黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础。根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,同时检测生物活性。结果表明我们成功构建了重组质粒pET-30a-TmAMP3,大部分目的蛋白呈可溶性分泌表达。经Ni2+亲和层析,获得较纯融合蛋白HIS-TmAMP3,诱导表达的融合蛋白使BL21转化菌生长受到一定程度的抑制。融合蛋白在100℃煮沸10h、与pH2～12的缓冲液混匀后,依然保持稳定的抗菌活性,具有较强的稳定性。同时检测了融合蛋白对5种菌株的最小抑菌浓度(minimun inhibitory concentration,MIC)。本研究为具有稳定活性抗菌肽进行大规模生产发酵提供了理论基础。

荒漠昆虫光滑鳖甲(鞘翅目:拟步甲科:鳖甲族)的人工饲养方法

为了解决深入研究荒漠甲虫环境适应机制时所遇到的各发育阶段试虫材料短缺的问题,本文介绍了饲养拟步甲科鳖甲族昆虫光滑鳖甲Anatolica polita Kaszab的有效方法。将早春季节在野外采集的成虫饲养在2 L的塑料烧杯中,收集卵。用玻璃培养皿孵育卵;用改装的盛有沙土的矿泉水瓶单只饲养3龄以上幼虫,以防止幼虫自相残杀。为保持幼虫饲养瓶内的适当湿度,在瓶子底部加入72 mL的水,再装入800 g沙子,借助毛细现象,形成渐变式含水基质,在最上层的干沙表面加麦麸以饲养幼虫。如需观察计数,可将预蛹、蛹和初孵成虫置于玻璃培养皿中培养。采用此方法饲养的光滑鳖甲可顺利完成生活史,其卵的孵化率为68.67%±2.45%,1～2龄幼虫的存活率为82.95%±7.72%,3～9龄幼虫的存活率为73.80%±4.95%;预蛹、蛹和幼嫩成虫的存活率分别为84.68%±2.35%、88.45%±2.75%和90.56%±4.20%。该方法可以有效实现光滑鳖甲的室内饲养,并可用于其他一些沙栖拟步甲科昆虫的人工饲养。

两种温度下异长足漠甲(鞘翅目：长足漠甲族)幼期生长发育比较

本研究首次报道温度对异长足漠甲Adesima anomala dejeani Gebl生长发育的影响。异长足漠甲的整个变态过程饲养使用矿泉水瓶法,并优化了此方法,避免过度失水,进行加水并同时观察。随着温度的升高,发育历期缩短,30℃饲养条件下异长足漠甲的总发育历期为117.4 d,33℃的总发育历期为90.99 d;2龄期、5龄期幼虫的头壳长和宽,前胸长和宽,体长,在33℃饲养条件下显著高于30℃;7龄期幼虫的头壳长和宽,前胸宽,体长,在33℃饲养条件下显著高于30℃;5龄期幼虫,温度30℃时的体重为(0.0634±0.021)g,33℃时的体重为(0.0906±0.0313)g,差异显著;6龄期幼虫,蛹期、孵化成虫在温度30℃时存活率高于33℃。