猪流行性腹泻病毒变异株XP2018的分离及S基因序列分析

本研究旨在从临床仔猪腹泻样品中分离猪流行性腹泻病毒(PEDV),并对其S基因进行测序分析。对腹泻仔猪小肠样品进行RT-PCR检测、病毒的分离培养、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定、S基因测序及遗传演化分析。结果显示:仔猪腹泻由流行性腹泻病毒引起;在Vero细胞上成功分离流行性腹泻病毒,命名为XP2018,该毒株细胞病变明显,并且连续传代细胞病变稳定;该毒株S基因全长为4161 bp,与中国经典毒株CV777 S基因核苷酸同源性为92.6%,氨基酸同源性为91.0%;与近年来中国分离的其他毒株S基因核苷酸同源性为96.9%~97.6%,氨基酸同源性为96.9%~98.0%;与美国参考毒株S基因核苷酸同源性为96.9%~97.6%,氨基酸同源性为96.6%~98.3%;遗传进化分析显示XP2018毒株与与目前中国流行毒株在同一分支,与经典毒株CV777不在一个分支上。本研究成功分离1株猪流行性腹泻病毒流行毒株,为PEDV疫苗研发奠定了基础。

塞内卡病毒A完整病毒和空衣壳的分离及抗体应答分析

塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)在复制过程中可形成完整病毒和空衣壳,它们的分离条件和抗体应答差异目前还是未知的。本研究利用盐酸胍形成SVA空衣壳,通过优化不同的密度梯度、介质、转速、时间条件进行超速离心,获得分离SVA完整病毒和空衣壳的最佳条件,并按SVA完整病毒12.5μg·只-1,空衣壳12.5μg·只^(-1)肌肉注射免疫BALB/c小鼠,免疫后1~7周检测特异性抗体和中和抗体。结果显示,SVA的MOI=1时感染细胞2 h加入100 mmol·L^(-1)盐酸胍可以使SVA完整病毒全部形成空衣壳;在10%~50%氯化铯,36000 r·min^(-1),离心2.5 h是区分SVA完整病毒和空衣壳的最佳条件;而且SVA完整病毒与空衣壳诱导小鼠的特异性抗体和中和抗体水平无显著差异(P=ns)。本研究为塞内卡病毒A完整病毒和空衣壳的分离纯化、重组SVA病毒样颗粒疫苗的开发提供参考。

不同佐剂对矿化口蹄疫病毒样颗粒免疫效果的影响

为了进一步增强矿化口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫效果,筛选最佳配伍佐剂是当前的研究重点之一。本研究选择不同佐剂与矿化O型口蹄疫病毒样颗粒(FMD VLPs-CaP)配伍,通过肌肉途径接种豚鼠,分析佐剂毒性,不同时间点采血测定其特异性抗体,并于免疫后第28天攻毒,测定其保护率。结果显示,所选国内佐剂的组织毒性较小,有较好的生物相容性,与进口佐剂ISA206之间免疫效果有差异,但其中北京生泰尔生物科技有限公司生产的STR-1佐剂可以达到与进口佐剂ISA206相似的免疫效果,特异抗体效价显著高于ISA206组(P<0.05),且与206佐剂同样能维持28 d,豚鼠攻毒后可以提供100%保护。以上结果表明,STR-1佐剂可作为矿化FMD VLPs疫苗佐剂的候补产品,为口蹄疫疫苗佐剂产品的选择提供了前期研究基础。

塞内卡病毒A结构蛋白T细胞抗原表位的筛选与鉴定

塞内卡病毒A(Senecavirus A)是小RNA病毒科塞内卡病毒属的唯一成员,仔猪感染后死亡率高达30%~70%,给全球养猪业造成了巨大的损失。开展抗原表位的研究对于病原学研究、免疫监测、疾病诊断及表位疫苗设计具有重要意义,细胞免疫作为清除胞内微生物最有效的防御手段,在免疫应答中起到了十分重要的作用。为了筛选塞内卡病毒A结构蛋白T细胞抗原表位,我们构建了真核表达质粒pcDNA3.1-P1,验证体外表达情况后,将其作为DNA疫苗免疫小鼠,通过流式细胞术检测免疫小鼠后刺激淋巴细胞增殖情况,通过酶联免疫斑点试验筛选SVA结构蛋白T细胞抗原表位,最终选择重复率高且效果较好的多肽,经检测,该多肽具有刺激淋巴细胞产生IFN-γ的能力。结果表明,通过对SVA结构蛋白的筛选,发现1号肽(SFDTASGTF)、9号肽(MPFQSLGTY)、11号肽(ITLTFCGPM)、21号肽(TSVDISVPYI)的效果较好,为塞内卡病毒A的T细胞抗原表位。