类风湿性关节炎患者滑膜组织中HIF-1α与MMPs相关性研究

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者滑膜组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与基质金属蛋白酶家族成员(MMPs)表达的相关性。方法利用real-time PCR方法检测RA和骨关节炎(OA)患者滑膜组织中HIF-1α和MMPs的表达并进行相关性分析。结果 RA滑膜组织中HIF-1α、MMP-1、MMP-3、MMP-9与MMP-13 mRNA表达量显著高于OA对照组,且RA滑膜组织中高表达的HIF-1α与MMP-9呈显著的正相关。结论 RA滑膜组织中高表达的HIF-1α可能参与调控MMP-9的表达,参与RA的病理变化进程。

IL-17调控类风湿性关节炎滑膜细胞SENP6表达与Cyr61关系初探

探讨IL-17调控类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞SENP家族分子表达与Cyr61表达间的关系,取8例类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞进行原代培养与鉴定,并利用real-time PCR检测了经IL-17刺激后,滑膜细胞中SENP家族分子与Cyr61表达格局。结果显示:经IL-17刺激后,有四例滑膜细胞Cyr61的表达上调,同时SENP6的表达也上调,另外四例经IL-17刺激Cyr61未见上调的滑膜细胞,其SENP6的表达却未见上调。初步分析表明IL-17调控类风湿性关节炎滑膜细胞SENP6表达与Cyr61表达存在正相关性,提示SENP6可能在IL-17刺激类风湿性关节炎滑膜细胞Cyr61的表达中起着调控作用。

组蛋白去乙酰化酶1通过NF-κB调控炎症性滑膜细胞表达Cyr61

本研究探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase enzyme,HDAC)在IL-17上调类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞Cyr61表达过程中的调控机制。通过real-time PCR分别检测了滑膜组织和细胞中的HDAC表达格局,HDAC抑制剂曲古抑菌素(trichostatin,TSA)和尼克酰胺(nicotinamide,NAM)作用于滑膜细胞及其相关信号通路变化后IL-17上调Cyr61的表达格局。结果显示:RA病人滑膜组织和细胞中高表达HDAC1,并且IL-17刺激又能促进滑膜细胞的HDAC1表达升高。TSA能上调IL-17诱导滑膜细胞Cyr61的表达,而NAM不能。加入NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)能够明显的抑制TSA对Cyr61的上调作用。以上结果提示HADC1通过作用于转录因子NF-κB参与了IL-17上调滑膜细胞表达Cyr61的过程。

软骨蛋白聚糖诱导的脊柱关节炎小鼠模型的建立及富含半胱氨酸蛋白61单克隆抗体治疗效应初探

目的尝试建立SpA的小鼠模型,分析小鼠的临床表型及影像学和病理学特征。并初步探讨富含半胱氨酸蛋白61(CCN1)在SpA小鼠模型中的治疗作用。方法牛软骨蛋白聚糖和弗氏佐剂免疫14~16周龄雌性BALB/c小鼠,诱导SpA。SpA小鼠腹腔注射CCN1单克隆抗体093G9或者无关抗体免疫球蛋白(Ig)G。对小鼠外周关节炎进行评分,采用t检验进行统计分析,分析其外周及中轴关节Mirco-CT和组织病理学表现。结果免疫后小鼠从第8周陆续出现外周关节炎症,这一表现在第11周达到高峰[关节炎评分(10.5±1.5)]。第12周踝、膝关节骨赘形成,腰、尾椎椎间盘炎,膝关节半月板和腰椎椎间盘软骨细胞聚集。第18周胸、颈椎也出现椎间盘炎,伴软骨生成。2次CCN1单克隆抗体093G9治疗后的SpA小鼠外周关节炎评分明显下降,治疗组及正常对照组分别为[(2.8±1.3)和(4.2±2.1),t=2.516,P<0.05]。8次治疗后2组关节炎评分差异有统计学意义,治疗组为(2.0±2.0),而正常对照组为(5.3±2.0)(t=4.082,P<0.01)。治疗组外周关节炎症减轻,新骨形成减少,中轴关节椎间隙狭窄和新骨形成改善。结论本研究建立的SpA小鼠模型可以基本模拟人类SpA,包括外周、中轴炎症及新骨形成。CCN1单克隆抗体可改善SpA小鼠模型的炎症和新骨形成。

重组人白细胞介素21在毕赤酵母中的分泌表达及活性分析

为了获得有活性的重组人白细胞介素21(rhIL-21),本研究建立了在毕赤酵母(Pichia pastoris)中分泌表达rhIL-21的技术。首先,通过RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增IL-21cDNA,克隆到酵母表达载体pPIC9K中,构建了重组酵母表达载体pPIC9K-hIL21 cDNA;然后,线性化的载体转化毕赤酵母表达菌株GS115,经抗性梯度筛选获得了多拷贝重组酵母菌;加入甲醇诱导培养后,SDS-PAGE和Western blotting检测到培养液中有rhIL-21的分泌表达,相对分子量约为16kD,ELISA结果显示摇瓶表达量可达229.28mg/L;表达上清经阳离子交换介质SPSepharose Fast Flow纯化后,目的蛋白纯度达到95%。细胞增殖试验结果显示该rhIL-21联合刀豆蛋白A(ConA)对人淋巴细胞的增殖具有显著的促进作用。本研究首次成功在毕赤酵母表达系统中分泌表达了有生物活性的rhIL-21,为相关疾病免疫治疗的研究奠定了基础。