离子交换-乙二胺四乙酸滴定法测定果糖1,6-二磷酸钠镁中镁的含量

目的 :测定果糖1 ,6-二磷酸钠镁中镁的含量。方法 :采用离子交换 -乙二胺四乙酸滴定法。结果 :用本方法测定样品 ,精密度和准确度均<0 52% (n=6) ;平均回收率为99 7%。结论 :本方法操作简便,测定结果准确 ,能满足果糖1,6

抗肝纤维化姜黄素脂质体的制备及初步稳定性考察

目的:制备姜黄素(Curcumin,Cur)脂质体并考察其包封率及稳定性。方法:采用逆相蒸发法制备Cur脂质体,葡聚糖凝胶柱层析法分离含药脂质体与游离药物并测定包封率;正交设计优选制备处方;离心加速实验与渗漏率的测定考察脂质体的稳定性。结果:所得优化处方为磷脂与药物的重量比60:1,磷脂与胆固醇的重量比4:1,pH6.5的磷酸盐缓冲液水合递质,超声时间为5min。以优化处方制得的脂质体平均包封率达95.06%。结论:选用逆相蒸发法优化Cur脂质体处方合理,工艺简便可行,包封率高,稳定性好。

阿霉素脂质体的制备及对MCF-7/DOX作用的考察

目的:制备阿霉素(Doxorubicin,DOX)脂质体,并考察其对耐阿霉素的人乳腺癌细胞(MCF-7/DOX)的作用。方法:采用硫酸铵梯度法制备脂质体;采用MTT法考察DOX脂质体对MCF-7/DOX的细胞毒性和逆转多药耐药(Multydrug resistance,MDR)的效果。结果:阿霉素的平均包封率为90.77%。脂质体的细胞毒性实验结果显示,DOX脂质体的IC50比游离DOX小4倍;DOX脂质体对MCF-7/DOX的逆转倍数是游离DOX的4倍。结论:硫酸铵梯度法适用于制备DOX脂质体,其具有较好的细胞毒性作用及一定的逆转MCF-7/DOXMDR的作用。

粉防己碱-阿霉素复合脂质体的制备及质量控制评价

目的:制备粉防己碱-阿霉素复合脂质体并对其工艺及质量进行研究与评价,为临床上逆转肿瘤的多药耐药提供新的思路。方法:采用3种不同脂质体制备方法,并以包封率为指标进行处方筛选和工艺优化。结果:确定了硫酸铵梯度法结合pH梯度法制备复合脂质体的最佳处方最佳处方为:药脂比1∶20,磷脂-胆固醇比例3∶1,外水相pH值为7.6,硫酸铵浓度为250mmol/L。以该处方制备的脂质体DOX的平均包封率为90.77%,TET的平均包封率为80.12%。结论:该处方制备的粉防己碱-阿霉素复合脂质体包封率及外观良好,在低温充氮条件下较稳定,为进一步实验奠定了基础。

IL-2免疫靶向脂质体的制备及稳定性研究

目的:寻求一种简便、快速、结合率高的制备白介素-2(Interleukin-2,IL-2)免疫脂质体的方法。方法:分别用戊二醛法、十一醛法、衍生化法制备IL-2免疫脂质体。对上述几种制备方法进行分析比较,Bradford比色法测定IL-2的结合效率;离心加速实验考察脂质体稳定性。结果:十一醛法通过席夫碱一对一的结合IL-2和脂质体,不会引起IL-2、脂质体自身相互交联,结合率高,稳定性好。结论:拟采用十一醛法作为后期细胞实验中IL-2免疫脂质体的制备方法。

醛缩酶-DNPH比色法测定D-果糖-1,6-二磷酸盐的含量

对多酶法测定果糖二磷酸盐含量提出改进 ,仅使用一种具有专属性的醛缩酶。醛缩酶催化果糖 - 1,6 -二磷酸 (FDP)降解 ,生成的磷酸二羟丙酮和 3-磷酸甘油醛直接与 2 ,4-二硝基苯肼缩合成紫红色的苯腙。在 5 40 nm波长处测定吸收度。本法测定 FDP有专属性高、省去三种酶试剂。

