以能力提高为导向的基础医学实验教学体系的建设

复旦大学上海医学院医学实验教学中心紧密依托国家基础科学人才培养基金和上海高校本科重点教学改革等系列项目的支持,根据医学实验教学特点和规律,经过多年的探索和实践,在"以学生为本,以能力提高为导向"教学理念指导下,通过构筑综合实验课程体系,采用多元化教学方式和研究型教学模式,开发独具特色的软硬件和配套教材,改进考核方法,建立了基础与临床相结合、教学与科研相结合、虚拟与现实相结合、科学与人文相结合的以提高学生综合能力为导向的立体网络状整合式基础医学实验教学新体系,实现了全面提高学生综合能力的教学目标。

TNF-α和IFN-γ刺激的人脐静脉内皮细胞上IgG受体的表达

目的:检测IgG受体(FcγR)在炎症细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上的表达。方法:采用ELISA、免疫组化染色法、免疫荧光法和RT-PCR等方法,检测FcγRII及其表达。结果:未经细胞因子刺激的正常HU-VEC可表达低水平的FcγRIIa;经2×105U/L TNF-α和1×105U/L IFN-γ联合刺激3d后,FcγRIIa的表达提高16倍(P<0.01)。免疫荧光法检测显示,TNF-α和IFN-γ诱导的FcγRIIa表达于HUVEC表面。RT-PCR结果显示,FcγRIIamRNA表达量在TNF-α和IFN-γ刺激24h后有明显提高。结论:TNF-α和IFN-γ可通过调节FcγRIIa的转录和翻译,增强其在HUVEC上的表达。FcγRIIa的表达可能与血管炎条件下,免疫复合物在血管上的特异性定位有关。

基础医学实验教学技术人员队伍的能力整合与提升

整合式、多学科交叉的综合医学实验课程体系的建设,需要一支兼具复合型技术与管理的高素质实验教学技术人员队伍。在提高思想品德和学历教育的基础上,通过科研能力、管理能力和复合型技术能力的培养和不同实验室轮转工作,打造一支可以融通各个专业实验的"一人多能"的专职技术队伍,并实现现代实验室管理水平的提升。

一体化基础医学实验教学体系的构筑与拓展

为了跟上整合式医学理论课程改革的步划,拟建设全面整合的一体化基础医学实验课程体系,课程内容涵盖了动物、组织、细胞和分子各个水平:第一阶段"基础医学整合实验课Ⅰ"的内容包含动物、细胞与分子的基本实验操作和正常功能观察;第二阶段为配合各个器官系统正常与异常的理论教学的"基础医学整合实验Ⅱ";第三阶段为配合科研素质培养模块,以基于项目学习模式开展设计性和创新性实验教学的"基础医学整合实验Ⅲ"。

基础医学专业《分子生物学理论与实验》教学初探

对《分子生物学理论与实验》课程的框架-网络-应用的教学思想、教学方法和手段进行总结,探索基础医学教育改革。

医科研究生分子生物学技术教学探索与实践

本课程力求打破传统的灌输式教学模式,以培养研究生的实际能力为重。采用多层次、多方式、多时空的教学方法,因材施教。理论与实践相结合,理论课与实验课相融合,寓教于实践,并将课堂教学延伸到研究生论文指导。

复旦大学基础医学院医学实验教学中心

复旦大学基础医学院医学实验教学中心现有专职教职工16人，其中教师7人，实验技术人员9人，是一支教学理念先进、骨干稳定、梯队合理、业务精通、爱岗敬业、团结协作、勇于创新的实验教学团队，承担实验教学课程36门。课程涵盖功能学科群、形态学科群和细胞与分子生物学科群。

天然生物材料壳聚糖支架上人胚肺成纤维细胞的生长

采用不同粒度的硅胶粒子作为致孔剂 ,按硅胶和壳聚糖重量比 9∶1,制备了三组不同孔径的壳聚糖多孔支架 .以无孔壳聚糖支架为参照 ,对多孔支架的有效孔径、吸水性进行了比较 .结果表明 :孔径大小由硅胶尺寸控制 ,吸水性随孔径增大而增大 .为研究支架孔径大小对其生物相容性的影响 ,在系列支架上进行了人胚肺成纤维细胞的培养 .细胞种植 1d后 ,多孔支架上的细胞粘附较多 ,而无孔支架上的细胞伸展情况较好 ;细胞培养 5d后 ,所有支架上细胞伸展情况良好 ,孔径越大的支架上细胞增殖越多 .

