沙门氏菌属特异性核酸探针的研制及应用试验

首先提取鼠伤寒沙门氏菌菌株23566的染色体DNA,并用限制酶BamHI或HindⅢ进行酶切消化,将酶切片段连接到质粒载体pBR325的相应位点中,然后转化大肠杆菌宿主细胞HB101,我们通过这种随机克隆的方法建立了鼠伤寒沙门氏菌染色体的部分基因文库。其次,经广泛的杂交试验表明,重组质粒pLS2和pLS3中的插入片段(大小分别为8.0kb和3.4kb)

应用通用引物PCR法对葡萄球菌B、C1、C2、C3型肠毒素基因的鉴定与分型研究

本实验采用通用引物P1、P2聚合酶链反应(PCR)法对产肠毒素葡萄球菌的entB、entC1、entC2、entC3基因进行了扩增,结果表明,含有这四种肠毒素基因的葡萄球菌都可以产生595bp的特异性扩增片段,其余菌扩增均为阴性;扩增产物分别用在产物内部只有单一识别位点的限制酶HinfⅠ、BclⅠ、MboⅡ和MboⅡ酶切后产生大小不同的片段,因而可以达到酶切分型的目的。经敏感性试验表明,该方法可以检出10~0个细菌。

应用双抗夹心ELISA对葡萄球菌肠毒素的检测与分型研究

本文应用双抗夹心ELISA方法对SEA、SEB、SEC_1、SEC_2和SED五种葡萄球菌肠毒素进行了检测与分型研究。结果表明,该法检测敏感性为 3.125～6.250ng/ml,检测食品标本的敏感性为6.25～12.50ng/ml;对27株食品标本分离菌检测结果发现,3株可以产生SET,其中1株产生SEB、2株产生SED。

金黄色葡萄球菌原生质体的制备

随着生物工程技术的深入发展和广泛使用,有关原生质体的制备和应用技术也日益受到重视。原生质体既可用于细胞融合,又能做DNA转化的受体和提取质粒。金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,细胞壁较厚,要进行这三个方面的研究往往需要制备原生质体,以往报道的制备金黄色葡萄球菌原生质体的方法多采用溶葡萄球菌素进行。