果糖-1,6-二磷酸钙的制备研究

首次报道了一种简易 ,便于工业生产的分离精制果糖二磷酸钙 (Ca2 FDP)的新方法 .本法主要改进之处是发酵液先采用调节 pH生成沉淀步骤除去大量杂质 ,Ca2 FDP粗品又经酸碱沉淀步骤除去剩余杂质 ;由以上二个缓和简便的固液分离操作 ,能除去难分离的己糖磷酸酯、磷酸盐、多糖等杂质 .由本法获得的Ca2 FDP不仅在FDP含量、杂质限量等主要质量控制指标上达到药用标准 。

TLC法考察阿霉素脂质体的稳定性

目的:通过以TLC分离阿霉素脂质体各组分及其降解产物,考察其作为阿霉素脂质体稳定性评价方法的适用性以及进行方法改进。方法:分别用4种TLC展开系统进行2次展开,用4-甲氧基苯甲醛显色。结果:以氯仿-甲醇-水-氨水(65∶35∶2.5∶2.5)作展开剂,分离效果较好。结论:TLC法操作简便、重复性好,可用作脂质体质量控制的一种方法。

粉防己碱脂质体的制备及其稳定性研究

目的:比较粉防己碱脂质体2种制备方法。方法:采用硫酸铵梯度法和薄膜分散法制备粉防己碱脂质体,从渗漏率、粒径大小、磷脂含量3个方面进行稳定性比较,从包封率方面进行质量比较。结果:硫酸铵梯度法制备的粉防己碱脂质体包封率高达81.1%,且稳定性好;薄膜分散法包封率仅为32.9%,且稳定性欠佳。结论:硫酸铵梯度法较薄膜分散法制备粉防己碱脂质体更优。

维生素A-姜黄素脂质体的制备及细胞毒性研究

目的制备肝星状细胞靶向维生素A-姜黄素脂质体(VA-CUR-L),并进行体外细胞毒性实验。方法采用逆相蒸发法制备VA-CUR-L,测定其包封率及VA结合率;脂质体分别在4,25℃下密闭放置30 d,以包封率、VA结合率及过氧化值为指标考察其稳定性;以视黄醇结合蛋白受体高表达的鼠肝星状细胞HSC-T6和无视黄醇结合蛋白受体表达的人食管癌细胞A-549为细胞模型,采用MTT法考察该脂质体的细胞毒性及靶向性。结果脂质体平均包封率为89.32%,VA结合率为61.34%;脂质体于4℃贮存较稳定;细胞实验显示,游离姜黄素、姜黄素脂质体及VA-CUR-L对HSC-T6的IC50值分别为31.53,14.95和8.28μg·mL-1,姜黄素脂质体和VA-CUR-L对A-549细胞作用相当。结论 在最佳工艺条件下制得的VA-CUR-L包封率高、稳定性好,且可特异性靶向作用于肝星状细胞,提高药物疗效。

粉防己碱阿霉素脂质体的制备与体外释放度的研究

目的以阿霉素和粉防己碱为模型药物制备脂质体并进行工艺研究,同时对该脂质体进行体外释放度的研究。方法采用3种不同脂质体制备方法,并以包封率为指标采用正交设计法进行处方筛选和工艺优化。结果确定了硫酸铵梯度法结合pH梯度法制备脂质体的最佳制备处方为:药脂比为1∶20,磷脂与胆固醇质量的比例为3∶1、外水相pH值为7.6,孵育温度50℃、硫酸铵浓度为250mmol/L。释放度试验显示脂质体中阿霉素和粉防己碱分别在24h和16h内完全释放。结论制备的粉防己碱阿霉素脂质体包封率及外观良好,具有一定的缓释效果。

5-氟尿嘧啶核苷前药脂质体中磷脂含量的测定

目的：建立测定5-氟尿嘧啶核苷（5-FUR）前药脂质体中磷脂含量的方法。方法：以乙醇裂解5-FUR前药脂质体，用氯仿萃取后，在488nm波长处用硫氰铁铵显色法测定脂质体中磷脂的含量。结果：磷脂检测浓度的线性范围为0.01-0.10mg·mL^-1（r=0.9996，n=3）；平均回收率为99．66％（RSD=3．17％）。结论：本方法简便、快速、灵敏，可用于5-FUR前药脂质体的质量控制。