咖啡因促受照射肝癌细胞株MHCC97H凋亡的实验研究

目的观察咖啡因促受照射MHCC97H细胞株凋亡的作用及机制。方法通过流式细胞仪分析不同条件下细胞凋亡比例和周期分布,应用Western Blotting动态观察磷酸化CDC2 Tyr15的表达量,利用细胞克隆集落试验证明咖啡因的放疗增敏效果。结果MHCC97H细胞照射后48小时,0、8、16、24 Gy组的凋亡率分别为5.7%、12.0%、19.4%、21.7%;咖啡因促进凋亡,2.5 mmol/L咖啡因组的凋亡比例在照射16 Gy 48小时左右由对照组的19.4%升至32.3%,并且随着时间的推移凋亡比例逐渐增加。辐射引起细胞G2期阻滞,0、8、16、24 Gy组的G2期比例分别为13.9%、25.6%、41.4%、51.6%,G2期阻滞的程度与剂量呈正相关;而咖啡因可去除由辐射引起的G2期阻滞,2.5 mmol/L咖啡因组的G2期细胞比例在照射12小时左右由对照组的37.6%降为29.6%。MHCC97H细胞照射后,G2期阻滞程度与磷酸化CDC2 Tyr15的表达量一致;咖啡因则抑制磷酸化CDC2 Tyr15的表达量。细胞克隆集落试验显示,咖啡因可降低放射后MHCC97H细胞的存活分数,放疗增敏比(SER)为1.28。结论咖啡因通过增加CDC2 Tyr15的脱磷酸化,去除由辐射引起的G2期阻滞,从而促进凋亡,达到放疗增敏的效果。

与胶原浮胶细胞共培养中内皮细胞血管新生相关基因的表达

背景:内皮细胞和平滑肌细胞的相互调节是稳定血管壁结构的关键因素,两者共同培养能够分别影响各自的形态和功能。目的:利用Ⅰ型胶原浮胶建立人脐静脉内皮细胞与人血管平滑肌细胞共培养体系,分析细胞之间的相互作用。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-10/2008-01在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。材料:新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院,产妇知情同意。方法:取新鲜脐带,利用胶原酶灌注法分离人脐静脉内皮细胞,组织块培养法分离人血管平滑肌细胞。人血管平滑肌细胞直接种植于培养板表面,人脐静脉内皮细胞种植于鼠尾Ⅰ型胶原表面制成胶原浮胶,并与培养板上的人血管平滑肌细胞共培养。以人脐静脉内皮细胞单独在浮胶底面培养,培养板表面无人血管平滑肌细胞为对照。主要观察指标:①免疫荧光方法鉴定人血管平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞。光镜和电镜观察人脐静脉内皮细胞形态。②反转录-聚合酶链反应进行基因表达分析。结果:原代培养的内皮细胞呈铺路石样形态,CD31染色阳性。原代培养的人血管平滑肌细胞免疫荧光染色α-SMA呈阳性。胶原支架上内皮细胞伸展,胶原纤维重新排列,24h后出现管腔样结构。在共培养体系中,人脐静脉内皮细胞的金属蛋白酶1和金属蛋白酶9基因表达量显著高于单独培养组人脐静脉内皮细胞的表达量(P<0.05)。但层粘蛋白γ2和组织因子途径抑制物2的基因相对表达量在两组间未见明显变化。结论:实验建立的共培养体系,可以观察到与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞形成更加丰富的网络状管腔样结构,更易于血管结构的形成。

