用PCR方法分别对转基因油菜籽和大豆中外源的CP4

转基因抗草丁膦油菜籽中Barnase基因的实时荧光定量PCR检测

利用荧光定量PCR技术,对进口抗草丁膦油菜籽中的Barnase基因进行了定量检测,分别建立了抗草丁膦油菜籽参照样品外源Barnase基因和内标准HMG基因C t值与模板量之间的标准曲线和线性回归方程,运用所建立起来的方法对14批油菜籽样品进行了定量分析。

玉米粉中转基因Bt176玉米的定量检测

使用根据转基因Bt176玉米中的外源基因CryIA(b)和内源基因Zein设计的引物和TaqMan荧光探针和ABIPRISM 770 0定量PCR仪对玉米粉中Bt176玉米的含量进行了定量检测 ,建立了Bt176玉米参照样品CryIA(b)和Zein的Ct值之差与样品中Bt176玉米含量之间的标准曲线和线性回归方程 。

转基因抗草甘膦油菜内源特异参照基因BnACCg8和外源E93'终止子的检测研究

对转基因抗草甘膦油菜内源特异参照基因BnACCg8和外源基因E93'终止子进行了普通PCR和Taq Man实时荧光PCR检测,建立了相应的检测方法。

利用EAN·UCC编码和转基因标识对转基因产品进行溯源

随转基因产品商业化种植面积不断扩大,转基因产品溯源问题显得越来越重要。转基因产品溯源需要有标准检测方法和转基因产品信息数据库提供技术支撑,可通过同时加施EAN·UCC条码和转基因标识以实现准确溯源。

进口转基因抗Basta^(TM)除草剂油菜籽检测方法研究

建立了从油菜籽中提取总ＤＮＡ和用ＰＣＲ技术检测外源基因的方法，用该方法从进口油 菜籽中检出外源的草丁膦乙酰转移酶基因（ＰＡＴ）、新霉素磷酸转移酶基因（ＮｐｔＩＩ）、花椰 菜花叶病毒３５Ｓ启动子（ＣａＭＶ ３５Ｓ）。

贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

诺沃克病毒是一种分布很广泛的肠道腹泻病毒 ,主要存在于牡蛎、文蛤等贝类中。本研究建立了从贝类中提取诺沃克病毒RNA的方法以及进行实时荧光RT -PCR检测的方法。

加强对转基因大米管理和检测,以应对欧盟严格检查

2011年11月15日,欧委会发出通报,为防止非法转基因成分传入,欧盟各成员国于2012年2月1日起对来自中国米制品实施更为严格入境检查―批批进行转基因检测。新规出台后,我国输欧所有米制品到达欧盟口岸后将被要求对100%批次进行转基因抽查检测,在实验室分析结果出来前不得进入市场销售。欧盟提出4种新的实验室筛查方法,以最大程度避免我国当前正处研发试种阶段、

油菜内源特异参照基因寻找与检测研究

对油菜内源特异参照基因磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEP3-PEPCase,PEP）基因、PCR 检测的引物和相应的靶序列引物进行同源性分析,建立了PEP基因的检测方法。

五种血清型柯萨奇病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

在柯萨奇病毒基因组VP1区设计引物和探针,分别建立了特异性检测5种血清型(A9、A16、B2、B3和B5型)柯萨奇病毒(Coxsackievirus)基于MGB探针的实时荧光RT-PCR方法。通过构建的分别适于5种血清型病毒检测的质粒标准分子对建立的检测体系进行了灵敏度分析,确定5种血清型柯萨奇病毒检测体系的检测下限均为2拷贝质粒标准分子DNA。

转基因棉花及其加工产品溯源研究

该文根据UCC/EAN–128码的编码规则,针对转基因籽棉种植、加工、运输、仓储、销售等5个主要环节进行信息收集,对转基因棉花、棉籽油、棉籽粕进行了UCC/EAN–128码的设计与编码。根据《农业转基因生物标识管理办法》的规定,在转基因产品标签上进行标识。将UCC/EAN–128码和转基因产品标识相结合,可对转基因农产品进行溯源,从而为转基因产品管理提供技术支撑。

转基因抗草甘膦油菜的实用PCR检测方法

利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基因。这种方法可以有效地用于转基因抗草甘膦油菜中的外源基因的检测。

转基因抗草甘膦油菜籽中草甘膦氧化还原酶基因的检测方法研究

应用PCR技术 ,分析草甘膦氧化还原酶基因 (GOX)和修饰草甘膦氧化还原酶基因的核苷酸序列及表达蛋白质的氨基酸序列 。

小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测

设计了小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica)和黑麦草腥黑穗病菌 (Tilletiawalkeri)通用引物H4 /H7和H11/H12 ,结合T .indica特异性引物Tin3/Tin4和T .walkeri特异性引物Tin11/Tin4建立了检测T .indica和T .walkeri冬孢子的套式PCR (nestedPCR)检测方法。检测的灵敏度达 1个冬孢子 ,检测时间缩短为 8h。PCR产物的测序验证了PCR反应的可靠性。这一方法克服了冬孢子休眠或不具存活力以及常规PCR检测时间长的困难 。

套式PCR直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子

用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸印腥检疫的需要 ,解决了常规PCR检测中DNA制备需要萌发冬孢子和检测时间长的难题。