促黄体激素释放激素-甲氨蝶呤的合成及抗肿瘤活性

目的:合成促黄体激素释放激素-甲氨蝶呤(LH-RH-MTX)并研究其抗肿瘤活性。方法:将APA与[D-Lys6]LH-RH共价连接合成LH-RH-MTX;用半制备型反相HPLC进行纯化与定量,用ESI-MS进行结构确证;应用MTT法检测其对人卵巢癌SKOV-3细胞的抗肿瘤活性。结果:LH-RH-MTX的纯度为98.00%,产率为61.96%;ESI-MS分析得产物分子量为1 268.15。MTT实验结果表明LH-RH-MTX对人卵巢癌SKOV-3细胞具有明显的抗肿瘤活性。结论:LH-RH-MTX可与表达有LH-RH受体的肿瘤细胞特异性结合并发挥作用,作用优于游离MTX。

长春瑞滨脂质体作用于HNE-1鼻咽癌细胞后药物浓度的检测

目的研究长春瑞滨脂质体作用于HNE-1鼻咽癌细胞后细胞内的药物浓度。方法采用HPLC法来考察长春瑞滨脂质体和长春瑞滨原料药分别作用于HNE-1鼻咽癌细胞后,1、3、6 h时细胞内外的药物浓度。结果长春瑞滨脂质体组的细胞内药物浓度比原料药组的药物浓度有显著提高(P<0.05)。结论长春瑞滨脂质体能提高药物进入HNE-1鼻咽癌细胞的速率和总量。

5-氟尿苷棕榈酸酯脂质体的制备及其细胞毒性研究

目的制备前药5-氟尿苷棕榈酸酯(5-FURP)脂质体,并进行体外细胞毒性实验。方法通过正交实验设计筛选5-FURP脂质体的最佳处方,采用逆向蒸发法制备5-FURP脂质体,测定其包封率及理化性质;以人乳腺癌细胞系MCF-7、人鼻咽癌细胞系CNE-1、人喉癌细胞系HEP-2为模型细胞,考察5-FUR前药脂质体的细胞毒性。结果制备的脂质体平均包封率为94.35%,将脂质体分别在4和25℃下密闭放置1个月,以包封率、脂质体中磷脂含量变化为指标考察其稳定性。结果显示,脂质体于4℃贮存时,上述指标无显著变化,脂质体比较稳定;细胞实验表明,5-FURP经脂质体包裹后,细胞毒性较游离药物增高,对人乳腺癌细胞系MCF-7、人鼻咽癌细胞系CNE-1、人喉癌细胞系HEP-2的IC50分别是游离药物的5.0,3.4,2.6倍。结论实验室制备的5-FURP经脂质体包裹后能增强细胞摄取,具有提高药物疗效的效果。

透明质酸磷脂酰衍生物修饰姜黄素脂质体的制备及细胞毒性

采用逆相蒸发法制备了姜黄素脂质体。由于透明质酸脂溶性较差,先将其制成磷脂酰衍生物(透明质酸-磷脂酰乙醇胺,HA-DOPE),再用以修饰载药脂质体。所得脂质体的平均包封率为89%,该衍生物与脂质体的结合率为72%。脂质体于4℃保存30 d包封率无明显改变,但结合率有轻微下降。细胞毒性试验显示,游离姜黄素、姜黄素脂质体及修饰后脂质体对高表达CD44受体的人肺腺癌A549细胞的IC50值分别为0.054、0.032和0.021 mol/ml,未修饰和修饰后的姜黄素脂质体对低表达CD44受体的人肝癌HepG2细胞作用相当。

