用于生物分离的石墨烯表面可控释适配体支架的设计及实验验证

磁分离是从生物样本中富集特定目标物的常用方法。传统特异性磁分离方法一般通过将抗体与磁珠偶联获得免疫磁珠的方式用于特定目标物的捕获,但由于抗体有成本高、捕获目标物后不易释放等缺点,免疫磁珠难以满足众多研究领域对同时满足目标物大批量、高特异性富集的需求。核酸适配体同抗体一样具备目标物高特异性捕获的能力,相较抗体具有制备成本低、结构简单和化学稳定性高等优点,更适合用来大批量、高特异性富集特定目标物,因此在本研究中,本文利用石墨烯对单链和双链核酸的吸附能力不同的特性,以CD63适配体为例设计了一套可以将适配体展示于石墨烯表面并用于捕获、富集和释放目标物的方法。该设计主要包括2个单元,一是可以贴附于石墨烯表面并将CD63适配体展示于石墨烯外的双链寡核苷酸支架,二是采用与支架足部序列互补的单链寡核苷酸,将所捕获的目标物从石墨烯表面解吸附。本研究首先以氧化石墨烯(GO)纸为石墨烯界面,通过对支架或CD63蛋白等进行荧光标记,并对比支架释放前后及CD63蛋白捕获前后GO纸表面荧光强度变化表示其支架释放效果与CD63蛋白捕释情况,随后应用氨基修饰的石墨烯壳铁氮磁珠搭载CD63适配体双链支架,用于捕获细胞裂解液中CD63蛋白。结果表明,该支架可以将适配体展示于石墨烯表面捕获CD63蛋白并可以可控释放,使用挑选的改性石墨烯磁珠搭载该适配体双链支架,可以用于细胞裂解液中CD63蛋白的捕获。该方法有望实现多种蛋白质的特异性富集或通过捕获外泌体膜蛋白而富集外泌体等多种用途。

造型基础：艺术设计创造力的源泉

1、艺术设计专业造型基础的教学应着重培养创造力 培养创造能力是艺术设计教育最根本的目的和最重要的任务。艺术设计教育主要由三个阶段构成：造型基础、设计基础、专业设计。在造型基础教学中就重视创造意识的引导是培养创造能力的良好时机，为学生日后走上设计之路打下坚实基础。如果老师的教学方法和内容符合创造学的基本规律，那么容易取得事半功倍的效果。这样造型基础课不仅发展学生的造型能力和表现能力还潜移默化地培养了创新意识和方法。因而成为设计创造力的源泉。

医院数字化档案建设面临的困境及消解方法分析

医院数字化档案是指将信息技术实践运用到档案整理中,把纸张、录像和录音等信息作为原始档案材料,将这些重要的信息资料根据不断变化的因素,制定相应的统计方法,运用信息技术手段将其转化为数字化档案,例如声音文件等等,做到资料档案的合理化运用。但是之前医院数字化档案建设通常由于技术不成熟、人力缺乏等多种因素,对档案管理建设与管理的重视程度不够,管理的不规范,使很多工作受阻,只有进行不懈的改善,才能从根本上解决这一问题。

