猪流行性腹泻病毒变异株XP2018的分离及S基因序列分析

本研究旨在从临床仔猪腹泻样品中分离猪流行性腹泻病毒(PEDV),并对其S基因进行测序分析。对腹泻仔猪小肠样品进行RT-PCR检测、病毒的分离培养、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定、S基因测序及遗传演化分析。结果显示:仔猪腹泻由流行性腹泻病毒引起;在Vero细胞上成功分离流行性腹泻病毒,命名为XP2018,该毒株细胞病变明显,并且连续传代细胞病变稳定;该毒株S基因全长为4161 bp,与中国经典毒株CV777 S基因核苷酸同源性为92.6%,氨基酸同源性为91.0%;与近年来中国分离的其他毒株S基因核苷酸同源性为96.9%~97.6%,氨基酸同源性为96.9%~98.0%;与美国参考毒株S基因核苷酸同源性为96.9%~97.6%,氨基酸同源性为96.6%~98.3%;遗传进化分析显示XP2018毒株与与目前中国流行毒株在同一分支,与经典毒株CV777不在一个分支上。本研究成功分离1株猪流行性腹泻病毒流行毒株,为PEDV疫苗研发奠定了基础。

不同佐剂对矿化口蹄疫病毒样颗粒免疫效果的影响

为了进一步增强矿化口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫效果,筛选最佳配伍佐剂是当前的研究重点之一。本研究选择不同佐剂与矿化O型口蹄疫病毒样颗粒(FMD VLPs-CaP)配伍,通过肌肉途径接种豚鼠,分析佐剂毒性,不同时间点采血测定其特异性抗体,并于免疫后第28天攻毒,测定其保护率。结果显示,所选国内佐剂的组织毒性较小,有较好的生物相容性,与进口佐剂ISA206之间免疫效果有差异,但其中北京生泰尔生物科技有限公司生产的STR-1佐剂可以达到与进口佐剂ISA206相似的免疫效果,特异抗体效价显著高于ISA206组(P<0.05),且与206佐剂同样能维持28 d,豚鼠攻毒后可以提供100%保护。以上结果表明,STR-1佐剂可作为矿化FMD VLPs疫苗佐剂的候补产品,为口蹄疫疫苗佐剂产品的选择提供了前期研究基础。

塞内卡病毒A结构蛋白T细胞抗原表位的筛选与鉴定

塞内卡病毒A(Senecavirus A)是小RNA病毒科塞内卡病毒属的唯一成员,仔猪感染后死亡率高达30%~70%,给全球养猪业造成了巨大的损失。开展抗原表位的研究对于病原学研究、免疫监测、疾病诊断及表位疫苗设计具有重要意义,细胞免疫作为清除胞内微生物最有效的防御手段,在免疫应答中起到了十分重要的作用。为了筛选塞内卡病毒A结构蛋白T细胞抗原表位,我们构建了真核表达质粒pcDNA3.1-P1,验证体外表达情况后,将其作为DNA疫苗免疫小鼠,通过流式细胞术检测免疫小鼠后刺激淋巴细胞增殖情况,通过酶联免疫斑点试验筛选SVA结构蛋白T细胞抗原表位,最终选择重复率高且效果较好的多肽,经检测,该多肽具有刺激淋巴细胞产生IFN-γ的能力。结果表明,通过对SVA结构蛋白的筛选,发现1号肽(SFDTASGTF)、9号肽(MPFQSLGTY)、11号肽(ITLTFCGPM)、21号肽(TSVDISVPYI)的效果较好,为塞内卡病毒A的T细胞抗原表位。