肽修饰的甲氨蝶呤体外抗肿瘤作用初步研究

本文以人乳腺癌MCF-7细胞及人红白血病K562细胞作为受试细胞,分别采用MTT比色法、流式细胞仪、RT-PCR技术检测促黄体激素释放激素肽修饰的甲氨蝶呤(methotrexate modified by luteinizing hormone-releasing hormone peptide,LH-RH-MTX)对细胞增殖的抑制作用以及对细胞周期和凋亡、LHRHR mRNA表达量的影响。结果显示,LH-RH-MTX对MCF-7细胞增殖的抑制作用明显高于K562细胞;相同浓度的LH-RH-MTX对MCF-7细胞增殖的抑制作用明显高于游离MTX,对鼠骨髓单核细胞的抑制作用明显小于游离MTX;经LH-RH-MTX作用后,S期细胞明显增加,细胞凋亡率明显升高,LHRHR mRNA的相对表达量明显下降。LH-RH可作为导向分子将药物靶向递送到LHRHR高表达的肿瘤细胞,降低药物的毒副作用,提高治疗指数。

白介素-2靶向5-氟尿苷棕榈酸酯脂质体的制备及细胞毒性研究

目的制备了白介素-2(IL-2)靶向5-氟尿苷棕榈酸酯(5-FURP)脂质体,并进行了体外细胞毒性,初步考察其对IL-2受体高表达的肿瘤细胞的靶向作用。方法采用逆相蒸发法制备5-FURP脂质体,通过交联剂将IL-2连接到脂质体的表面,得IL-2靶向5-FURP脂质体(IL-2-5FURP-L);UV法测定包封率;用考马斯亮蓝结合法测定IL-2与脂质体的结合率;用MTT法测定脂质体对IL-2受体高表达的皮肤T细胞淋巴瘤Hut-102细胞的生长抑制作用。结果 IL-2-5-FURP-L的粒径为180 nm;药物平均包封率为91.3%;IL-2的结合率为56.0%;在pH7.4的释放介质中,脂质体具有缓释作用;MTT实验结果显示,IL-2-5-FURP-L呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞的生长,72 h细胞毒性试验表明IL-2-5-FURP-L对Hut-102的杀伤作用(IC50=1.04μg.mL-1)明显优于5-FURP-L(IC50=6.11μg.mL-1)及5-FURP(IC50=7.35μg.mL-1)。结论 IL-2修饰的载药脂质体具有明显的抑瘤作用和主动靶向作用。

维生素A修饰的姜黄素脂质体的制备及质量评价

采用逆相蒸发法制备维生素A修饰的姜黄素脂质体,以包封率和维生素A结合率为指标用正交实验优化处方,并对包封率、结合率、粒径和体外释放作初步考察。所得粒径小于1.58μm的脂质体粒子平均占有率为57%,平均包封率为89.3%,维生素A的平均结合率为61.3%。

叶酸-葡聚糖-5-氟尿嘧啶靶向药物的合成及细胞毒性研究

目的制备叶酸-葡聚糖-5-氟尿嘧啶靶向药物(FA-DEX-5-Fu)并考察其对叶酸受体(FR)高表达的肿瘤细胞的毒性作用。方法 以葡聚糖(DEX)为大分子载体与抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)合成5-Fu-DEX,再与靶向配体叶酸(FA)偶联,制备FA-DEX-5-Fu。采用UV、IR、ESI-MS进行结构确证;利用UV测定复合物中FA及5-Fu的含量;采用MTT检测游离5-Fu、5-Fu-DEX、FA-DEX-5-Fu对高表达FR的人宫颈癌Hela细胞及低表达FR的人肺癌A549细胞的细胞毒性作用。结果 UV、IR、ESI-MS分析表明,5-Fu和FA成功连接到DEX上。通过测定FA-DEX-5-Fu中5-Fu与FA的含量,计算出在复合物中5-Fu与FA的摩尔比为2.7∶1。MTT实验结果表明,FA-DEX-5-Fu对Hela细胞的增殖抑制作用明显高于A549细胞;相同浓度的FA-DEX-5-Fu对Hela细胞的增殖抑制作用明显强于5-Fu及5-Fu-DEX。结论本实验成功合成了FA-DEX-5Fu,且该复合物对FR高表达的肿瘤细胞有明显的靶向作用。