人脐动脉脱细胞支架的制备及其生物相容性

目的:制备脱细胞人脐动脉支架并检测其与内皮细胞的相容性。方法:实验于2005-11/2006-12在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。实验材料:健康新生儿的新鲜脐带(产妇知情同意并自愿捐献)。实验方法:①脱细胞脐动脉支架的制备:分离脐动脉放于离心管中,先用低渗后用等渗的十二烷基硫酸钠处理,再用核酸酶消化。脱细胞脐动脉支架作苏木精-伊红染色、Movat五色法染色及透射电镜观察。②支架与内皮细胞共培养:将脱细胞脐动脉支架切成小块,移入24孔培养板中。实验组每孔接种1.5mL的脐静脉内皮细胞悬液,对照组未种细胞,只加1.5mL的培养液,1周后进行扫描电镜观察。实验评估:①脱细胞脐动脉支架的形态。②血管内皮细胞在脱细胞脐动脉支架上黏附生长情况。结果:①脱细胞脐动脉支架的形态:光镜下对照组样品中观察到深蓝色的细胞核,实验组细胞结构被完全破坏,核破碎后被彻底清除,未见核碎片,血管壁纤维组织染成红色,呈整齐排列,组织结构未见明显的疏松;Movat五色法染色显示,脱细胞血管无红色的细胞质和黑色的细胞核,只见呈现整齐排列的波浪状黑色的弹性纤维,其间散布着蓝色的糖蛋白和网状纤维;透射电镜下观察到交错排列的胶原纤维和弹性纤维,有少量碎片存在,未见细胞样结构。②血管内皮细胞在脱细胞脐动脉支架上黏附生长情况:脐静脉内皮细胞种植于脱细胞脐动脉支架后,扫描电镜观察到可黏附生长并形成完整内膜层。结论:用十二烷基硫酸钠和核酸酶联合消化人脐动脉能够制备良好的脱细胞血管支架,并且对内皮细胞有良好的组织相容性。

骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞构建组织工程瓣膜及其抗血栓作用

目的:分析骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞构建组织工程瓣膜的可行性,评价其抗血栓功能。方法:实验于2005-08/2006-04在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①人骨髓来源为中山医院胸外科手术摘除的一段肋骨(患者知情同意);取健康志愿者静脉血进行血小板黏附观察;新鲜猪心瓣膜取自上海复新屠宰场。②利用胰酶-乙二胺四乙酸、核酸酶处理猪心瓣膜制备脱细胞支架。将摘除的一段肋骨无菌条件下用含肝素的磷酸盐缓冲液充分冲洗骨髓腔,进行骨髓间充质干细胞的分离培养及体外诱导分化。③经体外诱导成的内皮细胞后,种植于瓣膜支架,构建组织工程瓣膜。体外培养1周后,取组织工程瓣膜及未种细胞的空支架做血小板黏附试验。以CD31、vWF对细胞进行鉴定,采用苏木精-伊红染色、免疫荧光及扫描电镜对组织工程瓣膜进行评价。结果:①骨髓间充质干细胞定向诱导为内皮细胞及其性质鉴定:骨髓间充质干细胞定向诱导为内皮细胞后,CD31及vWF染色由阴性转为阳性,呈现出“铺路石”样形态。②瓣膜组织形态观察结果:猪心瓣膜的细胞成分完全去除,胞外基质保存良好,组织工程瓣膜表面形成一连续的内皮细胞单层。③血小板黏附情况:扫描电镜显示空支架表面有大量血小板聚集和黏附,而组织工程瓣膜表面无此现象,显示了良好的抗血栓性能。结论:骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞可以用来构建具有良好的抗血栓性能组织工程瓣膜。

具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架的制备

目的制备具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架材料,为构建组织工程血管奠定基础。方法用含有脱氧胆酸钠、SDS、EDTA的低渗液和等渗液以及核酸酶对猪的胸主动脉进行脱细胞处理,使用HE、Movat五色法、DAPI染色及电镜观察处理结果。以MTT法分析脱细胞溶液的细胞毒性,通过种植内皮和平滑肌细胞,分析支架的细胞相容性。结果上述方法使用的脱细胞溶液细胞毒性低;经该法处理后,血管的细胞成分完全去除,胶原纤维、弹性纤维、糖蛋白等主要基质成分充分保留,组织结构完整,内皮细胞和平滑肌细胞可以在上面黏附生长,形成完整的细胞层。结论利用脱氧胆酸钠、SDS、EDTA和核酸酶联合消化的方法,可制备出基质成分充分保留、细胞相容性优良的脱细胞血管支架,适于构建组织工程血管。

