脂多糖结合蛋白在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用

目的:探讨脂多糖结合蛋白(LBP)在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用。方法:挑选ICU的患者共80名,患者分为全身炎症反应综合征(SIRS)组(阴性对照组)、脓毒症存活组和脓毒症死亡组;所有患者均于进入ICU后24 h内采集血清样本并进行APACHEⅡ评分分析;另挑选10名健康志愿者血清作为正常对照组;ELISA检测各组样本血清LBP、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)浓度;并以APACHEⅡ评分、血清LBP、CRP和PCT浓度对脓毒症诊断和预后预测做ROC曲线,评价LBP在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用。结果:与SIRS组相比,脓毒症组的APACHEⅡ评分、血清LBP、CRP、PCT浓度均升高(P<0.05);与脓毒症存活组相比,死亡组的APACHEⅡ评分和血清LBP浓度升高(P<0.05),而血清CRP和PCT浓度在脓毒症存活组与死亡组之间的差异无统计学意义;LBP血清浓度高于26.84 mg/L时诊断脓毒症的敏感性和特异性分别为97.1%和95.9%;LBP血清浓度高于54.16 mg/L时预测脓毒症预后的敏感性和特异性分别为85.2%和80.0%。结论:与传统的脓毒症生物标志物CRP、PCT相比,LBP在脓毒症的诊断和预测方面都具有更好的效果。

小干扰RNA分子对乙肝病毒复制的抑制作用研究

目的筛选特异高效抗乙型肝炎病毒(HBV)的小干扰RNA分子(siRNA),评价其干扰效果。方法在HepG2.2.15细胞内导入筛选的3条特异抗HBV的siRNA分子,用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测干扰后HBV的mRNA表达水平;Westernblot检测细胞上清中乙肝表面抗原(HBsAg),分析siRNA对HBV基因表达的抑制作用。结果导入特异siRNA分子细胞中HBV的mRNA表达量明显降低(P<0.05),上清中HBsAg含量显著减少。阴性对照细胞中HBV的mRNA含量和上清中HBsAg含量基本不变(P>0.05)。结论所筛选的siRNA分子能特异性抑制HBV的mRNA和蛋白的合成。

实时荧光定量RT-PCR技术检测siRNA对HBV复制的干扰效果

目的运用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测小RNA分子(small interfering RNAs,siRNA)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的抑制作用。方法在HepG2.2.15细胞内导入筛选的三条特异抗HBV的siRNA分子,用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测干扰后HBV的mRNA表达水平。结果导入特异siRNA分子的细胞中HBV的mRNA表达量明显降低。结论实时荧光定量RT-PCR技术能准确可靠的检测mRNA的表达水平,对siRNA分子干扰效果的评价有很好的应用价值。

HIV-1 pol基因人工miRNA的构建和功能分析

以miR-155为基础骨架,根据HIV-1 pol基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,构建4个人工miR-pol,并对其进行功能分析.qPCR结果显示,4个人工miR-pol对pol基因都具有一定的沉默效果,其中miR-pol-4的沉默效率最高,达76%.进一步的实验证实miR-pol-4不会影响被转染细胞的活性,也不会对细胞干扰素的表达产生影响.此外,HIV-1假病毒实验显示,miR-pol-4对HIV-1的复制具有良好的抑制作用.因此,所获得的miR-pol-4将可为进一步的抗HIV-1感染研究提供基础.