金复康口服液精简方对顺铂所致肾小管上皮细胞凋亡的作用

为研究金复康口服液精简方(ALG-12)对顺铂(cisplatin,DDP)所致肾小管损伤的作用,将48只C57小鼠随机分为对照组(control)、模型组(model)、DDP组及DDP联用ALG-12低、中、高剂量组,在构建小鼠皮下Lewis肺癌异位移植瘤模型后连续给药16 d,对小鼠肾组织病理变化、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾损伤分子1(kidney injury molecule 1,Kim-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总超氧歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)及肾小管细胞凋亡程度进行分析,考察ALG-12对DDP治疗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)所致肾损伤的影响。体外构建人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)模型,通过cell counting kit(CCK)-8、细胞周期及凋亡实验评价ALG-12含药血清对DDP的HK-2的细胞毒性影响。实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫组化用于分析ALG-12对肿瘤蛋白p53(tumor protein p53,p53)介导的凋亡相关基因的表达水平。结果显示,ALG-12可显著缓解Scr、BUN、Kim-1、NGAL、MDA、T-SOD的异常,减轻肾小管损伤、肾间质纤维化及肾小管细胞凋亡程度,提示ALG-12在体内可以减轻DDP所致的肾损伤。体外细胞实验发现ALG-12含药血清可以抑制DDP造成的HK-2细胞凋亡及周期抑制。另外ALG-12可抑制p53信号通路上共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶(ataxia-telangiectasia mutated-and Rad3-related gene,ATR)、肿瘤蛋白p53基因(tumor protein p53 gene,Tp53)、Bcl-2绑定组件3(Bcl-2 binding component 3,BBC3)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的转录,降低p53、Bax、剪切的半胱天冬蛋白酶3(cleaved caspase-3)的蛋白表达水平,增加B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)及半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达。研究结果表明,ALG-12对DDP所致肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制p53介导的细胞凋亡相关,为进一步开发ALG-12提供依据。