八年制临床医学分子生物学实验教学的思考与建议

为了改变分子生物学教学中各实验之间割裂无联系的状况,在复旦大学医学院临床八年制的分子生物学实验教学中,设计了一个全新的教学实验流程,将整个分子生物学实验教学设计成为一个综合性的系统性实验,使其更具有自主性、趣味性,更有利于培养学生的科研思维能力和写作能力。

分子生物学实验教学中创新能力的培养

本文以分子生物学实验教学的具体实施为内容,来阐述如何培养学生良好的创新能力、科学思维方式和科学探索能力。

肽及其多聚物对人肝癌细胞株与基质黏附的抑制作用

目的研究β肽及其多聚物对肝癌细胞株与基质黏附的抑制作用。方法观察化学合成的β肽(β肽)、化学合成的二聚β肽(β2肽)、化学合成的三聚β肽(β3肽)、用大肠杆菌表达系统表达的表达β3肽及GRGDS对人肝癌细胞株SMM C-7721细胞及人肝癌高转移细胞株HCCLM 6细胞与纤连蛋白(fibronectin,FN)的黏附作用的影响。结果各种多肽对细胞与FN的黏附均具有特异的抑制作用,呈现剂量效应相关关系和时间效应相关关系(P<0.05)。且随着多肽重复次数的增多,对细胞与FN黏附的抑制作用越强,表达β3肽和β3肽的抑制肿瘤细胞黏附的作用最强,β2肽和GRGDS的作用次之,β肽的抑制作用最弱。各种多肽对HCCLM 6细胞与FN黏附的抑制作用强于对SMM C-7721细胞的黏附抑制作用。结论表达β3肽对肝癌细胞株与基质的黏附具有强大的抑制作用,可能成为抗肿瘤转移的新的药物手段。

虚拟实验在功能学实验教学中的应用

虚拟实验已成为现代实验教学的重要方式,已经在物理化学计算机领域的教学中广泛应用。但在基础医学领域尤其是功能学实验教学中,虚拟实验的应用还处于起步阶段。复旦大学上海医学院和上海交通大学医学院合作开发了功能学虚拟实验软件,并探索性的应用于医学本科生的实验教学中,取得了良好的效果。

基于学生视角的基础医学实验教学现状与分析

基于医学知识的迅猛发展及新时代赋予医学教育的神圣使命,基础医学实验教学亟需改革,以培养引领现代医学发展,服务未来健康需求的医学人才。聚焦于学生视角,选择两组具有代表性的临床医学8年制学生调研,一组为刚开始基础医学学习的三年级学生,另一组为已经完成医学专业教育,并进行了一定的科研和临床实践的七年级学生。结果表明,两组学生对传统课程设置和教师带教模式有较高认同;亦认为实验教学有助于理论理解,而对敬业精神和人文素养收效甚微。七年级学生在提倡整合式教学和提高自行设计实验比重方面与三年级学生存在明显差别;在教学内容上,七年级学生更关注前沿技术和研究思路以及掌握常用实验方法,而三年级学生则侧重理论知识理解。两组学生就读经历的调研结果为后续基础医学实验教学改革提供参考,改变了教学改革中学生视角缺席的现状。

对基础医学专业分子生物学教学的思考与建议

分子生物学是基础医学专业学生非常重要的一门必修课,是将来独立进行科研和教学所需的理论知识和科研思维的有力保证。通过对复旦大学上海医学院基础医学专业学生14年的分子生物学授课实践分析,针对这门课程教学中的不足和有待改进的地方提出了相应的可行性建议。

医学生人文素质需求的调查与分析

人文素质同医学知识和医疗技能一样,是医学生必备的基本素质。为了解复旦大学上海医学院医学生对人文素质教育的需求,以部分在校医学生为调查对象,就大学生基本素质以及人文素质在大学生成长中的作用等方面进行调查、分析和讨论,并提出建议和思考。