烯壳氮化铁纳米磁珠用于捕获肺癌循环肿瘤细胞的初步研究

存在于血液中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)在癌症的复发与转移中发挥重要作用,因此对循环肿瘤细胞的捕获已成为当前癌症研究的关键问题。抗体依赖性免疫磁珠捕获CTC的方法具有操作简便、快捷等特点,但存在样本量需求大和制备成本昂贵等问题。拟采用一种新型磁珠—等离子体修饰的烯壳氮化铁纳米磁珠(graphene-coated iron nitride magnetic beads,G@FeN-MB)开展捕获肺癌循环肿瘤细胞的初步研究。G@FeN-MB由多层石墨烯包覆,内核为氮化铁,与常用的氧化铁内核相比具有更强的磁响应性。石墨烯作为磁珠包覆壳层,相比市面上磁珠常用的SiO2壳层具有更低的质量、更高的稳定性和更好的生物相容性。将氨基烯壳氮化铁磁珠与羧基烯壳氮化铁磁珠分别通过直接吸附法和碳二亚胺法制备2种链霉亲和素磁珠,并偶联CTC表面标志物上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)的抗体制备氨基免疫磁珠(amino immuno magnetic bead,AIMB)与羧基免疫磁珠(carbaxylic immunomagnetic bead,CIMB)。结果显示,2种免疫磁珠均可捕获A549细胞,AIMB的捕获效率略高于CIMB;为了模拟CTC捕获环境,取健康人血与A549细胞混合制备不同浓度的细胞混液,并利用捕获效率更高的AIMB捕获人血A549细胞,计算被捕获的A549及捕获效率,结果显示,AIMB捕获效率从66.25%~81.50%不等。研究结果证明了基于G@FeN-MB制备免疫磁珠方法的可行性,得到的AIMB可以用于肺癌CTC分选,展现出其应用于临床研究的前景。

烯壳铁氮磁珠介导SurvivinASO对肿瘤细胞的转染和抑制作用

基于石墨烯的生物相容性和对单链核酸的吸附性,研究烯壳铁氮磁珠(graphene-shelled ferro-nitride magnetic beads,GFeNMB)运载靶向Survivin的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)及其对肿瘤细胞的抑制作用。首先用RNA Draw针对Survivin mRNA的二级结构设计ASO,合成FAM标记和未标记的ASO;基于石墨烯对单链核酸的吸附性和对荧光团的淬灭性,采用酶标仪检测荧光强度方法检测GFeNMB对ASO的吸附能力,并对GFeNMB和GFeNMB-ASO表征;磁极作用下将Survivin ASO磁转染至人非小细胞肺癌细胞A549中,荧光显微镜观察GFeNMB将ASO载入细胞的能力;ASO转染后,采用Western blot检测Survivinr的表达,活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒、流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力。结果表明,GFeNMB对ASO具有良好的吸附性,GFeNMB与ASO混合20 min达最大吸附量(0.44µg·mg^(-1));FAM-ASO经磁性载入细胞内呈绿色荧光且集中于细胞核,GFeNMB介导的核转染能力显著优于脂质体;ASO经磁转染至细胞后,Survivin蛋白的降低水平优于未处理组和脂质体转染组;磁转染Survivin ASO后,肿瘤细胞凋亡比例增大,细胞内ROS升高,细胞增殖和迁移能力受到抑制。综上,GFeNMB可将Survivin ASO转染至肿瘤细胞中,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。GFeNMB-ASO磁转染细胞后下调靶基因表达的情况表明,GFeNMB有望成为单链寡核苷酸的转染介质。

阿尔茨海默病患者家庭照料者益处发现与虐待倾向的相关性分析

目的探讨阿尔茨海默病患者家庭照料者益处发现水平与虐待倾向之间的相关性。方法采用中文版益处发现评定量表(benefit finding scale,BFS)和中文版虐待老年人评估量表(the caregiver abuse screen for the elderly,CASE)对绍兴市第七人民医院2020年3月-2021年10月120名阿尔茨海默病患者家庭照料者进行益处发现与虐待倾向水平调查,采用Spearman相关系数分析阿尔茨海默病患者家庭照料者益处发现水平与虐待倾向之间的相关性。结果阿尔茨海默病家庭照料者益处发现总得分为(36.58±3.27)分,总均分为(1.95±0.30)分。照料者虐待倾向得分为0~8分,平均分为(4.72±1.33)分,得分≤2分的22人(占18.33%),得分≥3分的98人(占81.67%)。Spearman相关系数分析显示阿尔茨海默病家庭照料者益处发现水平与虐待倾向得分存在显著负相关关系(r=-0.594,P<0.05)。结论阿尔茨海默病患者家庭照料者益处发现处于较低水平,虐待倾向普遍存在。照料者益处发现水平越低,发生虐待行为的可能就越大。护理人员应采取有效措施提高阿尔茨海默病家庭照料者的益处发现水平,有助于改善其心理状况,减少虐待发生。